Zellteilungszyklus und Altern in einer Suspensionskultur von Chenopodium-rubrum-Zellen: Identifizierung und Expression von Zellzykluskontrollelementen in Abhängigkeit vom Alter der Zellkultur
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
I
EINLEITUNG
.
1
1
ALTERUNG
IM
GEGENSATZ
ZU
SENESZENZ
UND
APOPTOSE
.
1
2
CHENOPODIUM
RUBRUM-ZELLKULTUR
.
2
3
DER
ZELLZYKLUS
.
4
3.1
DER
ZELLZYKLUS
BEI
HEFE
.
7
3.2
DER
ZELLZYKLUS
BEI
TIERISCHEN
ZELLEN
.
8
3.3
DER
ZELLZYKLUS
BEI
PFLANZLICHEN
ZELLEN
.
13
4
ZIELSETZUNG
.
19
II
MATERIAL
UND
METHODEN.
20
1
MATERIAL
.
20
1.1
PFLANZENZELLSUSPENSIONSKULTUR
.
20
1.2
HEFE
.
20
1.3
BAKTERIEN
.
21
1.4
VEKTOREN
.
22
1.5
OLIGONUKLEOTIDPRIMER
.
22
1.6
CHEMIKALIEN
UND
VERBRAUCHSMATERIAL
.
23
1.7
COMPUTERPROGRAMME
.
24
2
METHODEN
.
25
2.1
ANZUCHT
UND
ERNTE
DER
SUSPENSIONS-KULTIVIERTEN
CHENOPODIUM
RUBRUM-ZEWEN
.
25
2.1.1
PHOTOAUTOTROPHE
ZELLKULTUR
.
25
2.1.2
HETEROTROPHE
ZELLKULTUR
.
25
2.1.3
BEHANDLUNG
DER
ZELLKULTUR
.
25
2.1.4
ERNTE
DER
CHENOPODIUM
RUBRUM-ZELLSUSPENSION
.
26
2.1.5
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
.
26
2.2
HEFEANZUCHT
.
27
2.2.1
VERWENDETE
NAEHRMEDIEN
.
27
2.2.2
DAUERKULTUREN
.
28
2.3
BAKTERIENANZUCHT
.
28
2.3.1
VERWENDETE
NAEHRMEDIEN
.
28
2.3.2
DAUERKULTUREN
.
29
2.3.3
UEBER-NACHT-KULTUREN
.
29
2.3.4
HETEROLOGE
EXPRESSION
VON
ZELLZYKLUS-CDNAS
.
29
2.3.5
BESTIMMUNG
DER
OPTISCHEN
DICHTE
VON
BAKTERIENKULTUREN
.
30
2.4
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
30
INHALTSVERZEICHNIS
J1
2.4.1
ALLGEMEIN
VERWENDETE
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
30
2.4.2
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
E.
COLI.
.
31
2.4.3
BESTIMMUNG
DER
KONZENTRATION
UND
REINHEIT
VON
NUKLEINSAEUREN
.
32
2.4.4
DNA-REINIGUNG
DURCH
PHENOL/CHLOROFORMEXTRAKTION
UND
PRAEZIPITATION
MIT
ETHANOL
.
32
2.4.5
SPALTUNG
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
.
32
2.4.6
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
VON
DNA
.
34
2.4.7
EXTRAKTION
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
.
34
2.4.8
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
.
34
2.4.9
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
35
2.4.10
TRANSFORMATION
VON
HEFE
.
35
2.4.11
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI.
.
36
2.4.12
DNA-SEQUENZIERUNG
.
38
2.4.13
PCR-AMPLIFIKATION
VON
CDNA-FRAGMENTEN
.
38
2.4.14
SCREENING
DER
CDNA-BANK
UEBER
DNA-HYBRIDISIERUNG
.
39
2.4.14.1
HERSTELLUNG
MALTOSE-INDUZIERBARER
E.
CO//'XL1-BLUE
MRF'
.
39
2.4.14.2
TITERBESTIMMUNG
UND
AUSPLATIEREN
DER
CDNA-BANK
.
40
2.4.14.3
PLAQUE-FILTERABDRUCK
.
40
2.4.14.4
PLAQUE-HYBRIDISIERUNG
.
41
2.4.14.5
HERSTELLUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
DNA-SONDEN
.
41
2.4.14.6
ENTNAHME
VON
X-KLONEN
AUS
AGARPLATTEN
.
42
2.4.14.7
IN
V/VO-EXCISION
DES
PHAGEMIDS
PBLUESCRIPT
AUS
X-UNI-ZAP-XR
.
42
2.4.14.8
'STRIPPEN'VON
RADIOAKTIVEN
SIGNALEN
.
43
2.4.15
NORTHEMBLOT-ANALYSE
.
43
2.4.15.1
GESAMT-RNA-ISOLIERUNG
AUS
PFLANZENZELLEN
.
43
2.4.15.2
M-RNA
ISOLIERUNG
AUS
PFLANZENZELLEN
UND
AUS
GESAMT-RNA
.
44
2.4.15.3
DENATURIERENDE
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
VON
RNA
.
