Aktivierung phagozytierender Zellen durch "advanced glycation endproducts" und Beta-Amyloid-Implikationen für die Pathogenese der Alzheimer'schen Demenz:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German English |
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
S UMMARY 1
ZUSAMMENFASSUNG 3
I
EINLEITUNG 5
1.1. DIE ALZHEIMER' SEHE ERKRANKUNG 5
1.2. MOLEKULARE HINTERGRUENDE DER AD 6
1.2.1. EXTRAZELLULAERE PLAQUES 6
1.2.1.1. PROZESSIERUNG DES APP ZU ASS 6
1.2.1.2. GLYKIERUNGSREAKTIONEN (AGES) 8
1.2.2. DIREKTE UND IMMUNVERMITTELTE NEUROTOXIZITAET - 10
1.2.2.1. DIREKT VERMITTELTE TOXIZITAET 10
1.2.2.2. IMMUNVERMITTELTE NEUROTOXIZITAET 10
1.2.2.2.1. AKTIVIERUNG DER PHAGOZYTEN UND DARAUS RESULTIERENDE ZELLULAERE
REAKTIONEN 10
1.2.2.2.2. DER TRANSKRIPTIONSFAKTOR
NF-KB 11
II
MATERIAL UND METHODEN
14
N.L. MATERIAL 14
0.2. METHODEN 17
N.2.1.
HERSTELLUNG DER AGES 17
H.2.2. HERSTELLUNG DER FIBRILLAEREN ASS PEPTIDE 18
11.2.3. PROTEINBESTIMMUNG 18
11.2.4. FLUORESZENZMESSUNG 18
N.2.5.
SUPEROXIDMESSUNG YY 19
UE.2.6. ZELLKULTUR 19
11.2.6.1. ALLGEMEINE ZELLKULTURTECHNIKEN 19
11.2.6.2. TRANSFEKTION EUKARYONTISCHER ZELLINIEN 21
11.2.6.3. SELEKTION AUF HOMOLOGE REKOMBINANTEN 21
11.2.6.4. KONDITIONIERTES MEDIUM 21
11.2.6.5. ZYTOTOXIZITAETSTESTS 22
II.2.7. MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 23
N.2.7.1. PLASMIDE 23
H.2.7.2. TRANSFORMATION VON E.COLI 23
I
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/963110152
INHALTSVERZEICHNIS
UE.2.7.3. PLASMID-DNA ISOLIERUNG 24
II. 2.7.4. RESTRIKTIONSVERDAU DER PLASMID-FRAGMENTE 24
UE.2.7.5. AUFTRENNUNG VON DNA-FRAGMENTEN AUF AGAROSEGELEN DURCH
ELEKTROPHORES 25
UE.2.7.6. GEWINNUNG VON DNA-FRAGMENTEN AUS AGAROSEGELEN 25
D.2.7.7. DIGOXIGENIN MARKIERUNG DER DNA 25
UE.2.7.8. HYALURONSAEURE-AGAROSEGEL 25
UE.2.7.9. GELRETENTIONSANALYSE ("ELECTROPHORETIC MOBILITY SHIFT ASSAY",
EMSA) 26
UE.2.7.10. ANALYSE VON PROTEINEN 29
UE.2.7.11. IMMUNOBLOT (WESTERN BLOT) 31
UE.2.7.12. SOUTHERN BLOT 33
H.2.7.13. RT-PCR 35
III
ERGEBNISSE
36
III. 1.
DIE AKTIVIERUNG PHAGOZVTIERENDER ZELLEN 36
HI. 1.1. INDIKATOREN DER PHAGOZYTENAKTIVIERUNG 38
M. 1.2.
NF-KB ALS INDIKATOR DER ZELLULAEREN REAKTION 39
HI. 1.3. EINFLUSS DER EXTRAZELLULAEREN MATRIX AUF DIE NF-KB
AKTIVIERBARKEIT 41
M.1.3.1. BEEINFLUSSUNG DER
NF-KB AKTIVIERUNG DURCH GLYCOSAMINOGLYKANE 41
HL 1.3.1.1. EINFLUSS DER HMW-HA AUF DIE NF-KB AKTIVIERUNG 42
HI. 1.3.1.2. HMW-HA VERHINDERT DIE AGE INDUZIERTE ZYTOKINEXPRESSION 44
ITT.
1.3.2. NIEDERMOLEKULARE HA FRAGMENTE AKTIVIEREN NF-KB 45
M. 1.3.3. DIE AGE INDUZIERTE
NF-KB AKTIVIERBARKEIT IST UMGEKEHRT PROPORTIONAL
ZU DER HA-GROESSE 47
HI. 1.3.4. DIE ASS INDUZIERTE
NF-KB AKTIVIERUNG IST UMGEKEHRT PROPORTIONAL ZU DER GROESSE
DER PRAEINKUBIERTEN HA 48
111.2.
VERAENDERUNGEN DER EXTRAZELLNLAEREN MATRIX 50
M.2.
1. EINFLUSS VON AGE UND ASS AUF DAS DURCHSCHNITTLICHE MOLEKULARGEWICHT DER
HA 50
FFL.2.2. AGE BEDINGTE AKTIVIERUNG PRIMAERER KARDIOFIBROBLASTEN UND DEREN
EINFLUSS
AUF BESTANDTEILE DER EXTRAZELLULAEREN MATRIX 52
111.3.
