E. coli Purin Nukleosid Phosphorylase, 6-Methylpurin-2-̀Desoxyribosid: ein experimenteller Ansatz zur Suizidgentherapie maligner Gehirntumore
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Autor: Braun, Oliver
Jahr: 2000
Inhaltsverzeichnis
1. EINLEITUNG
2. LITERATURÜBERSICHT
2.1. Das Glioblastoma Multiforme
2.1.1. Häufigkeiten und Vorkommen
2.1.2. WHO-Klassifikation und Histologie
2.1.3. Genetische Veränderungen
2.1.4. Etablierte Behandlungsstrategien
2.1.5. Gentherapie bei Gehirntumoren
2.2. Gentherapie 10
2.2.1. Definition 10
2.2.2. Übertragungsstrategien 11
2.2.3. Suizidgentherapie und „Bystander-Effekt 13
2.2.4. Suizidgenstrategien 15
23. Spezielle Suizidgentherapie 15
2.3.1. Herpes-Sünplex-Virus-Thymidinkinase/Ganciclovir 15
2.3.1.1. Grundlagen 15
2.3.1.2. Tierxperimentelle Studien 17
2.3.1.3. Klinische Studien ! 8
2.3.2. E. coli Purin Nukleosid Phosphorylase/6-Methylpurin-2-Desoxyribosid 19
2.3.2.1. Biochemische Grundlagen 19
2.3.2.2. Biologische Grundlagen 21
2.3.2.3. Grundlagen zur E. coli PNP/MeP-dR Suizidgenstrategie 23
2.3 2.4. Unterschiede zur HSV-TK/GCV Strategie 24
2.3.2.5. Tierexperimentelle Studien 26
3. MATERIAL UND METHODEN 30
3.1. In vitro Versuche 30
3.1.1. Synthese kationischer Lipide 30
3.1.2. Herstellung von DAC-30 Liposomen 30
3.1.3. Plasmid-DNA Präparation 31
InhaltsverzeickM»
3.1.4. Gentransfer in vitro
3.1.4.1. Zellinien
3.1.4.2. Transfektion der Zellen
3.1.4.3. Selektionierung der transfizierten Zellen
3.1.4.4. Nachweisverfahren zur Bestimmung der Plasmid-DNA Expression 36
¦IQ
3.2. In vivo Versuche, Gentransfer ex vivo
40
3.2.1. Tiermodell nude-Maus
3.2.1.1. Versuchsgruppen, Behandlungsschema
3.2.1.2. Subkutane Tumorzellinokulation; Durchführung, Nachsorge
3.2.2. Tiermodell Ratte 41
42
3.2.2.1. Versuchsgruppen, Behandlungsschemen
3.2.2.2. Anaesthesie der Ratte
3.2.2.3. Stereotaktische Tumorzellinokulation; Vorsorge, Durchführung, Nachsorge 45
46
3.2.2.4. Stereotaktische intratumorale Applikation
46
3.2.2.5. Intraperhoneale Applikation
3.2.2.6. Tötung und Gewebeperfusion
3.2.3. Histologische Aufarbeitung der Gehimschnitte
3.2.3.1. Beschichtung der Objektträger
3.2.3.2. Histologische Färbung 49
3.2.4. Immunhistochemischer Apoptosenachweis
3.2.5. Computergestützte Auswertung
3.2.5.1. Tiermodeil Maus
3.2.5.2. Tiermodeil Ratte
3.2.6. Statistische Bearbeitung und graphische Darstellung
4. ERGEBNISSE
4.1. Liposomaler Geatraasfer und Zytotoxizität in vitro
4.1.1. Transfektionseffizienz in vitro
4.1.2. Zytotoxizität der Substanzen a- bzw. ß-MeP-dR »i vitro
Inhaltsverzeichnis___________________________________________________________III
4.2. Tumorwachstum, Toxizität und Histologie nach E. coli DeoD-Gentransfer ex vivo
sowie anschließender Behandlung mit a- bzw. ß-MeP-dR in vivo 59
4.2.1. Tiermodeli Maus 59
4.2.1.1. Behandlungsverlauf der Tiere mit einem F98(wt)-Tumor 59
4.2.1.2. Behandlungsverlauf der Tiere mit einem F98-PNP-Tumor 63
4.2.1.3. Toxizität der £. coli PNP/MeP-dR Therapie bei der Maus 66
4.2.2. Tiermodell Ratte 67
4.2.2.1. Toxizität der E. coli PNP/MeP-dR Therapie bei der Ratte 68
4.2.2.2. Tumorwachstum nach intraperitonealer Behandlung 69
4.2.2.3. Tumorwachstum nach intratumoraler Behandlung 73
4.2.2.4. Histologische Auswertung der Gehirnschnitte 77
5. DISKUSSION 79
5.1. Liposomaler Suizidgentransfer in vitro und in vivo 79
5.2. Effizienz und Toxizität der £. coli PNP/MeP-dR Suizidgenstrategie in vitro 81
53. Effizienz und Anwendbarkeit der £. coli PNP/MeP-dR Suizidgenstrategie in vivo 83
5.4. Fazit 89
6. ZUSAMMENFASSUNG 92
7. SUMMARY 94
8. LITERATURVERZEICHNIS 96
9. ANHANG 109
9.1. Verzeichnis der im Text verwendeten Abkürzungen 109
9.2. Rondaten zu des graphischen Darstellungen 111
DANKSAGUNG 118
LEBENSLAUF 119
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