Verfügbarkeit: Feincharakterisierung von Haemophilus parasuis mittels mikrobiologischer, immunologischer und molekulargenetischer Methoden

Feincharakterisierung von Haemophilus parasuis mittels mikrobiologischer, immunologischer und molekulargenetischer Methoden:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Boretius, Susann (VerfasserIn)
Format:	Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	2000
Schlagworte:	Hochschulschrift
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Beschreibung:	Leipzig, Univ., Diss., 2000
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PANXW. . - MORPHOLOGIE ----------------------- ---- - ----------- --------- ---- ------------ ---------------------------- 4 KAPSEL _ 4 WACHSTUMSBEDINGUNGPN _ 5 BIOCHEMISCHE EIGENSCHAFTEN ------------------------------------------------------------------------------- 5 AENTIBIOTIKARSISTENZ _ 6 EISENSTOFFWECHSD _ 7 POLYPEPTIDMUSTER _ 8 ANHEFTUNGSFAKTOREN _ 9 OBERFLAECHENMEMBRANPROTEINE (OMP) _ 9 STRUKTUR UND BEDEUTUNG DER OMP _ 9 UNTERSUCHUNGEN ZU OMP VON H PAMSUIS _ 11 LIPOPOLYSACDIARIDE _ 12 AUFBAU _ 12 EPS DER HAP-GTUPPE _ 12 SEROLOGSCHE TYPISIERUNG UND IMMUNISIEMNGPVERSUCHE _ 13 SEROLQGISDIE TYPISIERUNG _ 13 IMMUNISIERUNG _ 15 KOLOSTRALE IMMUNITAET. _ 16 GENOTYPISCHE EIGENSCHAFTEN VON H PARASUIS _ 17 PLASMIDVORKOMMEN _ 17 CHROMOSOTNENCHATAKTERISIERUNG _ 18 23 WEITERE HAEMOPHILUS SPEZIES DER SCHWEINE . 19 2.4 PRINZIPIEN, MOEGLICHKEITEN UND GRENZEN EINZELNER METHODEN DER ERREGERCHARAKTERISIERUG . 19 24.1 24.1.1 24.12 24.13 242 243 243.1 2432 24.4 DIE SDS-POLYACRYLAMIDGEKEKKTROPHORESE _ 19 PRINZIP _ 19 VORTEILE UND GRENZEN DER SDS-PAGE _ 20 VERGLEICH ZWISCHEN KONTINUIERLICHER UND DISKONTINUIERLICHER PAGE _ 20 IMMUNOBLOTTING. _ 21 DIE ARTITRAYPRIMEDPO^/MAUSE DXIN RAX&M (AP-PCR) _ 21 PRINZIP DER PCR _ 21 PRINZIP UND MOEGLICHKEITEN DER AP-PCR _ 22 SEQUENZANALYSE DER 16S TRNA _ 23 3 3.1 3.1.1 3.12 3.13 MATERIAL UND METHODEN . 24 UNTERSUCHTE H. FSARASUIS-SXAESMMT . 2A ALLGEMEINES _ 24 ISOLATE DES INFEKTIONSVETSUCHES _ 24 ISOLATE VON MUTTERTIER UND FERKE^PAPPE ---------------------------------------------------------------- 25 INHALTSVERZEICHNIS 32 UNTERSUCHUNGEN ZUM PHAENOTYP . 25 321 BIOCHEMISCHE REAKTIONEN. ---------------------------------------------------------------------------------- 25 322 VERHALTEN VON H/KRAWI-ISOLATEN AUF EISENRESTRIKTIONSMEDIEN _ 25 323 DISKONTINUIERLICHE UND KONTINUIEDICHE SDS-PAGE _ 25 323.1 MATERIAL _ 25 3232 DIESDS-PAGE --------------------------------------------------------------------------------------------- 26 324 CHARAKTERISIERUNG DER