SIGNALTRANSDUKTION IN MIKROGLIAZELLEN 54
M.3.1. INHIBIERUNG DER AGE INDUZIERTEN NF-KB-AKTIVIERUNG 54
M.3.2.
INHIBIERUNG VERSCHIEDENER SIGNALKASKADENGRUPPEN IN BEZUG AUF DIE
NEUROTOXIZITAET IM "IN VITRO MODELL" 56
M.3
.2.1. AUSWIRKUNG DER HEMMUNG DER TRANSKRIPTION ODER DER TRANSLATION IN
MIKRO
GLIAZELLEN AUF DIE NEUROTOXISCHE WIRKUNG DES MIKROGLIAKONDITIONIERTEN
MEDIUMS 57
INHALTSVERZEICHNIS
HI.3.2.2. AUSWIRKUNGEN DER HEMMUNG MITOCHONDRIALER FUNKTIONEN IN
MIKROGLIAZELLEN AUF
DIE NEUROTOXIZITAET DES MIKROGLIA-KONDITIONIERTEN MEDIUMS 58
IN.3.2.3.
HEMMUNG VERSCHIEDENER RADIKALBILDNER IN MIKROGLIAZELLEN UND DEREN
EINFLUSS
AUF DIE NEUROTOXISCHE WIRKUNG DES MIKROGLIAKONDITIONIERTEN MEDIUMS 59
IN.3.2.4.
HEMMUNG AKTIVIERENDER SIGNALKASKADEN UND DARAUS RESULTIERENDE
VERAENDERUNGEN IN DER NEUROTOXIZITAET DES MIKROGLIAKONDITIONIERTEN MEDIUMS
61
M.3.2.5. BESTAETIGUNG UND EINSTUFUNG DER WIRKSAMKEIT DER INHIBITOREN AUF
NEUROTOXIZITAETSAENDERUNGEN DES KONDITIONIERTEN MEDIUMS 62
111.4.
EIGENSCHAFTEN DES MIKROGLIA-KONDITIONIERTEN MEDIUMS 64
M.4.
1. ZEITRAUM DER FREISETZUNG DES TOXISCHEN AGENS IN DAS KONDITIONIERTE
MEDIUM
64
M.4.2.
TEMPERATURABHAENGIGKEIT DER NEUROTOXIZITAET DES KONDITIONIERTEN MEDIUMS 66
M.4.3.
GROESSENEINGRENZUNG DES TOXISCHEN AGENS 66
M.4.4.
EINFLUSSNAHME VON UEBERGANGSMETALLE AUF DIE NEUROTOXIZITAET DES
KONDITIONIERTEN
MEDIUMS ~~ 68
111.5.
NADPH OXIDASE 69
M.5.
1. DEAKTIVIERUNG DER NADPH OXIDASE 69
M.5.
1.1. INAKTIVIERUNG DER GP91PHOX UNTEREINHEIT DER NADPH OXIDASE 70
EH.5.1.2. STIMULIERTE N11/6 ZELLEN ZEIGEN IM GEGENSATZ ZU NI 1 ZELLEN
KEINE
SUPEROXIDANIONENAUSSCHUETTUNG 72
HI.5.2. URSACHE DER MIKROGLIAVERMITTELTEN NEUROTOXIZITAET 74
M.5.2.
1. AGE FUEHRT NUR IN MIKROGLIA MIT EINER FUNKTIONELLEN NADPH OXIDASE ZU
EINER NF-KB AKTIVIERUNG 74
M.5.2.2. H
2
O
2
STIMULATION FUEHRT SOWOHL IN NI 1 ALS AUCH IN NI 1/6 ZU EINER
NF-KB AKTIVIERUNG 75
III. 5.2.3. DIE MIKROGLIAVERMITTELTE NEUROTOXIZITAET IST NICHT VON DER
NF-KB AKTIVIERUNG
SONDERN VON DER NADPH OXIDASE AKTIVIERUNG ABHAENGIG 75
FLL.5.2.4. UNTERSCHIEDE DER
NF-KB AKTIVIERUNG IN MIKROGLIA NACH ASS(2
5
-
35
) UND NACH
H
2
O
2
BEHANDLUNG 76
M.5.2.5. DIE MIKROGLIAVERMITTELTE NEUROTOXIZITAET NACH ASS(
25
-
35
) BEHANDLUNG BERUHT AUF
DER NADPH OXIDASE AKTIVIEREN 78
IV
DISKUSSION 80
IV. 1. VORAUSSETZUNGEN FUER DIE PHAGOZYTENAKTIVIERUNG UND DEREN BEDEUTUNG
FUER NEURODEGENERATIVE PROZESSE 80
IV.2. SIGNALTRANSDUKTION IN AKTIVIERTEN MIKROGLIAZELLEN 88
IV.3. DIE BEDEUTUNG DER NADPH OXIDASE FUER DIE MIKROGLIA-VEMDTTELTE
NEUROTOXIZITAET 92
V LITERATURVERZEICHNIS
97
ANHANG
108 |
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