Einfluß von Modulatoren der Signaltransduktion auf die Sekretion von Elastase aus neutrophilen Granulozyten:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG.1
2 THEORETISCHE GRUNDLAGEN.3
2.1 MECHANISMEN DER ENTZUENDUNGSREAKTION.3
2.2 MORPHOLOGIE UND FUNKTION DER NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN.4
2.2.1 MIKROSKOPISCHER BAU DER NEUTROPHILEN. 4
2.2.2 ADHAESION, CHEMOTAXIS UND PHAGOZYTOSE.6
2.2.3 DEGRANULATION.7
2.2.4 GENERIERUNG REAKTIVER SAUERSTOFFVERBINDUNGEN.8
2.3 CHARAKTERISIERUNG DER ELASTASE ALS EIN ENZYM DER AZUROPHILEN GRANULA
DER
NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN.10
2.3.1 EIGENSCHAFTEN DER PMN-ELASTASE.10
2.3.2 REGULATION DER AKTIVITAET UND DER SEKRETION VON ELASTASE DER
NEUTROPHILEN
GRANULOZYTEN. 11
2.3.3 KLINISCHE BEDEUTUNG DER PMN-ELASTASE.77:.12
2.3.4 MESSMETHODEN ZUR BESTIMMUNG DER AKTIVITAET UND DER KONZENTRATION VON
PMN-ELASTASE.13
2.4 BEEINFLUSSUNG DER DEGRANULATION DER NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN.14
2.4.1 CHEMOTAKTISCHE STOFFE.15
2.4.2 CALCIUMIONOPHORE.15
2.4.3 PHORBOLESTER.16
2.4.4 CYTOCHALASIN B.16
2.5 SIGNALTRANSDUKTION IN NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN.17
2.5.1 PLASMAMEMBRANREZEPTOREN.17
2.5.2 G-PROTEINE.18
2.5.3 PHOSPHOLIPASE C, PHOSPHOLIPASE D UND DEREN REAKTIONSPRODUKTE.19
2.5.4 PHOSPHOLIPASE A
2
.20
2.5.5 PHOSPHATIDYLINOSITOL 3-KINASE.20
2.5.6 PROTEINKINASEN UND PROTEINPHOSPHATASEN.20
2.6 ZIELSTELLUNG UND AUFGABEN.22
3 MATERIALIEN UND METHODEN.24
3.1 PRAEPARATION UND STIMULATION DER NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN.24
3.1.1 PRAEPARATION DER NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN.24
3.1.2 STIMULATION DER NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN.25
3.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR BESCHAFFENHEIT DES ZELLSEDIMENTS UND DER
VITALITAET
DER NEUTROPHILEN.27
3.2.1 ERMITTLUNG DER ZELLZAHL UND GROESSENVERTEILUNG DER
NEUTROPHILENPRAEPARATION. 27
3.2.2 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE UNTERSUCHUNGEN DER
NEUTROPHILENPRAEPARATION.28
3.2.3 MESSUNG DER LUMINOLVERSTAERKTEN CHEMILUMINESZENZ.28
3.3 BESTIMMUNG DER ELASTASEAKTIVITAET UND DER ELASTASEKONZENTRATION.28
3.3.1 MESSUNG DER ELASTASEAKTIVITAET.28
3.3.2 BESTIMMUNG DER ENZYMKONZENTRATION MIT HILFE EINES HOMOGENEN
IMMUN TESTS.32
II
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.4 BEEINFLUSSUNG DER ELASTASESEKRETION DURCH MODULATOREN DER
SIGNALTRANSDUKTION.34
3.5 NACHWEIS VON SS-GALACTOSIDASE AUF DER BASIS DER DIOXETHANCHEMILUMI-
NESZENZ.36
4 ERGEBNISSE. 39
4.1 OPTIMIERUNG DER VERFAHREN ZUM ELASTASENACHWEIS MITTELS KOMMERZIELLER
ELASTASE AUS NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN.39
4.1.1 AKTIVITAETSMESSUNG MIT MEOSUCC-ALA-ALA-PRO-VAL-PNA.39
4.1.1.1 SPEKTRUM DES MEOSUCC-ALA-ALA-PRO-VAL-PNA.39
4.1.1.2 EINFLUSS DER ELASTASEKONZENTRATION.40
4.1.1.3 EINFLUSS DER KONZENTRATION VON MEOSUCC-ALA-ALA-PRO-VAL-PNA.41
4.1.1.4 EINFLUSS DES INHIBITORS
MEOSUCC-ALA-ALA-PRO-VAL-CHLORMETHYLKETON.42
4.1.2 MESSUNG DER ELASTASEKONZENTRATION MIT DEM ECOLINE-TEST.43
4.1.2.1 EINFLUSS VON HUMANEM PLASMA AUF DIE ELASTASEMESSUNG MIT DEM
ECOLINE-TEST.43
4.2 EINFLUSS VON STIMULATOREN AUF DIE ELASTASESEKRETION VON NEUTROPHILEN
GRANULOZYTEN.44
4.2.1 VERGLEICH VERSCHIEDENER STIMULATOREN.44
4.2.2 KINETIK DER ELASTASESEKRETION NACH DER STIMULATION.45
4.3 UNTERSUCHUNGEN ZUR ZELLVITALITAET DER NEUTROPHILEN.48
4.3.1 BESCHAFFENHEIT DES ZELLSEDIMENTS NACH DER PRAEPARATION.48
4.3.2 LUMINOL-CHEMILUMINESZENZ.48
4.3.3 DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE UNTERSUCHUNGEN AM ZELLSEDIMENT.49
4.4 ELASTASESEKRETION UND SIGNALTRANSDUKTIONSPROZESSE.53
4.4.1 EINFLUSS VON PROTEINPHOSPHATASEHEMMEM AUF DIE SEKRETION VON
ELASTASE.53
4.4.2 BEEINFLUSSUNG VON ENZYMEN, DIE IN FRUEHE
SIGNALTRANSDUKTIONSPROZESSE
EINBEZOGEN SIND UND WIRKUNG AUF DIE ELASTASESEKRETION.56
4.4.3 EINFLUSS VON PROTEINKINASEN UND ANDEREN ENZYMEN AUF DIE
ELASTASESEKRETION. 58
4.5 NACHWEIS VON SS-GALACTOSIDASE MIT HILFE DER
DIOXETHANCHEMILUMINESZENZ. 60
5 DISKUSSION.63
5.1 CHARAKTERISIERUNG DER NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN.63
5.2 NACHWEIS DER FREISETZUNG VON SS-GALACTOSIDASE MIT EINEM
CHEMILUMINESZENZ-
VERFAHREN.64
5.3 ELASTASE-MESSUNGEN ZUM NACHWEIS DER DEGRANULATION AZUROPHILER
VESIKEL. 65
5.4. ROLLE EINZELNER ENZYME BEI DER FREISETZUNG DER ELASTASE.67
5.5. VERGLEICH DER ERGEBNISSE ZUR DEGRANULATION MIT ANDEREN
FUNKTIONELLEN EIGEN
SCHAFTEN DER NEUTROPHILEN.72
5.6 INTRAZELLULAERE SIGNALWEGE.73
6 ZUSAMMENFASSUNG.76
7 LITERATURVERZEICHNIS.79
SELBSTAENDIGKEITSERKLAERUNG.91
DANKSAGUNG.92
LEBENSLAUF.93
III |
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