OBERFLAECHENMEMBRANPROTEINE _ 26 324.1 MATERIAL _ 26 3242 DIE OMP-PRAEPARATION --------------------------------------------------------------------------------------- 26 3243 KULTIVIERUNGBEDINGUNGEN UND DIE EXPRESSION VON OMP _ 27 325 CHARAKTERISIERUNG VON H /RAIMIR-ISOHTEN MITTELS IMMUNOBLOT _ 28 325.1 VERWENDETE ANTIKOERPER --------------------------------------------------------------- 28 325.1.1 KANINCHENHYPERIMMUNSERUM GEGEN HPARUSUIS. _ 28 325.12 KANINCHENHYPERIMMUNSERUM GEGEN P. MUKODDA. _ 28 325.13 KOLOSTRALMILCH VON SCHWEINEN MIT H JWAWIR-NACHWEIS _ 28 325.1.4 SERUM VON KLINISCH UNAUFFAELLIGEN SCHWEINEN MIT H/AW-NACHWEIS _ 29 3252 VERWENDETE ANTIGENE 29 32521 GANZZELL-LYSATE VON HPAMSIIS ---------------------------------------------------------------- 29 32522 OBERFLAECHENMEMBRANPROTEINE VON H PCRAAIS _ 29 3253 DER IMMUNOBLOT _ 30 326 LPS-CHARAKTERISIERUNG 31 326.1 MATERIAL _ 31 326.1 DIE LPS-MUSTERANALYSE ------------------------------------------------------------------------------------- 31 327 SEROTYPISIERUNG 31 33 UNTERSUCHUNGEN ZUM GENOTYP . 31 33.1 UNTERSUCHUNGEN ZUM PLASMIDVOTKOMMEN _ 31 33.1.1 MATERIAL _ 31 33.12 DIE PLASMIDBESTIMMUNG _ _32 332 CHARAKTERISIERUNG MITTEKIVFETERY/RAWA/PCR(AP-PCR) 32 3321 UNTERSUCHUNGEN ZU STABILITAET UND REPRODUZIERBARKEIT DER METHODE _ 32 3322 ISOLATEGFUPPEN, DIE MITTELS AP-PCR UNTERSUCHT WURDEN _ 33 33221 VERGLEICH VON ISOLATEN DER BETRIEBEN NI UND P MIT DEN REFERENZSTAEMMEN _ 33 3.3222 ISOLATE AUS ERKRANKTEN TIEREN UNTERSCHIEDLICHER BESTAENDE _ 33 3.3223 ISOLATE DES INFEKTIONSVERSUCHES _ 33 33224 ISOLATE VON H/TRAARR BEI SAU UND FERKEL _ 33 33225 ISOLATE EINES BETRIEBES, DIE IM ABSTAND VON 5 JAHREN GEWONNEN WURDEN _ 33 3323 DIEAP-PCR 34 3323.1 DNA-ISOLIERUNG ---------------------------------------------------------------------------------------------- 34 33232 DURCHFUEHRUNG DER AP-PCR _ 34 33.3 DNA-SEQUENZANALYSE DER 16S TRNA AUSGEWAEHLTER H /URAMIR-ISOLATB _ 35 333.1 DNA-ISOLIERUNG _ 35 33.32 PCR UND ISOLIERUNG DER DIE 16SRRNA CODIERENDEN DNA-SEQUENZEN _ 35 3333 LIGPTION UND TRANSFORMATION ------------------------------------------------------------------------------ 36 3.33.4 DNA-SEQUENZIERUNG SEQUENZIERREAKTION UND PAGE - , _ 37 333.4.1 SEQUENZIERREAKTION _ 37 333.42 POLYACTYIAMIDGDELEKTROPHORESE ---------------------------------------------------------------------------- 38 INHALTSVERZEICHNIS 3.4 DATENANALYSE UND STATISTIK . 