In-vitro- und In-vivo-Studien zur Charakterisierung des extrazellulären Matrixproteins Laminin-5:
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2001
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Beschreibung: | Köln, Univ., Diss., 2000 |
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1.
EINLEITUNG
1
1.1
EXTRAZELLULAERE
MATRIX
1
1.2
LAMININE
2
1.2.1
FUNKTIONEN
DER
LAMININE
2
1.2.2
STRUKTUR
DER
LAMININE
3
1.2.3
POLYMERISATION
UND
NETZWERKBILDUNG
DER
LAMININE
6
1.3
LAMININ-5
6
1.3.1
EXPRESSIONSLOCI
DES
LAMININ-5
7
1.3.2
ALTERNATIVE
SPLEISSPRODUKTE
DER
LAMININ-5-KETTEN
7
1.3.3
PROTEOLYTISCHE
PROZESSIERUNG
DER
KETTEN
DES
LAMININ-5
8
1.3.4
LAMININ-5
IN
DER
DERMO-EPIDERMALEN
BASALMEMBRAN
10
1.4
HERLITZ'SEHE
FORM
DER
EPIDERMOLYSIS
BULLOSA
(H-JEB)
13
2.
ZIELSETZUNG
15
3.
ERGEBNISSE
16
3.1
REKOMBINANTE
EXPRESSION
DER
KURZEN
ARME
UND
DER
N-TERMINALEN
DOMAENEN
DER
LAMININ
SS3
UND
Y2-KETTEN
16
3.2
ISOLIERUNG
DER
REKOMBINANT
EXPRIMIERTEN
PROTEINE
18
3.2.1
AUFREINIGUNG
DER
REKOMBINANTEN
PROTEINE
OHNE
BINDUNGSMODUL
18
3.2.2
AUFREINIGUNG
DER
REKOMBINANTEN
PROTEINE
MIT
BINDUNGSMODUL
20
3.2.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
REKOMBINANTEN
PROTEINE
22
3.3
PRODUKTION
UND
IMMUNOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DES
Y2-ANTIKOERPERS
PG2-NTD
25
3.3.1
PRODUKTION
DES
ANTIKOERPERS
PG2-NTD
25
3.3.2
IMMUNOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DES
^2
ANTIKOERPERS
PG2-NTD
25
3.4
INTERAKTIONSSTUDIEN
27
3.4.1
IDENTIFIKATION
DER
INTERAKTIONSPARTNER
MITTELS
SPR
27
3.4.2
UNTERSUCHUNG
DER
INTERAKTION
DES
KURZEN
ARMS
MIT
DER
N-TERMINALEN
DOMAENE
DER
72-KETTE
MITTELS
SPR
29
3.4.3
UNTERSUCHUNG
DER
SELBSTINTERAKTION
DES
KURZEN
ARMS
DER
Y2-KETTE
MITTELS
SPR
31
3.4.4
UNTERSUCHUNG
DER
INTERAKTION
VON
LAMININ-5
MIT
DEM
KURZEN
ARM
UND
DER
N-TERMINALEN
DOMAENE
DER
Y2-KETTE
MITTELS
SPR
32
3.4.5
UNTERSUCHUNG
DER
INTERAKTION
DES
KURZEN
ARMS
DER
Y2-KETTE
MIT
FIBULIN-2
MITTELS
SPR
33
3.4.6
ZUSAMMENFASSUNG
DER
SPR-BINDUNGSDATEN
34
3.4.7
UNTERSUCHUNG
DER
INTERAKTION
DER
N-TERMINALEN
DOMAENE
MIT
DEM
KURZEN
ARM
DER
72-KETTE
MITTELS
DER
NICHTDENATURIERENDEN
GELELEKTROPHORESE
36
3.5
HOMOLOGE
REKOMBINATION
IM
GEN
DER
LAMININ
72-KETTE
38
3.6
ISOLATION
UND
SEQUENZVERGLEICH
DER
MAUS-CDNA
DER
LAMININ
72-KETTE
45
3.7
GENOTYPISIERUNG
DER
LAMB3
1AP
-MAUSLINIE
47
3.8
CHARAKTERISIERUNG
DES
LAMB3
TAP
-PHAENOTYPS
50
4.
DISKUSSION
57
4.1
REKOMBINANTE
EXPRESSION
UND
REINIGUNG
DER
KURZEN
ARME
UND
N-TERMINALEN
DOMAENEN
DER
SS3
UND
72-KETTEN
57
4.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
REKOMBINANTEN
PROTEINE
58
4.3
PRODUKTION
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
ANTIKOERPERS
PG2-NTD
60
4.4
INTERAKTIONSSTUDIEN
61
4.5
ISOLATION
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
MAUS
CDNA
DER
LAMININ
72-KETTE
64
4.6
HOMOLOGE
REKOMBINATION
IM
GEN
DER
LAMININ
72-KETTE
64
4.7
ANALYSE
DER
LAMB3
LAP
-MAUSLINIE
66
4.8
AUSBLICK
70
5.
ZUSAMMENFASSUNG
72
6.
MATERIAL
UND
METHODEN
74
6.1
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
74
6.1.1
NUKLEINSAEURE-PRAEPARATIONEN
74
6.1.2
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
76
6.1.3
ALLGEMEINE
KLONIERUNGSTECHNIKEN
76
6.1.4.
GEL-ELEKTROPHORESE
VON
NUKLEINSAEUREN
78
6.1.5
SOUTHERN
BLOT
(SOUTHERN,
1975)
78
6.1.6
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
79
6.1.7
REVERSE
TRANSKRIPTION
79
6.1.8
DNA-SEQUENZIERUNGEN
79
6.1.9
SCREENEN
DER
GENOMISCHEN
UND
DER
CDNA-MAUSBANK
80
6.1.10
PUFFER
UND
STOCKLOESUNGEN
80
6.2
ZELLKULTUR
81
6.2.1
REKOMBINANTE
EXPRESSION
VERSCHIEDENER
BEREICHE
VON
LAMININ-5
81
6.3
PROTEINCHEMIE
84
6.3.1
ALLGEMEINE
PROTEINCHEMISCHE
VERFAHREN
84
6.3.2
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
85
6.3.3
AUFREINIGUNG
DER
REKOMBINANTEN
PROTEINE
86
6.4
HNMUNOHISTOLOGIE
88
6.4.1
GEWEBEPRAEPARATION
88
6.4.2
FAERBEMETHODEN
89
6.5
OBERFLAECHEN-PLASMON-RESONANZ
(SURFACE
PLASMON
RESONANCE,
SPR)
90
7.
LITERATUR
92
8
ANHANG
103
ANHANG
1:
VERGLEICH
DER
NEU
ERMITTELTEN
UND
DER
PUBLIZIERTEN
CDNA
SEQUENZ
DER
LAMININ
72-KETTE
103
ANHANG
2:
OLIGONUKLEOTIDE
UND
SONDEN
107 |
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