Das RRM-Protein NonA ist Bestandteil eines Ribonukleoproteinkomplexes in Drosophila:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Berlin
Mensch-und-Buch-Verl.
2001
|
| Schriftenreihe: | Forschungsberichte aus der Biologie
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: Berlin, Humboldt-Univ., Diss., 2001 |
| Beschreibung: | 140 S. Ill., graph. Darst. : 21 cm |
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Internformat
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
MUTATIONEN
IM
NONA-GEN
BEWIRKEN
VERHALTENSDEFEKTE
.
1
1.2
NONA
IST
EIN
UBIQUITAERES
CHROMATINASSOZIIERTES
KERNPROTEIN
.
2
1.3
NONA
GEHOERT
ZUR
FAMILIE
DER
RRM-PROTEINE
.
3
1.4
RRM-PROTEINE
UEBEN
EINE
VIELZAHL
VON
FUNKTIONEN
AUS
.
6
1.5
NONA
BINDET
AN
EINZELSTRAENGIGE
NUKLEINSAEUREN
.
10
1.6
THEMENSTELLUNG
.
11
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
12
2.1
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
.
12
2.2
BAKTERIENSTAEMME
UND
-MEDIEN
.
12
2.3
DROSOPHR/A-ZELLKULTUR
.
13
2.4
ANTIKOERPER
.
13
2.4.1
REINIGUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
AUS
ZELLKULTURUEBERSTAENDEN
.
14
2.5
EPITOPKARTIERUNG
FUER
DEN
ANTIKOERPER
BJ6
.
14
2.5.1
CDNA-DELETIONSKLONIERUNG
.
15
2.5.2
PEPTID-SCANNING
.
17
2.6
ISOLATION
VON
ZELLKERNEN
.
18
2.7
SACCHAROSEGRADIENTEN-ULTRAZENTRIFUGATION
.
19
2.8
IMMUNPRAEZIPITATION
AUS
KERNEXTRAKTEN
.
20
2.9
IDENTIFIZIERUNG
VON
PROTEINEN
DURCH
MALDI-TOF-MS
.
21
2.9.1
PEPTIDMASSEN-FINGERPRINTING
.
22
2.9.2
FRAGMENTIONENANALYSE
MIT
PSD-MALDI-MS
.
22
2.10
ALLGEMEINE
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
.
23
2.10.1
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
.
23
2.10.2
PROTEINGELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
UND
PROTEINFAERBUNGEN
.
23
2.10.3
WESTERN-BLOT
.
24
2.10.4
IMMUNDETEKTION
VON
ANTIGENEN
MITTELS
ELISA
.
24
2.11
ALLGEMEINE
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
25
2.12
KLONIERUNG
DER
S5-CDNA
.
26
2.12.1
PARTIELLE
S5-CDNA-KLONE
.
26
2.12.2
5-RACE
.
26
2.13
ISOLATION
VON
RNA
AUS
FLIEGEN
.
27
2.13.1
ISOLATION
VON
GESAMT-RNA
.
27
2.13.2
ISOLATION
VON
POLY(A)
+
-RNA
.
28
2.14
RNA-GELELEKTROPHORESE
.
28
2.15
NORTHERN-BLOT
.
29
2.16
DETEKTION
VON
NUKLEINSAEUREN
DURCH
HYBRIDISIERUNG
.
29
2.16.1
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
HYBRIDISIERUNGSPROBEN
.
29
2.16.2
HYBRIDISIERUNG
UND
DETEKTION
MEMBRANGEBUNDENER
NUKLEINSAEUREN
.
29
2.17
HERSTELLUNG
UND
ISOLIERUNG
REKOMBINANTER
PROTEINE
.
30
2.17.1
KONSTRUKTION
DER
EXPRESSIONSPLASMIDE
.
30
2.17.2
EXPRESSION
REKOMBINANTER
PROTEINE
IN
E.
COLI
.
32
2.17.3
GEWINNUNG
VON
LOESLICHEM
NONA
AUS
E.
COLI
.
32
2.17.4
GEWINNUNG
VON
MH-S5
UND
MH-PEP
.
33
2.18
IN
VIFRO-PROTEIN-PROTEIN-INTERAKTIONSTESTS
.
34
2.19
POLYRIBONUKLEOTID-BINDUNGSTEST
.
35
2.20
ANALYSE
IMMUNPRAEZIPITIERTER
RNA
DURCH
RNA-SLOT-BLOT
.
36
2.21
KLONIERUNG
IMMUNPRAEZIPITIERTER
SEQUENZEN
.
