Allergische Reaktionen auf kleinmolekulare Substanzen: In-vitro-Charakterisierung antigen-spezifischer T-Lymphozyten am Beispiel von Duftstoffen, para-Phenylendiamin und deren Metaboliten
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
9
2.1
MATERIAL
.
9
2.1.1
PATIENTEN
.
9
2.1.2
ANTIGENE
.
9
2.1.3
LOESEN
DER
ALLERGENE
.
9
2.1.4
STRUKTURFORMELN
HAEUFIG
VERWENDETER
ALLERGENE
.
10
2.1.5
HAEUFIG
VERWENDETE
MATERIALIEN
UND
GERAETE
.
12
2.1.6
PUFFER
UND
STAMMLOESUNGEN
.
13
2.1.7
KULTURMEDIEN
.
14
2.1.8
ANTIKOERPER
.
15
2.1.9
OLIGONUKLEOTID
PRIMER
.
16
2.2
METHODEN
.
17
2.2.1
ZELLULAERE
METHODEN
.
17
2.2.1.1
ISOLATION
VON
PBMC
.
17
2.2.1.2
ETABLIERUNG
LYMPHOBLASTOIDER
B-ZELLINIEN
.
17
2.2.1.3
ISOLATION
VON
MONOZYTEN
MITTELS
MACS
.
18
2.2.1.4
ISOLATION
VON
MONOZYTEN
MITTELS
DYNAL
SYSTEM
.
18
2.2.1.5
KULTUR
VON
HUMANEN
DENDRITISCHEN
ZELLEN
.
18
2.2.1.6
KULTUR
VON
HUMANEN
KERATINOZYTEN
.
19
2.2.1.7
KULTURBEDINGUNGEN
.
19
2.2.1.8
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
.
19
2.2.1.9
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
PBMC
.
20
2.2.1.10
VERHINDERUNG
DER
ZELLTEILUNG
.
20
2.2.1.11
FIXIERUNG
VON
STIMULATORZELLEN
.
20
2.2.1.12
V
ORINKUBATION
VON
APZ
MIT
ALLERGENEN
.
20
2.2.1.13
T-ZELLKLONIERUNG
AUS
LAESIONALER
HAUT
.
21
2.2.1.14
T-ZELLKLONIERUNG
AUS
PBMC
.
21
2.2.1.15
INDUKTIONSVERSUCHE
VON
APZ
MIT
3-MC
UND
DUFTSTOFFEN
.
22
2.2.2
FUNKTIONSTESTS
.
22
2.2.2.1
EPIKUTAN-TESTUNG
.
22
2.2.2.2
DER
LYMPHOZYTEN-TRANSFORMATIONS-TEST
.
22
2.2.2.3
TOXIZITAETSASSAYS
.
23
2.2.2.4
RESTIMULATION
VON
T-ZELLBLASTEN
.
23
2.2.2.5
PROLIFERATIONSASSAY
MIT
T-ZELLKLONEN
.
24
2.2.2.6
LTT
UNTER
VERWENDUNG
VON
HUMANEN
LEBERMIKROSOMEN
.
24
2.2.2.7
RADIOAKTIVE
PROLIFERATIONSMESSUNG
.
25
2.2.2.8
NICHT-RADIOAKTIVE
PROLIFERATIONSMESSUNG
.
25
2.2.2.9
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
25
2.2.2.10
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
MESSUNG
DES
T-ZELLAKTIVIERUNGSMARKERS
CD69
.
25
INHALTSVERZEICHNIS
2.2.2.
11
ANTIKOERPER-BLOCKIERUNGSEXPERIMENTE
.
26
2.2.2.12
BESTIMMUNG
VON
ZYTOKINEN
.
26
2.2.3
MOLEKULARE
METHODEN
.
27
2.2.3.1
ISOLATION
VON
GESAMT-RNA
.
27
2.2.3.2
REVERSE-TRANSKRIPTION
DER
RNA
.
27
2.2.3.3
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
.
28
2.2.3.4
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.
29
2.2.3.5
ON-LINE-RT-PCR
.
29
3
RESULTATE
.
33
3.1
POLYKLONALE
STIMULATIONEN
PERIPHERER
LYMPHOZYTEN
INDUZIERT
DURCH
DUFTSTOFFE,
PPD
UND
DESSEN
METABOLITE
.
33
3.1.1
OPTIMIERUNG
DER
KULTURBEDINGUNGEN
.
33
3.1.1.1
LOESEN
DER
ALLERGENE
.
33
3.1.1.2
TOXIZITAETSMESSUNG
DER
ALLERGENE
.
34
3.1.1.3
TESTUNG
UNTERSCHIEDLICHER
SEREN
.
37
3.1.1.4
TESTUNG
UNTERSCHIEDLICHER
ZELLDICHTEN
.
