Alphavbeta3-Integrin-bedingte Regulation der Zelladhäsion, -invasion und -proliferation beim Ovarialkarzinom:
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
SEITE
1
ZUSAMMENFASSUNG
1
2
EINLEITUNG
4
2.1
DAS
OVARIALKARZINOM
4
2.2
TUMORBIOLOGISCHE
PROGNOSEFAKTOREN
4
2.3
DIE
ROLLE
VON
TUMOR-ASSOZIIERTEN
PROTEASEN
BEI
DER
TUMORINVASION
UND
METASTASIERUNG
5
2.4
DIE
SERINPROTEASE
UPA
7
2.5
DER
UROKINASEREZEPTOR
9
2.6
DIE
REGULATION
DES
UPA-R
10
2.7
DIE
EXTRAZELLULAERE
MATRIX
UND
DIE
BASALMEMBRAN
11
2.8
VITRONEKTIN
ALS
BESTANDTEIL
DER
EZM
12
2.9
INTEGRINE
15
2.10
SIGNALTRANSDUKTION
DURCH
INTEGRINE
17
2.11
DAS
INTEGRIN
AVSS3
19
2.12
DIE
FUNKTIONELLE
VERKNUEPFUNG
ZWISCHEN
OCVSS3-LNTEGRIN,
VITRONEKTIN
UND
DEM
UROKINASE-TYP-PLASMINOGEN-AKTIVATORSYSTEM
20
3
AUFGABENSTELLUNG
23
4
ERGEBNISSE
25
4.1
EXPRESSION
VON
AVSS3-LNTEGRIN
IN
CHO-ZELLEN
25
4.2
EXPRESSION
DES
SS3-LNTEGRINS
REDUZIERT
DIE
EXPRESSION
DES
UPA-R
IN
CHO-ZELLEN
27
4.3
EXPRESSION
VON
SS3-LNTEGRIN
IN
CHO-ZELLEN
REDUZIERT
DIE
EXPRESSION
DES
UPA-R
AUF
RNA-EBENE
29
4.4
EXPRESSION
VON
SS3-LNTEGRIN
HEMMT
DEN
UPA-R-PROMOTOR
AUF
DNA-EBENE
30
4.5
EINE
PROMOTORREGION
DES
UPA-R
ZWISCHEN
-398
BP
UND
-197
BP
IST
AN
DEM
SS3-LNTEGRIN
INDUZIERTEN
HEMMEFFEKT
BETEILIGT
32
4.6
DIE
AP-1
BINDUNGSSTELLE
IST
FUER
DIE
AKTIVITAET
DES
UPA-R-PROMOTORS
UND
DIE
PEA3/ETS-BINDUNGSSTELLE
FUER
DIE
HEMMWIRKUNG
DES
SS3-LNTEGRINS
ESSENTIELL 34
4.7
DER
TRANSKRIPTIONSFAKTOR
PEA3
REDUZIERT
DIE
UPA-R-PROMOTORAKTIVITAET
36
4.8
AUSSCHLIESSLICH
DURCH
DIE
SS3-LNTEGRIN
ISOFORM
SS3A
WIRD
DIE
REDUKTION
DER
UPA-R-PROMOTORAKTIVITAET
BEWIRKT
39
4.9
SS3-ENDONEXIN
SETZT
DIE
UPA-R-PROMOTORAKTIVITAET
HERAB
41
4.10
AV
UND
SS3-LNTEGRIN
WERDEN
VON
DER
HUMANEN
OVARIALKARZINOMZELLINIE
OV-MZ-6
EXPRIMIERT
42
4.11
EXTRAZELLULAERE
MATRIXPROTEINE
REGULIEREN
DIE
KONZENTRATION
AN
UPA-R
UND
PAI-1
-ANTIGEN
IN
HUMANEN
OVARIALKARZINOMZELLEN
43
4.12
OV-MZ-6-ZELLEN
ZEIGEN
EINE
STARKE
ADHAERENZ
AUF
FIBRONEKTIN
UND
VITRONEKTIN
44
4.13
DAS
PEPTID
ZYKLO-RGDFV
HEMMT
SPEZIFISCH
DIE
ADHAESION
VON
OV-MZ-6-ZELLEN
AN
DIE
RGD-SEQUENZ
DES
VITRONEKTINS
46
4.14
EIN
AVSS3-LNTEGRIN-SPEZIFISCHER
ANTIKOERPER
UND
PAI-1
VERHINDERN
DIE
VITRONEKTIN-SPEZIFISCHE
ADHAESION
HUMANER
OVARIALKARZINOMZELLEN
47
4.15
VITRONEKTIN
INDUZIERT
DIE
PROLIFERATION
HUMANER
OVARIALKARZINOMZELLEN
49
4.16
UEBEREXPRESSION
VON
AVSS3-LNTEGRIN
IN
HUMANEN
OVARIALKARZINOMZELLEN
52
4.17
AVSS3-UEBEREXPRIMIERENDE
OVARIALKARZINOMZELLEN
ADHAERIEREN
VERSTAERKT
AN
VITRONEKTIN
56
4.18
LOESLICHES
ZYKLO-RGDFV-PEPTID
KOMPETIERT
DIE
BINDUNG
DER
AVSS3-STARK
EXPRIMIERENDEN
OV-MZ-6-ZELLEN
AN
VITRONEKTIN
57
4.19
DIE
VITRONEKTIN-VERMITTELTE
STEIGERUNG
DER
OV-MZ-6-ZELLPROLIFERATION
WIRD
DURCH
AVSS3-LNTEGRIN
STIMULIERT
59
4.20
OV-MZ-6-ZELLEN
ZEIGEN
EIN
ORGANISIERTES
ZYTOSKELETT
AUF
VITRONEKTIN
61
4.21
ERHOEHTE
AVSS3-EXPRESSION
IN
OV-MZ-6-ZELLEN
STEIGERT
DIE
MOTILITAET
AUF