38 4 ERGEBNISSE _ 39 4.1 PHAENOTYPISCHE EIGENSCHAFTEN VON H. PARASUB-ISDLATEN. _ 39 4.1.1 BIOCHEMISCHE EIGENSCHAFTEN _ 39 4.12 VERHALTEN VON H /MOAIR-ISOLATEN AUF EISENRESTRIKTIONSMEDIEN 39 4.13 CHARAKTERISIERUNG VON HPAMSUIS IN DER SDS-PAGE -------------------------------------------------- 40 4.13.1 DISKONTINUIERIICHE SDS-PAGE ------------------------------------------------------------------- 40 4.132 KONTINUIERLICHE SDS-PAGE _ 43 4.1.4 OBERFLAECHENMEMBRANPROTEINE VON H/KRAMII ---------------------------------------------- 45 4.1.5 ANTIGENE EIGENSCHAFTEN VON H/KRAW-PROTMEN IM IMMUNOBLOT _ 46 4.151 UNTERSUCHUNGEN AN GANZZEFL-LYSATEN-------------------------------------------------------------------- 46 4.151.1 GANZZEAE-LYSATEDERREFERENZSTAEMME 46 4.1512 GANZZELL-LYSATE VON FEKFEOLATEN _ 48 4.1.5.13 ISOLATEN AUS EINER FETKDGFUPPE UND DEN DAZUGEHOERIGEN MUTTERTIEREN _ 49 4.1.52 UNTERSUCHUNGEN AN OBERFLAECHENMEMBRANPROTEINEN -------------------------------------------------- 51 4.1.521 K-KANINCHENHYPERIMMUNSETUM GEGEN B AKDS B 51 4.1.522 O-KANMCHERHYPERIMMUNSERUM GEGEN B AKOS B _ 51 4.1.523 HYPERIMMUNSERUM GEGEN DAS 35 KDA SCHWERE OMP VON PASTEURELLAMUHODIKI _ 51 4.1.524 UNTERSUCHUNGEN ZUR STABILITAET DER OMP-HAUPTBANDE (3642 KDA) 52 4.1.6 ERGEBNISSE DER LIPOPOLYSACCHARID-MUSTERANALYSE 53 4.1.7 SEROTYPISTERUNG VON H/URAIWTR-ISOLATEN. _ 55 4.18 GEMEINSAME BETRACHTUNG EINZELNER PHAENOTYPISCHER MERKMALE _ 56 4.151 EINLEITUNG. _ 56 4.182 GEGENUEBERSTELLUNG VON SEROTYP UND LPS-MUSTER. _ 57 4.183 GEGENUEBERSTELLUNG VON SEROTYP UND PP-MUSTER 57 4.18.4 GEGENUEBERSTELLUNG VON PP UND LPS-MUSTER ----------------------------------------------------------- 58 4.18.5 KOMBINATION VON SEROTYP, PP-UND LPS-MUSTER 59 4.18.6 VERGLEICH VON EDDAMAX UND PP-MUSTERTYP 59 4.18.7 VERGLEICH VON SENSITIVITAET UND SPEZIFITAET DER UNTERSUCHUNGPMETHODEN. _ 60 42 GENOTYPISCHE EIGENSCHAFTEN VON H. PARASUZS-ISOLATEN . 61 421 PLASMIDNACHWEIS _ 61 422 CHARAKTERISIERUNG VON FLYMBWR-ISOLATEN MITTELS AP-PCR 62 4221 PCR-AMPLIFIKATE DER PRIMER I UND II _ 62 4222 UNTERSUCHUNGEN ZUR STABILITAET UND REPRODUZIERBARKEIT DER METHODE _ 62 42221 REPRODUZIERBARKEIT DER METHODE _ _ 62 42.2.2.2 ZUM EINFLUSS WIEDERHOLTER SUBKULTIVIERUNGEN UND VERGLEICH VON EINZELKOLONIEN _ 63 42223 ZUM EINFLUSS DER KULTRVIETUN^BEDINGJNGEN AUF DAS AP-PCR-PTOFIL _ 63 4223 AP-PCR-PROFILE DER BESTAENDE NI UND PIRN VERGLEICH MIT DEN REFERENZSTAEMMEN 64 4224 AP-PCR-PTOFILE DER GRUPPE II AUS UNTERSCHIEDLICHEN BESTAENDEN _ 66 4225 AP-PCR-PTOFILE VON ISOLATEN INNERHALB EINES BESTANDES KLINISCH UNAUFIALLGER SAUEN UND IHRER FETKD IN DEN ERSTEN 12 STUNDEN NACH DER GEBURT _ 68 4226 AP-PCR-PTOFILE VON ISOLATEN EINES BESTANDES IM ABSTAND VON 5 JAHREN _ 69 423 AP-PCR UND PLASMID-ISOLIERUNG. _ 69 424 SEQUENZANALYSE