Verfügbarkeit: Die Zeta-Kette des T-Zell-Rezeptors

Die Zeta-Kette des T-Zell-Rezeptors: Zielstruktur für die Rekrutierung humaner Effektorzellen durch bispezifische Antikörper

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Lutterbüse, Ralf 1969- (VerfasserIn)
Format:	Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	2000
Schlagworte:	Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	München, Univ., Fak. für Biologie, Diss., 2001
Beschreibung:	96 S. Ill., graph. Darst.

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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG . 1 1.1 ANTIKOERPER-BASIERTE IMMUNTHERAPIE VON KREBSERKRANKUNGEN . 1 1.2 BISPEZIFISCHE ANTIKOERPER . 5 1.3 REKRUTIERUNG LYMPHOZYTAERER EFFEKTORZELLEN MIT HILFE BISPEZIFISCHER ANTIKOERPER . 7 1.3.1 DAS ANTIGEN AUF TUMORZELLEN . 7 1.3.2 AKTIVIERUNGSMOLEKUELE AUF EFFEKTORZELLEN . 7 1.4 ZIELSETZUNG DIESER ARBEIT . 14 2 MATERIAL UND METHODEN . 16 2.1 ENZYME, CHEMIKALIEN, ANTIKOERPER . 16 2.2 PUFFER UND MEDIEN . 18 2.2.1 MEDIEN FUER DIE PROKARYONTISCHE ZELLKULTUR. . 18 2.2.2 MEDIEN FUER DIE EUKARYONTISCHE ZELLKULTUR . 19 2.3 ZELLBIOLOGISCHE METHODEN . 20 2.3.1 ISOLATION VON PERIPHEREN MONONUKLEAEREN ZELLEN AUS VOLLBLUT . 20 2.3.2 ISOLATION VON CDFF ZYTOTOXISCHEN T-LYMPHOZYTEN AUS PBMCS . 20 2.3.3 ISOLATION VON CD56* NK-ZELLEN AUS PBMCS . 21 2.3.4 SUBKULTIVIERUNG UND KRYOKONSERVIERUNG VON KULTURZELLEN . 21 2.3.5 HERSTELLUNG MONOKLONALER ANTIKOERPER . 22 2.3.6 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHER BINDUNGSNACHWEIS VON ANTIKOERPERN . 23 2.3.7 PROLIFERATIONSTEST VON T UND NK-ZELLEN NACH ANTIKOERPER-STIMULATION . 24 2.3.S ANALYSE DER ANTIKOERPER IM SDS-POLYACRYLAMIDGEL . 24 2.3.9 ANTIGEN-NACHWEIS DURCH IMMUNOBLOTTING . 25 2.3.10 EXPRESSION VON REKOMBINATEN ANTIKOERPERN IM EUKARYONTISCHEN SYSTEM . 27 2.3.11 ANTIKOERPER-BINDUNGSTEST GEGEN IMMOBILISIERTES ANTIGEN IM ELISA . 29 2.3.12 PRODUKTION UND AUFREINIGUNG REKOMBINANTER ANTIKOERPER . 30 2.3.13 ZYTOTOXIZITAETSTESTS MIT BISPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN . 30 2.4 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN . 31 2.4.1 ISOLIERUNG DER GESAMT-RNA . 31 2.4.2 REVERSE TRANSKRIPTION . 33 2.4.3 POLYMERASE-KETTEN-REAKTION . 34 2.4.4 ENZYMATISCHER VERDAU VON DSDNA UND CDNA-FRAGMENTEN . 36 2.4.5 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE . 36 2.4.6 ISOLATION DER DNA AUS AGAROSE-GELEN . 37 2.4.7 PRAEPARATION KOMPETENTER ESCHERICHIA COLI K12 XL I BLUE . 37 2.4.8 LIGATION . 38 2.4.9 TRANSFORMATION VON PLASMID-DNA IN KOMPETENTE ESCHERICHIA COLI . 39 2.4.10 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA AUS BAKTERIEN . 39 2.4.11 SEQUENZIERUNG MIT DER DIDESOXY-KETTENABBRUCH-METHODE NACH SANGER . 