Antibiotisch aktive Sekundärstoffe aus höheren marinen Pilzen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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2000
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ANTIBIOTISCH AKTIVE SEKUNDAERSTOFFE AUS HOEHEREN MARINEN PILZEN
VOM FACHBEREICH BIOLOGIE DER UNIVERSITAET KAISERSLAUTERN
ZUR VERLEIHUNG DES AKADEMISCHEN GRADES
*DOKTOR DER NATURWISSENSCHAFTEN
GENEHMIGTE
DISSERTATION
(D386)
VORGELEGT VON
MICHAEL DAFERNER
VORSITZENDER:
1. BERICHTERSTATTER:
2. BERICHTERSTATTER:
PROF. DR. H. J. SCHMIDT
PROF. DR. T. ANKE
PROF. DR. E. NEUHAUS
TAG DER WISSENSCHAFTLICHEN AUSSPRACHE
30. AUGUST 2000
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 1
2 MATERIAL UND METHODEN 8
2.1 CHEMIKALIEN 8
2.2 MEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN 10
2.2.1 ZUSAMMENSETZUNG DER KOMPLEXEN MEDIENBESTANDTEILE LAUT
HERSTELLERANGABEN 10
2.2.2 NAEHRMEDIEN FUER PILZE UND BAKTERIEN 11
2.2.3 MEDIEN FUER ZELLKULTUREN 14
2.2.4 PUFFER UND SALZLOESUNGEN 14
2.3 ORGANISMEN 16
2.3.1 BEARBEITETE PILZSTAEMME 16
2.3.2 TESTORGANISMEN FUER DIE BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG 17
2.3.2.1 PILZE UND BAKTERIEN 77
2.3.2.2 ZELLLINIEN 18
2.3.2.3 NEMATODEN 18
2.3.2.4 INSEKTEN 18
2.4 ISOLIERUNG VON MARINEN PILZEN 19
2.4.1 SAMMELN VON PROBENMATERIAL 19
2.4.2 ISOLIERUNG DER PILZSTAEMMEN 19
2.4.3 BESTIMMUNG DER ISOLIERTEN PILZARTEN 20
2.5 KULTIVIERUNG DER PILZE IN SUBMERSKULTUR 21
2.5.1 FERMENTATION IN SCHUETTELKULTUR UND HERSTELLUNG DER ROHEXTRAKTE 21
2.5.2 SCREENING NACH ANTIMIKROBIELLEN WIRKSTOFFEN 21
2.5.3 FERMENTATION DER PRODUZENTENSTAEMME IN 20-1-, 25-1- UND
100-1-MASSSTAB 22 2.5.4 FERMENTATIONSANALYSEN 24
2.5.4.1 PH-WERT 24
2.5.4.2 ENZYMATISCHE BESTIMMUNG DES GLUCOSE- UND MALTOSEGEHALTES 24
2.5.4.3 MYCELTROCKENGEWICHT 24
2.5.4.4 ABGASANALYTIK 24
2.5.4.5 WIRKSTOFFBESTIMMUNG MIT HILFE DER ANALYTISCHEN HPLC. 25
2.5.4.6 MEDIENVERSUCH ZUR ERMITTLUNG DER OPTIMALEN MEERSALZKONZENTRATION
25
2.6 METHODEN ZUR REINIGUNG UND PHYSIKALISCH-CHEMISCHEN CHARAKTERISIERUNG
DER SEKUNDAERMETABOLITE 26
2.6.1 SAEULENCHROMATOGRAPHIE 26
2.6.2 DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE 27
2.6.3 HPLC-ANALYSE 28
2.6.4 SPEKTROSKOPIE 29
