Apoptoseinduktion von Humankeratinozyten durch Methotrexat:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2000
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1
EINLEITUNG
1
1.1
APOPTOSE
-
DIE
AKTIVE
SELBSTZERSTOERUNG
DER
ZELLE
1
1.1.1
DEFINITION
1
1.1.2
MORPHOLOGIE
2
1.1.3
MOLEKULARE
REGULATION
3
1.1.4
BEDEUTUNG
FUER
DIE
DERMATOLOGIE
7
1.2
METHOTREXAT
(MTX)
10
1.2.1
PHARMAKOLOGIE
10
1.2.2
PHARMAKOKINETIK
VON
METHOTREXAT
IN
DER
EPIDERMIS
13
1.3
ZIELE
DER
ARBEIT
15
2
MATERIAL
UND
METHODEN
16
2.1
KULTIVIERUNG
UND
SUBKULTIVIERUNG
DER
HACAT-ZELLINIE
16
2.1.1
HERKUNFT
UND
CHARAKTERISTIK
DER
HACAT-ZELLEN
16
2.1.2
ROUTINE-KULTIVIERUNG
18
2.1.3
ANSETZEN
DER
ZELLKULTUREN
FUER
DIE
TESTDURCHFUEHRUNG
20
2.2
TESTSUBSTANZEN
22
2.2.1
MTX
22
2.2.2
WEITERER
TESTSUBSTANZEN
22
2.2.3
VORBEREITUNG
DER
TESTSUBSTANZEN
FUER
DIE
ANWENDUNG
IN
DER
KULTUR
24
2.2.3.1
HERSTELLUNG
VERSCHIEDENER
MEDIEN
24
2.2.3.2
ERSTELLUNG
DER
VERDUENNUNGSREIHEN
25
2.2.4
ANWENDUNG
DER
TESTSUBSTANZEN
IN
DER
KULTUR
27
2.3
VERWENDETE
TESTVERFAHREN
UND
DEREN
PRINZIPIEN
30
2.3.1
ELISA:
"SANDWICH
ENZYME
IMMUNOASSAY"
30
SEITE
2.3.2
LACTATDEHYDROGENASE-BESTINUNUNG
32
2.3.3
DURCHFLUSSZYTOMETRIE:
FLUORESCEIN
ASSOCIATED
CELL
SORTER
(FACS)
33
2.3.4
LICHTMIKROSKOPIE:
"TERMINAL
DESOXYNUCLEOTIDYL-TRANSFERASE
MEDIATED
DUTP-X
NICK
END
LABELING"
(TUNEL-TECHNIK)
35
2.3.5
DNA-GELELEKTROPHORESE
37
2.3.5.1
VORBEREITUNG
DES
AGAROSE-GEL
39
2.3.5.2
DIGOXIGENIN-MARKIERUNG
DER
PROBEN
40
2.3.5.2.1
TRANSFER
DER
MARKIERTEN
DNA
AUF
EINE
NYLONMEMBRAN
42
2.3.5.2.2
DETEKTION
43
2.3.6
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
45
2.3.7
KONFOKALE
LASERMIKROSKOPIE
47
2.4
STATISTIK
48
3
ERGEBNISSE
49
3.1
QUANTITATIVE
METHODIK
49
3.1.1
BESTIMMUNG
DER
DNA-FRAGMENTE
VON
HACAT-KERATINOZYTEN
NACH
MTX-BEHANDLUNG
MITTELS
ELISA-TECHNIK
49
3.1.2
BESTIMMUNG
DER
TOXIZITAET
VON
MTX
AN
HACAT-KERATINOZYTEN
MITTELS
LACTATDEHYDROGENASE-FREISETZUNG
55
3.1.3
BEEINFLUSSUNG
DER
DURCH
MTX
INDUZIERTEN
DNA-FRAGMENTIERUNG
58
3.1.3.1
NACH
VORBEHANDLUNG
MIT
DEM
EPIDERMAL
GROWTH
FACTOR
(EGF)
58
3.1.3.2
NACH
VORBEHANDLUNG
MIT
CYCLOHEXIMID
(CHX)
61
3.1.3.3
NACH
VORBEHANDLUNG
MIT
INTERFERON-Y
(IFN-Y)
64
3.1.4
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
BESTIMMUNG
65
3.1.4.1
DIFFERENZIERUNG
ZWISCHEN
APOPTOTISCHER
UND
ZYTOLYTISCHER
MTX-WIRKUNG
MIT
HILFE
VON
ANNEXIN
UND
PROPIDIUMIODID
65
SEITE
3.1.4.2
BEEINFLUSSUNG
DES
MTX-EFFEKTES
DURCH
DEN
FAS-ANTIKOERPER
ZB
4
NACH
VORANGEGANGENER
IFN-Y-STIMULATION
68
3.2
QUALITATIVE
METHODIK:
72
3.2.1
DARSTELLUNG
APOPTOTISCHER
HACAT-KERATINOZYTEN
MIT
HILFE
DER
3.2.1.1
TUNEL-FAERBUNG
72
3.2.1.2
DNA-GELELEKTROPHORESE
74
3.2.1.3
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
76
3.2.1.4
KONFOKALEN
LASERMIKROSKOPIE
77
3.3
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
79
4
DISKUSSION
82
4.1
BEWERTUNG
DES
APOPTOTISCHEN
POTENTIALS
VON
MTX
82
4.2
BEWERTUNG
DES
TOXISCHEN
POTENTIALS
VON
MTX
86
4.3
DARSTELLUNG
MOEGLICHER
MECHANISMEN
DER
DURCH
MTX
INDUZIERTEN
APOPTOSE
89
4.4
BEDEUTUNG
FUER
DIE
THERAPIE
DER
PSORIASIS
93
5
ZUSAMMENFASSUNG
96
6
LITERATURVERZEICHNIS
98
7
ANHANG:
TABELLEN
UND
STATISTIKEN
114
8
LEBENSLAUF
128 |
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