37
2.21.1
KLONIERUNGSSTRATEGIE
.
37
2.21.2
GEWINNUNG
VON
IP-CDNA
UND
KE-CDNA
.
38
2.21.3
SUBTRAKTION
UND
KLONIERUNG
VON
IP-CDNA
.
39
2.21.4
DNA-SLOT-BLOT-HYBRIDISIERUNG
.
40
2.22
SEQUENZANALYSE
.
40
3
ERGEBNISSE
.
41
3.1
SEDIMENTATIONSANALYSE
VON
NONA
.
41
3.1.1
NONA
SEDIMENTIERT
IN
EINEM
HOCHMOLEKULAREN
KOMPLEX
.
41
3.1.2
DER
NONA-KOMPLEX
IST
RNASE-SENSITIV
.
45
3.2
IMMUNPRAEZIPITATION
NONA-ASSOZIIERTER
PROTEINE
.
48
3.2.1
NONA
KOPRAEZIPITIERT
MIT
DEN
PROTEINEN
P100/X4,
P70/S5
UND
HRB87F/P1
1
.
48
3.2.2
NONA
IST
NICHT
BESTANDTEIL
HRP40-ENTHALTENDER
HNRNPS
.
54
3.2.3
IMMUNPRAEZIPITATION
DES
HNRNP
K-AEHNLICHEN
PROTEINS
HRB57A
.
56
3.3
IDENTIFIZIERUNG
NONA-ASSOZIIERTER
PROTEINE
DURCH
MALDI-TOF-MS
.
58
3.3.1
IDENTIFIZIERUNG
VON
NONA
UND
HRB87F
.
59
3.3.2
DAS
X4-ANTIGEN
IST
DAS
RNA-BINDENDE
ZINKFINGERPROTEIN
PEP
.
60
3.3.3
DAS
S5-ANTIGEN
ENTSPRICHT
DEM
ORF
EINER
NEUEN
CDNA-SEQUENZ
.
61
3.4
DIE
SEQUENZ
DES
S5-PROTEINS
.
62
3.4.1
VERVOLLSTAENDIGUNG
DER
S5
CDNA-SEQUENZ
.
62
3.4.2
SEQUENZEIGENSCHAFTEN
DES
S5-PROTEINS
.
65
3.5
RNA-BINDUNGSEIGENSCHAFTEN
DER
IDENTIFIZIERTEN
PROTEINE
.
69
3.6
IN
VITRO-BINDUNG
VON
NONA
AN
S5
UND
PEP
.
71
3.7
ANALYSE
DER
IM
NONA-KOMPLEX
KOPRAEZIPITIERTEN
RNA
.
74
3.7.1
NORTHERN-ANALYSE
AUSGEWAEHLTER TRANSKRIPTE
IN
DER
IP-RNA
.
74
3.7.2
KLONIERUNG
IMMUNPRAEZIPITIERTER
RNA-SEQUENZEN
.
76
4
DISKUSSION
.
81
4.1
EIN
DROSOPHILA
RNP-KOMPLEX
AUS
NONA,
PEP,
S5
UND
HRB87F
.
81
4.2
INFORMATIONEN
ZU
HRB87F
UND
VERWANDTEN
PROTEINEN
.
89
4.3
PEP
IST
EIN
UNGEWOEHNLICHES
ZINKFINGERPROTEIN
.
90
4.4
VERWANDTSCHAFT
DES
S5-PROTEINS
MIT
DEM
HUMANEN
HNRNP
M
.
94
4.5
NONA
IST
BEVORZUGT
MIT
BESTIMMTEN
HNRNAS
ASSOZIIERT
.
96
4.6
PUTATIVE
NONA-ZIELGENE
IM
NERVENSYSTEM
.102
4.7
UEBERLEGUNGEN
ZUR
MOLEKULAREN
WIRKUNG
VON
NONA
.105
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
111
6
LITERATUR
.
112
7
ANHANG
.
124
7.1
DATEN
DER
MALDI-TOF-MASSENSPEKTROMETRIE
.124
7.2
AUFLISTUNG
DER
DNA-KLONE
AUS
DER
NONA-LMMUNPRAEZIPITATION
.129
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
135
DANKSAGUNG
.
137
ERKLAERUNG
.
138
LEBENSLAUF
.
139
VEROEFFENTLICHUNGEN
.
140 |
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| topic_facet | Optomotorische Reaktion Ribonucleoproteine Taufliege Genmutation Hochschulschrift |
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