Untersuchungen zu Struktur- und Funktionsbeziehungen an der pyrophosphatabhängigen Phosphofructokinase aus Kartoffeln unter besonderer Berücksichtigung der Rolle der Sulfhydrylgruppen:
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2001
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| Beschreibung: | Leipzig, Univ., Diss., 2001 |
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Datensatz im Suchindex
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG
_1
1.1. EINTEILUNG DER PHOSPHOFRUCTOKINASEN 1
1.2. DIE PPA-PFK 4
1.3. DIE PPA-PFK DER KARTOFFEL 5
1.4. DIE PPA-PFK IM ZELLSTOFFWECHSEL DER PFLANZEN 9
2. AUFGABENSTELLUNG
_13
3. MATERIAL UND METHODEN
_14
3.1. MATERIAL 14
3.1.1. CHEMIKALIEN 14
3.1.2. ENZYME 14
3.2. METHODEN 15
3.2.1. REINIGUNG DER PPA-PFK AUS KARTOFFELN 15
3.2.2. KONZENTRATIONSBESTIMMUNG DES FRU-6-P UND AKTIVITAETSMESSUNG DER
PPA-PFK 17
3.2 2.1. LOESUNGEN , 17
3.2.2.2. BESTIMMUNG DER FRU-6-P-UND DER FRU-2,6-P
2-KONZENTRATION 17
3.2.2.3. BESTIMMUNG DER PPA-PFK-AKTIVITAET 18
3.2 2.4. BERECHNUNG DER KINETISCHEN PARAMETER 19
3.2.3. BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION NACH BRADFORD 19
3.2.4. REAKTION MIT SH- UND LYSIN-SPEZIFISCHEN REAGENZIEN 20
3.2.4.1. REAKTION MIT O-IODOSOBENZOESAEURE 20
3.2.4.2. REAKTION MIT IAA 20
3.2 4.3. REAKTION MIT PLP 21
3.2.5. SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE 21
3.2.5.1. DURCHFUEHRUNG DER SDS-PAGE 21
3.2.5.2. FAERBEN DER SDS-POLYACRYLAMIDGELE 22
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.2.5.3. AUSWERTUNG UND TROCKNEN DER GELE 23
3.2.6. BESTIMMUNG DES MOLEKULARGEWICHTES MITTELS ANALYTISCHER
GELFILTRATION 24
3.2.7. QUANTIFIZIERUNG DER SH-GRUPPEN MITTELS IAA-EINBAU 24
3.2.71. LOESUNGEN 24
3.2.7.2. IAA-EINBAU 25
3.2.8. STOPPED-FLOW MESSUNG 26
3.2.81. LOESUNGEN 26
3.2.8.2. MESSUNG 26
4. ERGEBNISSE
_28
4.1. REINIGUNG DER PPA-PFK AUS KARTOFFELN ~ 28
4.2. KINETISCHE PARAMETER DER PPA-PFK AUS KARTOFFELN 34
4.3. MODIFIZIERUNG DER SH-GRUPPEN MIT IBS 39
4.3.1. EINFLUSS AUF DIE ENZYMAKTIVITAET 39
4.3.1.1. ENZYMAKTIVITAET IN ABHAENGIGKEIT DER IBS-KONZENTRATION 39
4.3.1.2. EINFLUSS VON SUBSTRATEN UND EFFEKTOREN AUF DIE REAKTION MIT IBS
41
4.3.1.3. EINFLUSS VON DTT AUF DIE INAKTIVIERUNG DER PPA-PFK DURCH IBS 45
4.3.1.4. EINFLUSS VON IAA UND DTNB AUF DIE REAKTION MIT IBS 47
4.3.2. KINETISCHE EIGENSCHAFTEN DER PARTIELL MIT IBS OXIDIERTEN PPA-PFK
48
4.3.3. UNTERSUCHUNG DER QUARTAERSTRUKTUR DER PPA-PFK NACH REAKTION MIT
IBS 51
4.3.4. QUANTIFIZIERUNG DER SH-GRUPPEN NACH REAKTION MIT IBS 57
4.4. REAKTIVITAET DER SH-GRUPPEN 58
4.5. INAKTIVIERUNG DER PPA-PFK MIT IAA 60
4.5.1. ENZYMAKTIVITAET IN ABHAENGIGKEIT DER IAA-KONZENTRATION ' 60
4.5.2. EINFLUSS VON SUBSTRATEN UND EFFEKTOREN AUF DIE INAKTIVIERUNG DURCH
IAA 61
4.5.3 EINFLUSS ANDERER SH-REAGENZIEN AUF DIE ENZYMINAKTIVIERUNG DURCH IAA
62
4.6. MODIFIZIERUNG VON LYSINRESTEN MIT PLP 64
5. DISKUSSION
_ 66
5.1. REINIGUNG DER PPA-PFK AUS KARTOFFELN 66
5.2. CHARAKTERISIERUNG DER PPA-PFK AUS KARTOFFELN 67
5.2.1. A- UND SS-UNTEREINHEIT 67
5.2.2. OLIGOMERE PROTEINSTRUKTUR 67
5.2.3. DIE KINETISCHEN PARAMETER DER PPA-PFK 68
5.3. BEDEUTUNG DER SULFHYDRYLGRUPPEN FUER DIE PROTEINSTRUKTUR UND DIE
KATALYTISCHE AKTIVITAET DER PPA-PFK AUS KARTOFFELN 72
5.3.1. REAKTION DER SULFHYDRYLGRUPPEN MIT IBS UND IAA 72
5.3.2. BEDEUTUNG DER SULFHYDRYLGRUPPEN FUER DIE OLIGOMERE ENZYMSTRUKTUR
74
5.3.3. BEDEUTUNG DER SULFHYDRYLGRUPPEN FUER DIE ENZYMAKTIVITAET UND DIE
SUBSTRATBINDUNG 75
5.4. BEDEUTUNG VON LYSINRESTEN FUER DIE KATALYTISCHE AKTIVITAET DER
PPA-PFK 81
6. ZUSAMMENFASSUNG DER ARBEIT
_~_84
7. LITERATURVERZEICHNIS
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