DER 16SRRNA 70 43 GEGENUEBERSTELLUNG PHAENOTYPISCHER UND GENOTYPISCHER EIGENSCHAFTEN VON H. PARASUI&LSCAATEN 73 43.1 ISOLATE DER BESTAENDE NI UND P UND VERGLEICH MIT DEN REFERENZSTAEMMEN _ _ 73 432 ISOLATE DER GNTPPELL UNTERSCHIEDLICHER HERKUNFT 74 433 ISOLATE VON DER NASENSCHLEIMHAUT KLINISCH UNAUFFAELLIGER SAUEN UND IHREN FERKELN _ 74 INHALTSVERZEICHNIS 43.4 QUSTERANALYSEN EINZELNER ELEKTROPHORETISCHER AUFTRENNUNGEN DER PCR-AMPKFIKALE IN BEZIEHUNG ZU PHAENOTYPISCHEN EIGENSCHAFTEN DER ISOLATE -------------------------------------------- 75 43.5 CHARAKTERISIERUNG DER ISOLATE DES INFEKTIONSVETSUCHES ------------------------------------------------ 76 5 DISKUSSION . 5.1 PHAENOTYPISCHE EIGENSCHAFTEN VON H. PARASUIS -------------------------------------- 51.1 WACHSTUM AUF EISEN-HMITIERTEN NAEHRBOEDEN ---- ------------------------------------------- ------ - 512 CHARAKTERISIERUNG MITTELS SDS-PAGE 5.13 CHARAKTERISIERUNG MITTETE DER OBERFLAECHENMEMBRANPROTEINE ---------------------------------------- 5.13.1 BEOBACHTETE OMP-MUSTER _ 5.132 IDENTIFIZIERUNG DER UAUPT-OMP-BANDE ALS PORIN ------------------------------------------------------ 5.133 EINFLUSS DER WACHSTUMSBEDINGPNGEN AUF DAS OMP-MUSTER _ 5.1.4 ANTIGENE EIGENSCHAFTEN VON H/WWER-PROTEINEN IM IMMUNOBLOT ------------------------------- 5.1.4.1 UNTERSUCHUNGEN AN GANZZELL-LYSATEN------------------------------------------- ----------------------- 5.1.42 IMMUNOGENE EIGENSCHAFTEN DER OMP 5.1.5 UNTERSUCHUNGEN ZUM LPS-MUSTER. _ 5.1.6 SEROTYPISIETUNG _ 5.1.7 ZUSAMMENFITSSENDE ANALYSE EINZELNER PHAENOTYPISCHER MERKMALE _ 52 GENOTYPISCHE EIGENSCHAFTEN VON H. PARASUIS. ---------------------------------------- 521 UNTERSUCHUNGEN ZUM PLASMIDVORKOMMEN ------------------------------------------------------------ 522 CHARAKTERISIERUNG MITTELS ARBITROYPRIMEDVCR. ----------------------------------------------------------- 5221 ZUR METHODE DER AP-PCR -------------------------------------------------------------------------------- 5222 AP-PCR-PTOFILE VON H PAMSUS --------------------------------------------------------------------------- 523 AP-PCR UND PLASMIDNACHWEIS --------------------------------------------------------------------------- 524 AP-PCR-MUSTER UND PHAENOTYP -------------------------------------------------------------------------- 525 SEQUENZANALYSE DER 16S RRNA _ S 13 IS 2 3 3 8 88 88 8 8 3 3 3 88 SS 2 8 8 08 3 =1 =8 526 INFEKLIONSVERSUCH ------ 53 SCHLUSSFOLGERUNGEN . 94 6 ZUSAMMENFASSUNG 95 6.1 SUMMARY . 97 7 LITERATURVERZEICHNIS. _ 99 ANHANG I-XVIAE
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