45
2.4.15.4
TRANSFER
VON
RNA
AUF
NYLONMEMBRANEN
(NORTHEMBLOT)
.
45
2.4.15.5
NORTHEMBLOT-HYBRIDISIERUNG
.
46
2.4.16
RT-PCR
.
46
2.4.17
UNTERSUCHUNGEN
VON
PROTEIN-PROTEIN-WECHSELWIRKUNGEN
MIT
DEM
YEAST-TWO-HYBRID-SYSTEM
.
46
2.4.17.1
KOTRANSFORMATION
UND
EXPRESSION
DER
GAL4-AKTIVIERUNGS
UND
BINDUNGSDOMAENE
IN
HEFE
.
47
2.4.17.2
IDENTIFIZIERUNG
VON
PROTEIN-PROTEIN-WECHSELWIRKUNGEN
.
47
2.5
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
.
49
INHALTSVERZEICHNIS
11!
2.5.1
HERSTELLUNG
VON
PROTEINEXTRAKTEN
AUS
CHENOPODIUM
RUBRUM
SUSPENSIONSKULTURZELLEN
.
49
2.5.2
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
NACH
LAEMMLI
(1970)
.
49
2.5.3
WESTERNBLOT
.
50
2.5.4
IMMUNNACHWEIS
VON
PROTEINEN
NACH
WESTEMBLOTTING
.
50
2.6
DURCHFLUSSCYTOMETRIE
.
51
LLL
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION.
52
1
KLONIERUNG
UND
IDENTIFIZIERUNG
VON
CDNAS
VON
ZELLZYKLUS
KONTROLLGENEN
.
52
1.1
DAS
CYCLIN
D3
.
52
1.1.1
KLONIERUNG
DES
CYCLINS
D3.
52
1.1.2
IDENTIFIZIERUNG
DES
CYCLINS
D3
.
53
1.2
DAS
RETINOBLASTOMAPROTEIN
.
57
1.2.1
KLONIERUNG
DES
RETINOBLASTOMAPROTEINS
.
57
1.2.2
IDENTIFIZIERUNG
DES
RETINOBLASTOMAPROTEINS
.
58
1.3
DIE
CYCLIN-ABHAENGIGE
PROTEINKINASE
CDC2B
.
62
1.3.1
KLONIERUNG
DER
CDC2B-KINASE
.
62
1.3.2
IDENTIFIZIERUNG
DER
CDC2B-KINASE
.
63
1.4
DER
TRANSKRIPTIONSFAKTOR
E2F
.
66
1.4.1
KLONIERUNG
DES
TRANSKRIPTIONSFAKTORS
E2F
.
66
1.4.2
IDENTIFIZIERUNG
DES
TRANSKRIPTIONSFAKTORS
E2F
.
67
1.5
DER
CDK-INHIBITOR
ICDK
.
71
1.5.1
ISOLIERUNG
DES
CDK-INHIBITORS
.
71
1.5.2
IDENTIFIZIERUNG
DES
CDK-INHIBITORS
.
71
2
UNTERSUCHUNG
DER
EXPRESSION
VON
ZELLZYKLUSKONTROLLGENEN
.
74
2.1
EXPRESSION
VON
ZELLZYKLUSKONTROLLGENEN
IM
VERLAUF
DER
BATCHKULTUR
.
74
2.2
STEUERUNG
DER
EXPRESSION
VON
ZELLZYKLUSKONTROLLGENEN
DURCH
VERAENDERUNG
DES
KOHLENHYDRATSTATUS
IM
VERLAUF
DER
BATCHKULTUR
.
79
2.3
STEUERUNG
DER
EXPRESSION
VON
ZELLZYKLUSKONTROLLGENEN
DURCH
PHYTOHORMONE
.
94
3
UNTERSUCHUNG
DER
PROTEINSPIEGEL
DER
ZELLZYKLUSKONTROLLPROTEINE
IM
VERLAUF
DER
BATCHKULTUR
.
97
IV
SCHLUSSBETRACHTUNG.
99
V
ZUSAMMENFASSUNG
.
104
VI
SUMM
AR
Y
.
107
VII
LITERATURVERZEICHNIS.
110
VIII
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.
125
INHALTSVERZEICHNIS
_
|V
IX
ANHANG
.
128
1
VERGLEICH
DER
ZELLZYKLUSKONTROLLGENE
VON
CHENOPODIUM
RUBRUM
MIT
ENTSPRECHENDEN
GENEN
ANDERER
EUKARYONTEN
.
128
2
KLONIERUNG
DER
ICDK-CDNA
IN
DEN
PET-EXPRESSIONSVEKTOR
.
132
DANKSAGUNG
ERKLAERUNG |
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| spellingShingle | Fountain, Michelle Denise Zellteilungszyklus und Altern in einer Suspensionskultur von Chenopodium-rubrum-Zellen Identifizierung und Expression von Zellzykluskontrollelementen in Abhängigkeit vom Alter der Zellkultur Hochschulschrift gtt Roter Gänsefuß (DE-588)4263800-8 gnd Suspensionskultur (DE-588)4272660-8 gnd Altern (DE-588)4068596-2 gnd Zellteilung (DE-588)4190668-8 gnd |
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