Untersuchung von Mutationen des p16-MTS-1-Tumorsuppressor-Gens beim Pankreaskarzinom in der PCR-SSCP und Sequenzanalyse:
Gespeichert in:
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| Veröffentlicht: |
2001
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
8
A
EINLEITUNG
UND
ZIELSETZUNG
10
B
MATERIAL
UND
METHODEN
16
B.L
GERAETE
UND
MATERIALIEN
16
B.1.1
GERAETE
16
B.1.2
MATERIALIEN
17
B.L.
3
COMPUTERPROGRAMME
17
B.2
PROBENMATERIAL
19
B.2.1
PATIENTEN
19
B.2.2
BLUTPROBEN
19
B.2.3
TUMOR
UND
NORMALGEWEBE
19
B.2.4
ASCITESASPIRAT
UND
PERITONEALFLUESSIGKEIT
19
B.2.5
PANKREASSEKRET
AUS
DER
ERCP
19
B.2.6
KONTROLL-PROBEN
20
B.3
ISOLIERUNG
DER
ZELLEN
UND
DER
GEWEBE
21
B.3.1
ZUSAMMENSETZUNGEN
DER
PUFFERLOESUNGEN
21
B.3.2
PRAEPARATION
DER
LEUKOZYTEN
AUS
DEN
BLUTPROBEN
21
B.3.3
TRENNUNG
UND
HOMOGENISATION
VON
NORMAL
UND
TUMORGEWEBE
22
B.3.4
ISOLIERUNG
VON
ZELLEN
AUS
ERCP-ASPIRATEN
22
B.3.5
ISOLIERUNG
VON
ZELLEN
AUS
PERITONEALLAVAGE
UND
ASCITES
22
B.4
PRAEPARATION
GENOMISCHER
DNA
23
B.4.1
MEDIEN,
LOESUNGEN
UND
PUFFER
23
B.4.2
PROTEINASE
K-VERDAUUNG
24
B.4.3
PHENOLEXTRAKTION
24
B.4.4
ETHANOLFAELLUNG
DER
NUKLEINSAEUREN
25
B.4.5
PHOTOMETRISCHE
QUANTIFIZIERUNG
DURCH
UV-SPEKTROMETRIE
25
B.5
PCR-SSCP-ANALYSE
26
B.5.1
MATERIALIEN
26
B.5.2
PCR-PRIMER
27
B.5.2.1
PCR-PRIMER
FUER
EXON
1
28
B.5.2.2
PCR-PRIMER
FUER
EXON
2
29
B.5.3
EINSATZ
AN
CHROMOSOMALER
DNA
31
B.5.4
REAKTIONSANSATZ
DER
PCR
32
B.5.5
SSCP-ANALYSE
34
B.5.5.1
PRINZIP
DER
SSCP
34
B.5.5.2
DURCHFUEHRUNG
DER
SSCP
35
B.5.3
BRADYKININ-2-REZEPTOR-GEN-PCR
36
B.6
ELEKTROPHORETISCHE
METHODEN
ZUR
DETEKTION
DER
DNA
37
B.6.1
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
37
B.6.1.1
MATERIALIEN
37
B.6.1.2
AUFTRENNUNG
UND
DARSTELLUNG
DER
PCR-PRODUKTE
IM
AGAEROSEGEL
37
B.6.2
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
38
B.6.2.1
MATERIALIEN
UND
HERSTELLUNG
DES
GELS
39
B.6.2.2
DURCHFUEHRUNG
DER
ELEKTROPHORESE
41
B.6.2.3
SILBERFAERBUNG
DER
POLYACRYLAMIDGELE
41
5
B.7
FLUORESZENZGESTUETZTE
SEQUENZANALYSE
MIT
DEM
ABI
377-DNA
SEQUENCER
42
B.7.1
SYSTEMBESCHREIBUNG
42
B.7.1.1
PRINZIP
DER
SEQUENZREAKTION
43
B.7.2
HERSTELLUNG
DER
PCR-PRODUKTE
45
B.7.2.1
AUFREINIGUNG
ZUM
EINSATZ
IN
DIE
SEQUENZANALYSE
45
B.7.3
SEQUENZREAKTION
45
B.7.4
DURCHFUEHRUNG
DER
ELEKTROPHORESE
46
B.7.5
AUSWERTUNG
MITTELS
ABI-PRISMYY
48
C
ERGEBNISSE
49
C.1
PATIENTENKOLLEKTIV
49
C.2
ERGEBNISSE
DER
DNA-AUFBEREITUNG
50
C.2.1
AUSBEUTE
DER
DNA-AUFBEREITUNG
UND
REINHEIT
DER
GEWONNENEN
DNA
50
C.2.1.1
TUMORKOLLEKTIV
50
C.2.1.2
DNA
AUS
PERITONEALLAVAGE
UND
ASCITESASPIRAT
51
C.3
AMPLIFIKATION
DER
PL6-DNA
52
C.3.1
DURCHFUEHRUNG
DER
PCR
52
C.3.2
AUSWAHL
DER
PRIMER
52
C.3.3
ERGEBNISSE
DER
PCR
53
C.3.3.1
PCR
VON
EXON
1
55
C.3.3.2
PCR
VON
EXON
2
56
C.4
SSCP-ANALYSE
58
C.4.1
EINFLUESSE
DER
ELEKTROPHORESEBEDINGUNGEN
58
C.4.2
ERGEBNISSE
MIT
DEM
PANKREASMATERIAL
59
6
C.5
SEQUENZANALYSE
MIT
DEM
61
ABI
377-DNA
SEQUENCER
C.5.1
ANWENDUNG
DER
FLUORESZENZGESTUETZTEN
ANALYSE
61
C3.2
ERGEBNISSE
MIT
DEM
PANKREASMATERIAL
62
D
DISKUSSION
65
E
ZUSAMMENFASSUNG
77
F
LITERATURVERZEICHNIS
79
DANKSAGUNG
96
CURRICULUM
VITAE
97
7 |
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