Überprüfung von Proteinen aus bovinem Seminalplasma und der Spermienmembran mit Hilfe der 2-D-Gelelektrophorese und ihre Beziehung zur Fruchtbarkeit:
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2000
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Autor: Wehrle, Horst
Jahr: 2000
Inhaltsverzeichnis
Seite
Verzeichnis der Abkürzungen 6
1 Einleitung 7
2 Literatur 8
2.1 Sperma 8
2.1.1 Zusammenhange zwischen spermatologischen Untersuchungsbefunden und 8
Befruchtungsergebnissen
2.1.2 Spermienzeile, Spermienmembran 11
2.1.3 Seminalplasma 11
2.1.3 1 Herkunft und Zusammensetzung des Seminalplasmas 11
2.1.3.2 Die biologische Bedeutung des Seminalplasmas 12
2.1.3.3 Seminalplasma - Überleben der Spermien 13
2.1.3.4 Seminalplasma - Beweglichkeit der Spermien 13
2.1.3.5 Seminalplasma - Reifung der Spermien 13
2.1.3.6 Seminalplasma - Befruchtungsfähigkeit der Spermien 14
2.1.3.7 Wirkung von Seminalplasma auf das weibliche Genitale 15
2.1.4 Proteinmuster im Sperma von Bullen 15
2.1.5 Proteinmuster im Sperma anderer Spezies 16
2.1.6 Proteinmuster des Seminalplasmas und Fruchtbarkeit 31
2.2 Aufspaltung von Proteingemischen in der zweidimensionalen Polyacrylamid-Gel- 31
Elektrophorese
3 Eigene Untersuchungen 33
3.1 Material und Methoden 33
3.1.1 Tiere, Aufstauung, Fütterung 33
3.1.2 Versuchsablauf 33
3.1.2.1 Samengewinnung und Bereitstellen des Probenmaterials 36
3.1.2.2 Ejakulatuntersuchungen 36
3.1.2.3 90-Tage-NRR 36
3.1.2.4 Elektrophorese 36
3.1.2.4.1 Probenaufbereitung für die Elektrophorese 37
3.1.2.4.2 Vorbereitung der Puffer und verwendete Lösungen 37
3.1.2.4.3 Verwendung von Protetnmarkem 37
3.1.2.4.4 Erste Dimension, Isoelektrische Fokussierung (pl-Wert) 37
1. Gießen der Rundgele 37
2. Praefokussierung 37
3. Probenvorbereitung 38
3.1.2.4.5 Festlegung der pK-Werte der aufgetrennten Proteine 38
3.1.2.4.6 Zweite Dimension, Proteingröße (kDa) 38
1. Gießen der Plattengele 38
2. Beladen der Plattengele 39
3 Auftrennung der Proteine in der 2. Dimension nach ihrer Größe (kDa) 39
4. Fixieren, Färben und Waschen der Gele 39
5. Trocknen der Gele 39
3.1.2.4.7 Versuchsreihe 1: Auftrennung des Proteingemisches im Seminalplasma 40
3.12 4 7.1 Gewinnung des Seminalptasmas 40
3 12472 Probenvorbereitung 40
3.1.2.4.8 Versuchsreihe 2: TG-Sperma (von den Spermien abgelöste Proteine) 41
3.1.2.4.8.1 Probenvorbereitung 41
3.1.2.4.9 Versuchsreihe 3: TG-Sperma, Überstände 41
3.1.2 49 1 Probenvorbereitung 41
3.2 Auswertung 42
3.2.1 Proteingehalt der gepoolten Seminalplasmaproben 42
3 2 2 EDV-gestutzte Auswertung der getrockneten 2-D-Gele 42
3.2.3 Die Kennzahl Prot rs 43
3 2.4 Statistische Auswertung 43
4 Ergebnisse 44
4 1 90- Tage- Non-Return-Raten der Bullen 45
4 2 Proteingehalt der Seminalplasmaproben 46
4.3 Proteine. 2-D-SDS-Gelelektrophorese 46
4.3.1 Proteine im Seminalplasma 47
4.3.2 Proteine aus den gewaschenen TG-Spermienpellets 48
4.3.3 Proteine aus dem Überstand des Tiefgefrierspermas 50
4.4 Zur weiteren Untersuchung bestimmte Proteine 54
4.5 Statistische Zusammenhänge 55
45.1 Korrelationen zwischen Spermaparametern 55
4.5.2 Korrelationen von theoretischen Mengen Protein zu den anderen Parametern 56
4.5.2.1 Mit der Non-Return-Rate korrelierende Proteine 61
4.5.2.2 Die Kennzahl „Prot*rs 63
5 Diskussion 65
6 Ausblick 86
7 Zusammenfassung 87
Summary 90
8 Literaturverzeichnis 93
9 Anhang 108
Anlage 1 Beispiele für Gele aus der elektrophoretischen Auftrennung 108
Anlage 2 Verwendete Geräte und Material 115
Anlage 3 Gerät H1. für die elektrophoretische Aufspaltung der Proteine in der 1. Dimension 117
Anlage 4
Anlage 5
Anlage 6
(Rundgele)
Gerät H2, für die elektrophoretische Aufspaltung der Proteine in der 2. Dimension 118
(Plattengele)
Die NRR und die einzelnen Proteinpunkte (scatter blots)
Die mit der NRR in Verbindung stehenden Proteine jeweils eines Bullen
(Proteinprofile, Balkendiagramme)
119
140
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