Bestimmung der Lösungsstruktur der Mutante M26A des potentiellen Plasminogenaktivators Staphylokinase mittels multidimensionaler NMR-Spektroskopie:
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2001
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| Beschreibung: | Jena, Univ., Diss., 2001 |
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INHALTSVERZEICHNIS
DANKSAGUNG I
VEROEFFENTLICHUNGEN II
INHALTSVERZEICHNIS III
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS V
1. EINFUEHRUNG 1
1.1. STAPHYLOKINASE - EIN BAKTERIELLER PLASMINOGENAKTIVATOR 2
1.2. DAS FIBRINOLYTISCHE SYSTEM 3
1.3- BIOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG 4
1.4. UNTERSUCHUNGEN
IN VIVO UND IN VITRO 8
1.5. BIOPHYSIKALISCHE CHARAKTERISIERUNG 8
1.5.1. ERGEBNISSE DER ROENTGENKRISTALLSTRUKTURANALYSE 9
1.5.2. ERGEBNISSE DER NMR-UNTERSUCHUNGEN 13
1.6. MOTIVATION UND AUFGABENSTELLUNG 14
2. METHODEN 16
2.1. FTIR-SPEKTROSKOPIE 16
2.2. NMR-SPEKTROSKOPIE 17
2.2.1. HOMONUKLEARE EXPERIMENTE 18
2.2.2. HETERONUKLEARE EXPERIMENTE 20
2.2.3. KOPPLUNGSKONSTANTE UND KARPLUSGLEICHUNG 21
2.2.4. ANALYSE DER LOKALEN KONFORMATION 22
2.2.5. H/D-AUSTAUSCHEXPERIMENTE 23
2.2.6. STRUKTURBERECHNUNG 24
3. EXPERIMENTELLER TEIL 26
3-1. PROBENPRAEPERATION 26
3.1.1. PROBEN FUER DIE FTIR-MESSUNGEN 26
3.1.2. PROBEN FUER DIE NMR-SPEKTROSKOPIE 26
3-1-2.1. EXPRESSION UND REINIGUNG 26
3.1.2.2. PROBEN FUER DEN H/D-AUSTAUSCH 28
3.1.2.3. ANALYTIK 28
3.2. FTIR-SPEKTROSKOPIE 29
3.2.1. MESSBEDINGUNGEN 29
3.2.2 AUFLOESUNGSVERBESSERUNG UND KURVENFITTUNG 30
3.2.3. BESTIMMUNG DER SEKUNDAERSTRUKTURANTEILE 30
3 YY 2.3 YY 1 YY F AKTORANALY SE 30
3.2.3.2. TEMPERATURABHAENGIGKEIT DER FTIR-SPEKTREN 30
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
IV
3.3- NMR-SPEKTROSKOPIE 31
3-3.1- SPEKTRENPROZESSIERUNG UND-BEARBEITUNG 31
3-3.2 HOMONUKLEARE EXPERIMENTE 32
3.3 3 HETERONUKLEARE EXPERIMENTE 32
4. ERGEBNISSE DER FTIR-SPEKTROSKOPIE 34
4.1. BESTIMMUNG DER SEKUNDAERSTRUKTURANTEILE 34
4.1.1. DEKONVOLUTION 34
4.1.2. FAKTORANALYSE 39
4.2. TEMPERATURABHAENGIGE MESSUNGEN 40
4.3. H/D-AUSTAUSCH 43
5.
ERGEBNISSE DER NMR-SPEKTROSKOPIE
46
1 E
5.1. EXPERIMENTE UND ERGEBNISSE MIT DER N-MARKIERTEN MUTANTE 47
5.1.1. ZUORDNUNG DER RESONANZEN 47
5.1.2. BESTIMMUNG DER UND DES H/D-AUSTAUSCHVERHALTENS
UND DER
3JHNCT
KOPPLUNGSKONSTANTEN
52
5-1.3- BESTIMMUNG DER STRUKTUR DER MUTANTE M26A NACH
DEM 'REDUZIERTEN DATENSATZ' 54
5.1.4. KONVENTIONELLE STRUKTURBESTIMMUNG DER MUTANTE
M26A 56
5.2. VERGLEICH DER STRUKTUR AUS DEM VOLLSTAENDIGEN UND
REDUZIERTEN DATENSATZ 6L
5.3. VERGLEICH MIT DEM WILDTYP 65
5.3-1. EIGENSCHAFTEN DES AUSGETAUSCHTEN RESTES 65
5.3.2. DIFFERENZEN DER VERSCHIEBUNGSWERTE, DEN J
HNA-
KOPPLUNGSKONSTANTEN UND IM H/D-AUSTAUSCH 66
5 3-3- VERGLEICH DER TERTIAERSTRUKTUREN 67
5.4. VERGLEICH MIT DEN DATEN AUS DER KRISTALLSTRUKTUR 70
6. DISKUSSION 75
6.1. MOEGLICHKEITEN UND GRENZEN DER FTIR-UNTERSUCHUNGEN 75
6.2. NMR-LOESUNGSSTRUKTUR: VERGLEICH VON REDUZIERTEN DATENSATZ
UND KONVENTIONELLER STRUKTURBESTIMMUNG 77
6.3. MOEGLICHE URSACHEN DES AKTIVITAETSVERLUSTES DER MUTANTE M26A 78
7. ZUSAMMENFASSUNG 81
8. ANHANG 83
9- LITERATURVERZEICHNIS 95 |
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