Expressionsregulation, funktionelle Bedeutung und klinische Relevanz des Proteins MIA (Melanoma Inhibitory Activity) im malignen Melanom:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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2000
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| Beschreibung: | Aachen, Techn. Hochsch., Habil.-Schr., 2000 |
| Beschreibung: | IV, 131 S. Ill., graph. Darst. : 29 cm |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
I. EINLEITUNG_ .1
1.1 DAS MALIGNE MELANOM (MM).1
1.2 MODELLE DER KREBSENTSTEHUNG.3
1.2.1 PROLIFERATION UND WACHSTUMSFAKTOREN
.4
1.2.2 INVASION UND ADHAESIONSMOLEKUELE
.8
1.2.3 TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
.12
1.2.4 CHROMOSOMENABERRATIONEN, ONKOGENE UND TUMORSUPPRESSORGENE
.13
1.2.5. YYIMMUNE ESCAPE" VON MELAMONZELLEN
.16
1.2.6. MEKMOM-SPEZIFISCHE PROTEINE
.-.16
1.3 MIA (MELANOMA INHTOITORY
ACNVNV).17
1.3.1. ENTDECKUNG DES PROTEINS MIA
.17
1.3.2. KLONIERUNG DES PROTEINS MIA
.18
1.3.3 CHARAKTERISIERUNG DES PROTEINS MIA
.19
1.3.4 GENOMISCHE STRUKTUR UND BESTIMMUNG DER CHROMOSOMALEN LAGE DES MIA
GENS
.20
1.3.5 ERSTE ANALYSE ZUR EXPRESSION
.20
II. ERGEBNISSE:.23
N.L
ANALYSEN ZUR REGULATION DER PROTEINEXPRESSION.23
II. 1.1 MIA-EXPRESSIONSMUSTER IN VITRO UND IN VIVO
.23
11.1.2 REGULATION DER MIA MRNA TRANSKRIPTION IN MELANOMZELLEN
.
27
II. 1.3 EXTERNE REGULATION DER MIA TRANSKRIPTION
.34
II. 1.4. REGULATION DER MIA TRANSLATION UND SEKRETION
.36
UE.2 MIA
PROTEINSTRUKTUR.37
H.3 ANALYSEN ZUR FUNKTION DES PROTEINS MIA.39
11.3.1 INHIBIERUNG DES ZELL-ATTACHMENTS UND MOLEKULARE MECHANISMEN
.39
11.3.2 REGULIERTE INTRAZELLULAERE SIGNALWEGE
.45
11.3.3 FUNKTION IN VITRO
.47
11.3.4 PROTEINFUNKTION IN VIVO
.49
11.3.5 MIA-YYKNOCK OUT" MAUS
.50
H.4 DIAGNOSTISCHE EINSATZGEBIETE.52
11.4.1 MIA ALS SERUMMARKER DES MALIGNEN MELANOMS
.53
I
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/961415037
INHALTSVERZEICHNIS
11.4.2 MIA ALS RT-PCR MARKERFIIR ZIRKULIERENDE MELANOMZELLEN IM BLUT
.58
11.4.3 MIA ALS TUMOR-ASSOZIIERTES ANTIGEN
.60
H.5 EIGENE, ZITIERTE ORIGINALLITERATUR.61
III. DISKUSSION_64
HI. 1 ANALYSEN ZUR REGULATION DER MIA-EXPRESSION.64
III. 1.1 TRANSKRIPTIONELLE REGULATION.64
FFL.2
ANALYSEN ZUR FUNKTION VON MIA.69
111.2.1 STRUKTUR DES PROTEINS MIA
.69
111.2.2 MIA FUNKTION IN VITRO
.70
111.2.3 MIA FUNKTION IN VIVO
.75
HI. 3 KLINISCHE EINSATZGEBIETE.77
III. 3.1 DIAGNOSTIK.77
HI. 3.1.1 SERUMDIAGNOSTIK.77
M.3.1.2 MELANOMZELLNACHWEIS IM BLUT.78
III. 3.2 THERAPIE
.80
FFL.3.2.1 MIA ALS TUMORASSOZIIERTES ANTIGEN.80
HI.3.2.2 THERAPIEANSAETZE.80
M.3.2.3 GENTHERAPIE.81
IV. ZUSAMMENFASSUNG.83
V. LITERATUR.85
VI. ANHANG.182
VI. 1 MATERIAL UND METHODEN.102