37
3.1.1.5
TESTUNG
UNTERSCHIEDLICHER
MIKROTITERPLATTEN
.
39
3.1.1.6
VERGLEICH
VON
PROLIFERATIONSMESSMETHODEN
.
39
3.1.2
PROLIFERATIONSVERHALTEN
PERIPHERER
LYMPHOZYTEN
AUF
DUFTSTOFFE
.
40
3.1.3
PROLIFERATIONSVERHALTEN
PERIPHERER
LYMPHOZYTEN
AUF
PPD
UND
DESSEN
METABOLITE
.
42
3.1.4
CD69-MESSUNG
AKTIVIERTER
PERIPHERER
LYMPHOZYTEN
.
46
3.2
ZYTOKINEXPRESSIONSMUSTER
VON
APZ
NACH
STIMULATION
MIT
DUFTSTOFFEN
.
47
3.2.1
ZYTOKINEXPRESSION
(IL-LSS)
IN
DZ
(HERKOEMMLICHE
RT-PCR)
.
47
3.2.2
ZYTOKINEXPRESSIONSMUSTER
VON
KERATINOZYTEN
(ON-LINE-RT-PCR)
.
48
3.3
PHAENOTYPISCHE
UND
FUNKTIONALE
CHARAKTERISTIKA
ALLERGEN-SPEZIFISCHER
TCC
.
51
3.3.1
DUFTSTOFF-SPEZIFISCHE
TCC
.
51
3.3.1.1
PROLIFERATIONSVERHALTEN
DER
TCC
.
51
3.3.1.2
OBERFLAECHENMARKER
DER
TCC
.
51
3.3.1.3
ZYTOKINMUSTER
DER
TCC
.
53
3.3.1.4
HLA-RESTRIKTION
UND
RELEVANZ
VON
ADHAESIONSMOLEKUELEN
.
53
3.3.2
PPD/BB-SPEZIFISCHE
TCC
.
55
3.3.2.1
PROLIFERATIONSVERHALTEN
DER
TCC
.
55
3.3.2.2
OBERFLAECHENMARKER
DER
TCC
.
56
3.3.2.3
TCRDERTCC
.
57
3.3.2.4
ZYTOKINMUSTER
DER
TCC
.
57
3.3.2.5
HLA-RESTRIKTION
DER
TCC
.
59
3.3.2.6
PROLIFERATION
DER
TCC
UNTER
VERWENDUNG
FIXIERTER
APZ
.
60
3.3.2.7
PROLIFERATION
DER
TCC
UNTER
VERWENDUNG
VORINKUBIERTER
APZ
.
61
3.4
POLYKLONALE
STIMULATIONEN
PERIPHERER
LYMPHOZYTEN:
EINFLUSS ANTIGEN
MODIFIZIERTER
LEBERMIKROSOMEN
.
62
3.4.1
OPTIMIERUNG
DES
LTT
UNTER
ZUSATZ
HUMANER
LEBERMIKROSOMEN
.
62
3.4.2
EINFLUSS
DUFTSTOFF-MODIFIZIERTER
LEBERMIKROSOMEN
AUF
DAS
PROLIFERATIONSVERHALTEN
PERIPHERER
LYMPHOZYTEN
.
63
3.4.3
EINFLUSS
PPD/BB-MODIFIZIERTER
LEBERMIKROSOMEN
AUF
DAS
PROLIFERATIONSVERHALTEN
PERIPHERER
LYMPHOZYTEN
.
64
3.5
CHARAKTERISIERUNG
DER
METABOLISCHEN
KAPAZITAET
VON
APZ
AUF
RNA-EBENE
.
66
II
INHALTSVERZEICHNIS
3.5.1
ETABLIERUNG
UND
FACS-ANALYSE
VON
APZ
.
66
3.5.2
CYTOCHROM-P450-ISOENZYME
IN
APZ
.
66
3.5.3
NAT1/2
UND
GSTM1/
M3
IN
APZ
.
69
3.6
INDUKTION
VON
CYTOCHROM-P450-ISOENZYMEN
DURCH
DUFTSTOFFE
IN
APZ
.
70
3.6.1
UNTERSUCHUNG
MITTELS
HERKOEMMLICHER
RT-PCR
.
70
3.6.2
UNTERSUCHUNG
MITTELS
ON-LINE-RT-PCR
.
71
4
DISKUSSION
.
73
5
LITERATUR
.
89
III |
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| title_full | Allergische Reaktionen auf kleinmolekulare Substanzen In-vitro-Charakterisierung antigen-spezifischer T-Lymphozyten am Beispiel von Duftstoffen, para-Phenylendiamin und deren Metaboliten vorgelegt von Sonja Ute Sieben, geb. Hellenbrandt |
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