2.7 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG 30
2.7.1 AGARDIFFUSIONSTEST UND BIOAUTOGRAPHIE 30
2.7.1.1 AGARDIFFUSIONSTEST UNTER ZUGABE VON
3-HYDROXY-3-METHYLGLUTARYL-COENZYM A....30 2.7.2 BESTIMMUNG DER
MINIMALEN HEMMSTOFFKONZENTRATION (MHK) IM REIHEN- VERDUENNUNGSTEST 31
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
2.7.3 CYTOTOXIZITAETSTEST 31
2.7.3.1 SUSPENSIONSKULTUR 32
2.7.3.2 MONOLAYERKULTUREN 32
2.7 .4 IN VITRO-TRANSLATION BEI DER HEFE SACCHAROMYCES CEREVISIAE 33
2.7.4.1 HERSTELLUNG DER ZELLEXTRAKTE 33
2.7.4.2 IN VITRO-TRANSLATION 33
2.7.4.3 MESSUNG DER RADIOAKTIVITAET ALS MASS FUER DIE ERFOLGTE
PROTEINBIOSYNTHESE 34 2.7.5 EINFLUSS AUF DIE SAUERSTOFFAUFNAHME VON
PENICILLIUM NOTATUM 34 2.7.6 EINBAU RADIOAKTIVER VORSTUFEN IN
SAEUREFAELLBARES MATERIAL IN VIVO 34
2.7.6.1 HL-60-ZELLEN 34
2.7.6.2 PAECILOMYCES VARIOTUE 35
2.7.6.3 NEMATOSPORA CORYLI. 55
2.7.6.4 BACILLUS SUBTILIS 36
2.7.7 PFLANZENKEIMUNGSTEST 36
2.7.8 HAEMOLYSETEST 37
2.7.9 TEST AUF NEMATIZIDE AKTIVITAET 37
2.7.10 TESTS AUF INSEKTIZIDE AKTIVITAET 38
2.7.11 NBT-DIFFERENZIERUNGSTEST 38
2.7.12 THROMBOCYTENAGGREGATIONSTEST 38
2.7.12.1 RINDERTHROMBOCYTEN 38
2.7.12.2 HUMANTHROMBOCYTEN 39
2.7.13 BIOMIMETRISCHE REAKTION MIT L-CYSTEIN 39
3 ERGEBNISSE 40
3.1 ISOLIERUNG MARINER PILZE 40
3.2 SEKUNDAERMETABOLITEAUS//K/ OATLOARCAEOCC/A/M97-25 41
3.2.1 HYPOXYLON CROCEUM M97-25, EIN PRODUZENT VON SORDARIN,
HYPOXYSORDARIN, HYPOXYLACTON, 5-METHYLMELLEIN UND HYMATOXIN C 41
3.2.2 HYPOXYLON CROCEUM M97-25 41
3.2.3 FERMENTATION VON HYPOXYLON CROCEUM M97-25 IM 1-1-MASSSTAB 42 3.2.4
FERMENTATION IM 1 -1-MASSSTAB BEI VERSCHIEDENEN MEERSALZKONZENTRATIONEN
43 3.2.5 FERMENTATION VON HYPOXYLON CROCEUM M97-25 IM 20-1- UND
100-1-MASSSTAB 44 3.2.6 REINIGUNG DER VERBINDUNGEN AUS HYPOXYLON CROCEUM
M97-25 46
3.2.7 PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON HYPOXYLACTON UND
HYPOXYSORDARIN 48
3.2.8 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON HYPOXYLACTON, SORDARIN UND
HYPOXYSORDARIN.. 54 3.2.8.1 ANTIMIKROBIELLES WIRKUNGSSPEKTRUM 54
3.2.8.2 EINFLUSS AUF DIE MAKROMOLEKUELSYNTHESEN BEI PILZEN IN VIVO 56
3.2.8.3 EINFLUSS AUF DIE PROTEINBIOSYNTHESE BEI PILZEN IN VITRO 57
3.2.8.4 CYTOTOXIZITAETSTEST 58
3.2.8.5 EINFLUSS AUF DIE MAKROMOLEKUELSYNTHESEN BEI HL-60-ZELLEN IN VIVO
