Entwicklung einer Genvakzine für die antigenspezifische Immuntherapie des malignen Melanoms:
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2000
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1
INHALTSVERZEICHNIS
1* ICINLCITUN^ 3
1.1. DAS KLINISCHE PROBLEM 3
1.2. TUMORIMMUNOLOGISCHE ERKENNTNISSE AUS TIEREXPERIMENTELLEN MODELLEN 4
1.3. WIRKUNGSWEISE DER GENETISCHEN IMMUNISIERUNG 10
1.4. AUCH MENSCHLICHE MELANOMZELLEN WERDEN VON T-LYMPHOZYTEN ERKANNT 17
1.5. TRP2 ALS KLINISCH RELEVANTES MELANOMANTIGEN IM MAUSMODELL 18
1.6. FRAGESTELLUNG 20
2. MATERIAL UND METHODEN 21
2.1. VERSUCHSTIERE 21
2.2. ZELLKULTUR 21
2.2.1. ZELLINIEN ~ 21
2.2.2. NAEHRMEDIEN 21
2.3. ZYTOKINE UND DEREN NACHWEIS 22
2.3.1. REKOMBINANTE ZYTOKINE UND ZYTOKIN-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER 22
2.3.2. NACHWEIS DER IFNA BIOAKTIVITAET 22
2.3.3. SANDWICH ELISAS FUER MAUS IFNOT, MAUS IL-12 UND MAUS IFNY 23
2.4. ANTIKOERPER FUER LYMPHOZYTEN 23
2.5. KULTUR DENDRITISCHER ZELLEN 24
2.5.1. KULTUR MURINER DENDRITISCHER ZELLEN 24
2.5.2. DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE ANALYSEN 24
2.6. PLASMIDE 25
2.6.1. VERMEHRUNG UND NEUKONSTRUKTION 25
2.6.2. REPORTERGENSYSTEME
' 25
2.6.3. TUMORANTIGENE
" 26
2.6.4. ZYTOKINE 26
2.7. GENTRANSFERMETHODEN UND IMMUNISIERUNGSVERFAHREN 26
2.7.1. GENE GUN
, 26
2.
7.2. GENETISCHE IMMUNISIERUNG MIT DER GENE GUN 28
2.7.3. REKOMBINANTE ADENOVIRALE VEKTOREN 29
2.7.4. GENETISCHE IMMUNISIERUNG MIT REKOMBINANTEN ADENOVIREN 31
2.8. ANALYSE DER GENEXPRESSION 32
2.8.1. LUZIFERASE 32
2.8.2. SS-GALAKTOSIDASE 32
2.8.3., GRUEN FLUORESZIERENDES PROTEIN 32
2.8.4. TYROSINASE-RELATED-PROTEIN 2 33
2.9. ANALYSE DER IMMUNANTWORT 34
2.9.1. ANTIGENE PEPTIDE UND PROTEINE 34
2.9.2. ZYTOTOXIZITAETSTESTS 34
2.9.3. ELISPOT TESTS 36
2.9.4. PROLIFERATIONS-UND ZYTOKINFREISETZUNGSTESTS 36
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2
2.9.5. ANTIKOERPERTESTS 37
2.10. ANALYSE DER TUMORIMMUNABWEHR 38
2.10.1. SUBKUTANE TRANSPLANTATION VON TUMORZELLEN 38
2.10.2. EXPERIMENTELLE INDUKTION VON BL 6 LUNGENMETASTASEN 38
2.11. STATISTIK 39
3. ERGEBNISSE 40
3.1. GENETISCHE IMMUNISIERUNG MIT DER GENE GUN 40
3.1.1. GENEXPRESSION IN DER HAUT NACH IN VIVO GENTRANSFER MIT DER GENE
GUN 40
3.1.2. INDUKTION EINER ANTIGENSPEZIFISCHEN IMMUNANTWORT 40
3.1.3. PROTEKTION GEGEN DAS WACHSTUM VON TRANSPLANTIERBAREN TUMORZELLEN
45
3.2. GENETISCHE IMMUNISIERUNG DURCH INJEKTION REKOMBINANTER ADENOVIREN
50
3.2.1. KONSTRUKTION VON AD-EGFP UND AD-MTRP2 50
3.2.2. INDUKTION EINER ANTIGENSPEZIFISCHEN IMMUNANTWORT 51
3.2.3. WIRKUNG IM BL 6 MELANOMMODELL 53
3.3. DC ALS BIOLOGISCHES ADJUVANS FUER DIE GENETISCHE IMMUNISIERUNG 55
3.3.1. GENE GUN TRANSFEKTION VON DC 35
3.3.2. EFFIZIENTER GENTRANSFER IN DC MIT REKOMBINANTEN ADENOVIREN 5 7
3.3.3. GENETISCHE IMMUNISIERUNG MIT AD-MTRP2-TRANSDUZIERTEN DC 59
3.4. INDUKTION VON AUTOIMMUNITAET MIT HUMANER TRP2 CDNA 60
3.4.1. INDUKTION VON VITILIGO-ARTIGEN FELLDEPIGMENTIERUNGEN 60
3.4.2. INDUKTION TRP2-SPEZIFISCHER AUTOANTIKOERPER 61
3.4.3. INDUKTION VON TRP2-SPEZIFISCHEN CD8+ T-LYMPHOZYTEN 62
3.4.4. IMMUNABWEHR VON BL 6 MELANOMZELLEN 64
4. DISKUSSION 65
4.1. GENETISCHE VAKZINIERUNG FUER DIE IMMUNTHERAPIE DES MELANOMS 65
4.2. DENDRITISCHE ZELLEN ALS BIOLOGISCHES ADJUVANS 69
- 4.3. VERFREMDETES TRP2 INDUZIERT AUTOIMMUNITAET 73
4.3. TUMORIMMUNABWEHR DURCH CD4
+T-LYMPHOZYTEN 74
4.4. AUTOIMMUNITAET UND TUMORIMMUNABWEHR 76
4.5. IMMUNPRIVILEGIEN DES TUMORGEWEBES 79
4.6. KLINISCHE UEBERTRAGUNG UND AUSBLICK 79
5. ZUSAMMENFASSUNG 82
6. LITERATUR 84
7. ABKUERZUNGEN 101 |
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