VITRONEKTIN
62
4.22
ANALYSE
VON
DIFFERENTIELL
REGULIERTEN
GENEN
IN
OV-MZ-6-ZELLEN
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
AVSS3-LNTEGRIN
UND
VITRONEKTIN
65
4.23
ANALYSE
DER
MITTELS
MICROARRAY-METHODIK
IDENTIFIZIERTEN
GENE
DURCH
YYNORTHEM-BLOT-ANALYSE
"
68
5
DISKUSSION
71
5.1
EXPRESSION
DER
SS3-LNTEGRINUNTEREINHEIT
IN
CHO-ZELLEN
REGULIERT
DEN
SERINPROTEASEREZEPTOR
UPA-R
HERUNTER
72
5.2
PEA3
ALS
TRANSKRIPTIONELLER
REPRESSOR
DES
UPA-R-PROMOTORS
74
5.3
AVSS3-LNTEGRIN
VERMITTELT
EINE
SPEZIFISCHE
ADHAESION
AUF
VITRONEKTIN
76
5.4
VITRONEKTIN
INDUZIERT
DIE
PROLIFERATION
BEI
OV-MZ-6-ZELLEN
78
5.5
EINE
UEBEREXPRESSION
DES
AVSS3-INTEGRINS
VERSTAERKT
DIE
ADHAESION
UND
PROLIFERATION
HUMANER
OVARIALKARZINOMZELLEN
79
5.6
DIFFERENTIELLE
GENEXPRESSIONEN
IN
HUMANEN
OVARIALKARZINOMZELLEN
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
AVSS3/VN-LNTERAKTION
81
6
MATERIAL
85
6.1
GERAETE
85
6.2
REAGENZIEN
UND
MATERIALIEN
FUER
DIE
MOLEKULARBIOLOGIE
85
6.3
ALLGEMEINE
PUFFER
UND
LOESUNGEN
86
6.4
ANTIKOERPER
87
6.5
RADIOISOTOPE
88
6.6 PROTEINE
UND
PEPTIDE
88
6.7
PLASMIDE
89
6.8
MEDIEN
UND
ANTIBIOTIKA
ZUR
ANZUCHT
VON
BAKTERIEN
90
6.9
EUKARYONTISCHE
ZELLINIEN
90
6.10
REAGENZIEN
UND
MEDIEN
FUER
EUKARYONTISCHE
ZELLKULTUR
91
7
METHODEN
92
7.1
7.2
7.3
7.4
7.5
7.6
7.7
7.8
7.9
7.10
7.11
7.12
ALLGEMEINE
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
92
ISOLATION
VON
PLASMID-DNA
92
PLASMIDAUFREINIGUNG
NACH
QIAGEN
92
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
93
ATLASYY
HUMAN
CDNA
EXPRESSION
MICROARRAY
94
NORTHERN
BLOT
ANALYSE
96
HERSTELLUNG
VON
LYSATEN
AUS
ZELLEN
98
PROTEINKONZENTRATIONSBESTIMMUNG
99
SDS-POLYACRYL-GELELEKTROPHORESE
99
WESTERN
BLOT
ANALYSE
100
PAI-1
UND
PAI-2
AKTIVITAETSUNTERSUCHUNG
100
BESTIMMUNG
VON
UPA
UND
PAI-1
ANTIGEN
AUS
ZELLUEBERSTAENDEN
BZW.
UPA-R
AUS
ZELLYSATEN
101
7.13
7.14
7.15
7.16
7.17
7.18
7.19
7.20
7.21
7.22
7.23
7.24
7.25
7.26
BESCHICHTEN
VON
KULTURGEFAESSEN
MIT
EZM-PROTEINEN
101
KULTIVIERUNG
VON
ZELLEN
102
ERMITTLUNG
VON
TRANSFEKTIONSMETHODEN
MIT
HOHER
TRANSFEKTIONSEFFIZIENZ
102
TRANSFEKTION
EUKARYONTISCHER
ZELLINIEN
103
CAT-REPORTERSTUDIEN
104
DUAL
LUCIFERASE
REPORTER
ASSAY
105
GELRETARDATIONSEXPERIMENTE
106
ZELLADHAESIONSTESTS
107
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
FUER
DIE
KONFOKALE
LASERSCANMIKROSKOPIE
108
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
MIT
PHALLOIDIN
109
MIGRATIONSEXPERIMENTE
109
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
110
[
3
H]-THYMIDININKORPORATIONSMESSUNG
111
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
MITTELS
MTT-TEST
111
8
LITERATURVERZEICHNIS
113 |
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| title_short | Alphavbeta3-Integrin-bedingte Regulation der Zelladhäsion, -invasion und -proliferation beim Ovarialkarzinom |
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