40 2.4.12 DIE GENERIERUNG VON ANTIKOERPERSPEZIFITAETEN MITTELS PHAGE-DISPLAY . 40 2.4.13 IDENTIFIZIERUNG UND ISOLIERUNG ANTIGEN-BINDENDER FAB-KLONE . 44 2.4.14 ISOLIERUNG N-TERMINAL BINDENDER SCFV-FRAGMENTE MITTELS PHAGE-DISPLAY . 45 2.4.15 KLONIERUNG DER VARIABLEN REGIONEN DES ANTI-ZETA-KETTEN-ANTIKOERPERS . 46 2.4.16 KONSTRUKTION BISPEZIFISCHER SINGLE-CHAIN ANTIKOERPER . 47 3 ERGEBNISSE . 48 3.1 ISOLIERUNG EINES ZETA-KETTEN SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERS MIT HILFE EINES MURINEN HYBRIDOMS . 48 3.1.1 HERSTELLUNG DES ZETA-KETTEN-CARRIER-KONJUGATS . 48 3.1.2 GENERIERUNG MURINER MONOKLONALER ANTIKOERPER GEGEN DIE EXTRAZELLULAERDOMAENE DER ZETA-KETTE . 48 3.1.3 FACS-ANALYSE DER ZELLKULTURUEBERSTAENDE DER MURINEN ANTI-ZETA-KETTEN-HYBRIDOME . 49 3.2 IN VITRO-SELEKTION VON ANTI-ZETA-KETTEN-ANTIKOERPERN AUS EINER MURINEN ANTIKOERPERFRAGMENT-BIBLIOTHEK MITTELS PHAGE-DISPLAY . 49 3.3 GENERIERUNG EINES RATTEN-HYBRIDOMS GEGEN DIE EXTRAZELLULAERDOMAENE DER ZETA-KETTE . 53 3.4 KOMPETITIVE BLOCKADE DER ANTIKOERPERBINDUNG AUF ZYTOTOXISCHEN T-LYMPHOZYTEN UND NK-ZELLEN . 54 3.5 CHARAKTERISIERUNG DES 2-B-5 ANTIGENS DURCH IMMUNOBLOTTING . 56 3.6 REZEPTOR-KOMPLEX-INTEMALISIERUNG NACH BINDUNG DES ANTI-ZETA-KETTEN-ANTIKOERPERS 2-B-5 . 57 3.7 PROLIFERATION VON T-LYMPHOZYTEN UND NK-ZELLEN NACH STIMULATION DURCH DEN ANTI-ZETA-KETTEN-ANTIKOERPER 2-B-5 . 59 3.8 ISOLIERUNG IN C-TERMINALER POSITION BINDENDER SCFV-FRAGMENTE MITTELS PHAGE-DISPLAY . 61 3.9 KLONIERUNG DER VARIABLEN REGIONEN DES ANTI-ZETA-KETTEN-ANTIKOERPERS . 64 3.10 KONSTRUKTION EINES BISPEZIFISCHEN SINGLE-CHAIN ANTIKOERPERS ANTI-ZETA-KETTE/ANTI-EPCAM . 66 3.11 PRODUKTION DES BISPEZIFISCHEN ANTI-ZETA-KETTEN/ANTI-EPCAM ANTIKOERPERS IM EUKARYONTISCHEN EXPRESSIONSYSTEM . 68 3.12 ANALYSE DES BISPEZIFISCHEN ANTIKOERPERS MITTELS SDS-PAGE . 69 3.13 REKRUTIERUNG DER ZYTOTOXIZITAET VON CTL UND NK-ZELLEN DURCH DEN BISPEZIFISCHEN ANTI-ZETA-KETTE/ANTI-EPCAM-ANTIKOERPER . 71 4 DISKUSSION . 74 4.1 ISOLIERUNG EINES ANTI-ZETA-KETTEN-ANTIKOERPERS . 74 4.2 SPEZIFITAET DES ANTI-ZETA-KETTEN-ANTIKOERPERS . 75 4.3 CHARAKTERISIERUNG DES GEBUNDENEN ANTIGENS . 77 4.4 REZEPTORINTEMALISIERUNG NACH ANTIKOERPERBINDUNG . 78 4.5 ANTIKOERPER-INDUZIERTE PROLIFERATION . 79 4.6 N-TERMINUS-BLOCKADE IM PHAGE-DISPLAY ZUR ISOLIERUNG VON SCFV-FRAGMENTEN . 81 4.7 ZETA-KETTEN-BASIERTE BISPEZIFISCHE ANTIKOERPER . 82 4.8 ZETA-KETTEN BASIERTE BISPEZIFISCHE ANTIKOERPER ALS ALTERNATIVE ZU CHIMAEREN REZEPTOREN AUF T-LYMPHOZYTEN . 83 4.9 VERRINGERTE ZETA-KETTEN-EXPRESSION BEI KARZINOMEN . 84 4.10 AUSBLICK . 85 5 ZUSAMMENFASSUNG . 89 6 ANHANG . 89 7 LITERATURVERZEICHNIS 8 DANKSAGUNG 9 LEBENSLAUF
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