VI. 1.1. PUFFER, MEDIEN UND LOESUNGEN
.102
VI. 1.2 MATERIALIEN
.105
VI. 1.2.1 PLASMIDE.105
VI. 1.2.2 CHEMIKALIEN UND ENZYME.105
VI. 1.2.3 MOLEKULARGEWICHTSSTANDARD.106
VI. 1.2.4 GERAETE UND MATERIALIEN.107
VI. 1.2.5 BAKTERIEN UND ZELLINIEN.107
VI. 1.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN
.108
VI. 1.3.1 KULTIVIERUNG VON BAKTERIEN.109
II
INHALTSVERZEICHNIS
VI. 1.3.2 KLONIERUNG UND SEQUENZIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN.109
VI. 1.3.2.1 KLONIERUNG.109
VI. 1.3.2.2 TRANSFORMATION.109
VI. 1.3.2.3 SEQUENZIERUNG VON PLASMID-DNA.110
VI. 1.3.2.4 POLYMERASE-CHAIN-REACTION (PCR).110
VI. 1.3.2.5 MUTAGENESE VON PLASMIDKONSTRUKTEN.110
VI. 1.3.3 PLASMIDPRAEPERATIONEN.'.111
VI. 1.3.3.1 MINI-PREP.111
VI. 1.3.3.2 MAXI-PREP.112
VI. 1.3.4 MARKIERUNG VON SONDEN.112
VI. 1.3.5 KLONIERUNG VON GENOMISCHEN UND CDNA SEQUENZEN MITTELS
PHAGEN-SCREENINGL 12
VI. 1.3.5.1 SCREENEN VON PHAGEN BANKEN.112
VI. 1.3.5.2 ISOLIERUNG VON PHAGEN-DNA.113
VI. 1.3.6 GELELEKTROPHORESE.114
VI. 1.3.6.1 QUALITATIVE AGAROSE-GELELEKTROPHORESE.114
VI. 1.3.6.2 SOUTHERN BLOTS.114
VI. 1.3.6.3 GELELEKTROPHORESE ZUR DNA-REINIGUNG.115
VI. 1.3.7 RNA-ISOLIERUNG UND NORTHEM-BLOTS.115
VI. 1.3.8 REVERSE TRANSCRIPTASE (RT)-POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR).116
VI. 1.3.9 PRIMEREXTENSION UND RACE-PCR.116
VI. 1.3.10 EMSA (ELECTROPHORETIC MOBILITY-SHIFT ASSAY).117
VI. 1.3.10.1 PRAEPERATION VON KEMEXTRAKTEN.117
VI. 1.3.10.2 EMSA.118
VI. 1.3.11 DNA-PROTEINBINDUNGS ASSAY.118
VI.1.4 PROTEINCHEMISCHE METHODEN
. 119
VI. 1.4.1 SDS-PAA-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) [LAEMMLI ET AL.,
1970].119
VI. 1.4.2 BLOT-VERFAHREN.119
VI. 1.4.2.1 WESTEM-BLOTTING.119
VI. 1.4.2.2 SOUTH-WESTEM-BLOTTING.119
VI. 1.4.3 MIA-EXPRESSION IN E.COLI.120
VI. 1.4.4 MIA-EXPRESSION IN EUKARYONTEN.120
VI. 1.4.5 MIA - ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (MIA-ELISA).121
VI. 1.4.6 IMMUN- UND KOIMMUNPRAEZIPITATION.121
III
INHALTSVERZEICHNIS
VI. 1.4.7 MIA-PROTEIN-INTERAKTIONEN.121
VI. 1.4.8 PHAGE DISPLAY.122
VI. 1.4.9 NMR ANALYSEN.122
VI. 1.4.10 PHOSPHO SPOT ANALYSEN.122
VI. 1.5. ZELLKULTUR UND TRANSFEKTIONEN
.123
VI. 1.5.1 KULTIVIERUNG VON EUKARYONTISCHEN ZELLEN.123
VI. 1.5.2 TRANSIENTE TRANSFEKTIONEN REKOMBINANTER CDNA.123
VI. 1.5.3 STABILE TRANSFEKTIONEN.124
VI. 1.5.4 REPORTERGENANALYSEN.124
VI. 1.5.5 IN-VIVO EXPRESSIONS KLONIERUNG.124
VI. 1.5.6 PROLIFERATIONSMESSUNGEN.125
VI. 1.5.6 ANALYSE VON INVASION UND ATTACHMENT.125
VI.1.6. TIEREXPERIMENTELLE ARBEITEN
.126
VI. 1.6.1 IN VIVO METASTASIERUNGSMODEL].126
VI. 1.6.2 KO-MAEUSE.127
VI.2
ABKUERZUNGEN
.128
VII. DANKSAGUNG.130
IV |
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