Versuche zur Reinigung und chemischen Modifikation der PGH-Synthase:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2000
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINFUEHRUNA
1
1.1
BIOSYNTHESE
UND
PHYSIOLOGISCHE
WIRKUNGEN
DER
PROSTAGLANDINE
1
1.2
EIGENSCHAFTEN
UND
STRUKTUR
DER
PGH-SYNTHASE
3
1.3
REAKTIONSMECHANISMUS
6
1.4
ZIELSETZUNG
9
2
MATERIAL
UND
METHODEN
11
2.1
CHEMIKALIEN
UND
GERAETE
11
2.2
ANALYTISCHE
METHODEN
13
2.2.1
MESSUNG
DER
ENZYMAKTIVITAETEN
13
2.2.2
BESTIMMUNG
DER
PROTEIN-KONZENTRATION
13
2.2.3
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
14
2.2.4
SPEKTRALE
TITRATIONEN
DER
PGHS
MIT
METALLPORPHYRINEN
15
2.2.5
AUFNAHME
VON
ESR-SPEKTREN
16
2.2.6
BESTIMMUNG
VON
ACETYLIERTEN
AMINOSAEUREN
17
2.2.7
AMINOSAEURE-ANALYSE
18
2.3
PRAEPARATION
DER
PGH-SYNTHASE
20
2.3.1
GEWINNUNG
VON
SCHAFSAMENBLASENMIKROSOMEN
20
2.3.2
REINIGUNG
DER
PGH-SYNTHASE
MITTELS
LONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
AUF
DEAE-SEPHACEL
21
2.3.3
REINIGUNG
DER
PGH-SYNTHASE
DURCH
LONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
AUF
FRACTOGEL
EMD-DEAE
650
21
2.3.4
REINIGUNG
DER
PGH-SYNTHASE
DURCH
"RECYCLING
FREE
FLOW
ISOELECTRIC
FOCUSSING
"
(RFF-IEF)
22
2.3.5
PRAEPARATION
VON
APO-PGH-SYNTHASE
DURCH
BEHANDLUNG
MIT
APOMYOGLOBIN
30
2.4
CHEMISCHE
MODIFIKATION
DER
PGH-SYNTHASE
31
2.4.1
ACETYLIERUNG
DER
PGH-SYNTHASE
DURCH
N-ACETYLIMIDAZOL
(NAI)
UND
DIE
REAKTIVIERUNG
DURCH
HYDROXYLAMIN
31
2.4.2
ACETYLIERUNG
DER
PGH-SYNTHASE
MIT
ACETYLSALICYLSAEURE
(ASS)
UND
REAKTIVIERUNG
DURCH
HYDROXYLAMIN
32
2.4.3
MODIFIZIERUNG
DER
PGH-SYNTHASE
MIT
TETRANITROMETHAN
(TNM)
32
2.4.4
REDUKTION
NITRIERTER
PGH-SYNTHASE
MIT
NATRIUMDITHIONIT
33
2.4.5
SPALTUNG
DER
NITRIERTEN
PGH-SYNTHASE
DURCH
TRYPSIN
UND
DIE
AUFTRENNUNG
DER
SPALTPEPTIDE
DURCH
"REVERSED
PHASE"-HPLC
33
2.4.6
SULFONYLIERUNG
DER
PGH-SYNTHASE
DURCH
P-NITROBENZOSULFONYLFLUORID
(NBSF)
34
2.4.7
MODIFIZIERUNG
DER
PGHS
MIT
P-HYDROXIMERCURIBENZOAT
(P-HMB)
34
3
ERQEBNISSE
34
3.1
ISOLIERUNG
DER
PGH-SYNTHASE
34
3.1.1
REINIGUNG
DER
PGH-SYNTHASE
DURCH
LONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
35
3.1.2
REINIGUNG
DER
PGH-SYNTHASE
DURCH
"
RECYCLING
FREE
FLOW
ISOELECTRIC
FOCUSSING
"
(RFF-IEF)
41
3.1.3
PRAEPARATION
VON
APO-PGH-SYNTHASE
53
3.1.4
DISKUSSION
55
3.2
CHEMISCHE
MODIFIZIERUNG
DER
PGH-SYNTHASE
MIT
N-ACETYLIMIDAZOL
59
3.2.1
EINFUEHRUNG
59
3.2.2
MODIFIZIERUNG
MIT
N-ACETYLIMIDAZOL
61
3.2.3
EINFLUSS
VON
N-ACETYLIMIDAZOL
AUF
DIE
ENZYMAKTIVITAETEN
DER
PGH-SYNTHASE
62
3.2.4
REAKTIVIERUNG
DER
ACETYLIERTEN
PGH-SYNTHASE
63
3.2.5
EINFLUSS
VON
P-HYDROXYMERCURIBENZOAT
(P-HMB)
AUF
DIE
AKTIVITAET
DER
PGH-SYNTHASE
65
3.2.6
DISKUSSION
67
3.3
CHEMISCHE
MODIFIZIERUNG
DER
PGH-SYNTHASE
MIT
TETRANITROMETHAN
70
3.3.1
EINLEITUNG
70
3.3.2
EINFLUSS
VON
TETRANITROMETHAN
AUF
DIE
ENZYMAKTIVITAETEN
DER
PGH-SYNTHASE
70
3.3.3
BESTIMMUNG
DER
MODIFIZIERTEN
TYROSINE
DURCH
UVA/IS-SPEKTROSKOPIE
UND
AMINOSAEURE-ANALYTIK
74
3.3.4
NITRIERUNG
DER
MIT
INDOMETHACIN
VORBEHANDELTEN
PGH-SYNTHASE
80
3.3.5
EINFLUSS
VON
TETRANITROMETHAN
AUF
DIE
ESR-SPEKTREN
DER
PGH-SYNTHASE
81
3.3.6
VERSUCHE
ZUR
ENZYMATISCHEN
SPALTUNG
DER
PGH-SYNTHASE
NACH
DER
REAKTION
MIT
TETRANITROMETHAN
84
3.3.7
DISKUSSION
87
-II
3.4
CHEMISCHE
MODIFIZIERUNG
DER
PGH-SYNTHASE
MIT
P-NITROBENZOSULFONYL-FLUORID
(NBSF)
91
3.4.1
EINFLUSS
VON
P-NITROBENZOSULFONYLFLUORID
AUF
DIE
ENZYMAKTIVITAETEN
DER
PGH-SYNTHASE
91
4
ZUSAMMENFASSUNG
94
5
_
LITERATURVERZEICHNIS
96
-III |
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