59 3.2.8.6 WEITERE BIOLOGISCHE TESTSYSTEME 59
3.2.9 VERGLEICHENDE FERMENTATION VON SORDARIA ARANEOSA ATCC 36386 60
3 3 SEKUNDAERMETABOLITE AUS ZOMZX/)L477/ S CBS 611.97 61 3 3.1
ZOPFLELLA LATIPES CBS 611.97 ALS PRODUZENT VON ZOPFIELLAMID A UND B 61
3.3.2 ZOPFIELLA LATIPES CBS 6U.97 61
3 33 FERMENTATION VON ZOPFLELLA LATIPES CBS 611.97 IM 1-1-MASSSTAB 62 3
3.4 FERMENTATION IM 1 -1-MASSSTAB BEI VERSCHIEDENEN
MEERSALZKONZENTRATIONEN 63 3.3.5 FERMENTATION VON ZOPFIELLA LATIPES CBS
611.97 IM 20-1-MASSSTAB 63 3.3.6 REINIGUNG DER VERBINDUNGEN AUS ZOPFIELLA
LATIPES CBS 611.97 65
3.3.7 PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON ZOPFIELLAMID A UND B
67 3.3.8 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON ZOPFIELLAMID A UND
ZOPFIELLAMID B 72 3.3.8.1 ANTIMIKROBIELLES WIRKUNGSSPEKTRUM 72
3.3.8.2 EINFLUSS AUF DIE MAKROMOLEKUELSYNTHESEN BEI BACILLUS SUBTILIS IN
VIVO 74 3.3.8.3 EINFLUSS AUF DIE MAKROMOLEKUELSYNTHESEN BEI NEMATOSPORA
CORYLI IN VIVO 76 3.3.8.4 CYTOTOXIZITAETSTEST 77
3.3.8.5 WEITERE BIOLOGISCHE TESTSYSTEME 77
3.4 SEKUNDAERMETABOLITE AUS COROLLOSPORA INTERMEDU KMPB H-768 78 3.4.1
COROLLOSPORA INTERMEDIA KMPB H-768 78
3.4.2 FERMENTATION VON COROLLOSPORA INTERMEDIA KMPB H-768 IM 1-1-MASSSTAB
79 3.4.3 FERMENTATION VON COROLLOSPORA INTERMEDIA KMPB H-768 IM
2,5-1-MASSSTAB 80 3.4.4 REINIGUNG DER VERBINDUNGEN AUS COROLLOSPORA
INTERMEDIA KMPB H-768 81
3.4.5 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG VON TRAPOXIN A 82
3.4.5.1 ANTIMIKROBIELLES WIRKUNGSSPEKTRUM 82
3.4.5.2 EINFLUSS VON TRAPOXIN A AUF DIE MAKROMOLEKUELSYNTHESEN BEI PILZEN
IN VIVO 84 3.4.5.3 EINFLUSS VON TRAPOXIN A AUF DIE MAKROMOLEKUELSYNTHESEN
BEI BACILLUS SUBTILIS IN VIVO 86
3.4.5.4 CYTOTOXIZITAETSTEST 86
3.4.5.5 EINFLUSS VON TRAPOXIN A AUF DIE MAKROMOLEKUELSYNTHESEN BEI
HL-60-ZELLEN 87 3.4.5.6 WEITERE BIOLOGISCHE TESTSYSTEME 88
3.5 SEKUNDAERMETABOLITE AUS COROLLOSPORA MARITIMA CBS 214.60 89 3.5.1
COROLLOSPORA MARITIMA CBS 214.60 89
3.5.2 FERMENTATION VON COROLLOSPORA MARITIMA CBS 214.60 IM 1-1-MASSSTAB
90 3.5.3 FERMENTATION IM 1-1-MASSSTAB BEI VERSCHIEDENEN
MEERSALZKONZENTRATIONEN 91 3.5.4 FERMENTATION VON COROLLOSPORA MARITIMA
CBS 214.60 IM 25-1-MASSSTAB 92 3.5.5 REINIGUNG DER VERBINDUNG AUS
COROLLOSPORA MARITIMA CBS 214.60 93 3.5.6 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG
VON 1233A 95
3.5.6.1 ANTIMIKROBIELLES WIRKUNGSSPEKTRUM VON 1233A IM
AGARDIFFUSIONSTEST. 95
3.6 SEKUNDAERMETABOLITE AUS PHIALOPHOROPHOMA LITORALISCBS 190.82 96 3.6.1
PHIALOPHOROPHOMA LITORALIS CBS 190.82 96
3-6.2 FERMENTATION VON PHIALOPHOROPHOMA LITORALIS CBS 190.82 IM
1-1-MASSSTAB 97 3.6.3 FERMENTATION IM 1-1-MASSSTAB BEI VERSCHIEDENEN
MEERSALZKONZENTRATIONEN 98 3-6.4 FERMENTATION VON PHIALOPHOROPHOMA
LITORALIS CBS 190.82 IM 20-1-MASSSTAB 99 3-6.5 REINIGUNG DER VERBINDUNGEN
AUS PHIALOPHOROPHOMA LITORALIS CBS 190.82 100 3.6.6
PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG DER ISOLIERTEN VERBINDUNGEN 101
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
3.6.7 BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER VERBINDUNGEN AUS
PHIALOPHOROPHOMA LITORALIS CBS 190.82 113
3.6.7.1 ANTIMIKROBIELLES WIRKUNGSSPEKTRUM 113
3.6.7.2 EINFLUSS VON PHIALON E AUF DIE MAKROMOLEKUELSYNTHESEN BEI
NEMATOSPORA CORYLI IN VIVO U5
3.6.7.3 CYTOTOXIZITAETSTEST 116
3.6.7.4 HEMMUNG DER THROMBOZYTENAGGREGATION 116
3.6.7.5 NBT-DIFFERENZIERUNGSTEST 117
3.6.7.6 WEITERE BIOLOGISCHE TESTSYSTEME 117
3.7 WEITERE FERMENTATIONEN 118
4 DISKUSSION 120
4.1 KULTIVIERUNG UND FERMENTATION HOEHERER MARINER PILZE 122
4.2 HYPOXYLON CROCEUMM97-25: PRODUZENT VON HYPOXYSORDARIN, HYPOXYLACTON,
SORDARIN, 5-METHYLMELLEIN UND HYMATOXIN C 125
4.2.1 SORDARICIN-DERIVATE 126
4.2.2 HYPOXYLACTON 130
4.2.3 5-METHYLMELLEIN UND HYMATOXIN C 131
4.3 ZOPFIELLA LATIPES CBS 611.97: PRODUZENT VON ZOPFIELLAMID A UND B 132
4.3.1 ZOPFIELLAMIDE A UND B 133
4.4 ZOPFIELLA MARINA CBS 155.77 ALS PRODUZENT VON ZOFIMARIN 135
4.5 PHIALOPHOROPHOMA LITORALIS CBS 190.82 ALS PRODUZENT VON
PHIALON A,B, C, D . E U N DF 135
4.6 VARICOSPORINA RAMULOSA CBS 398.65 ALS PRODUZENT VON COLLETODIOL 138
4.7 COROLLOSPORA MARITIMA CBS 214.60 ALS PRODUZENT DES ANTIBIOTIKUMS
1233A 139
4.8 COROLLOSPORA INTERMEDIA KMPB H-768 ALS PRODUZENT VON TRAPOXIN A 141
4.9 SEKUNDAERSTOFFE AUS HOEHEREN MARINEN PILZEN 147
4.10 FOLGERUNGEN ZUR HERKUNFT DER HOEHEREN MARINEN PILZE 148
5. ZUSAMMENFASSUNG 151
6. LITERATURVERZEICHNIS 152
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