Charakterisierung der Regulation der am Acetatstoffwechsel von Corynebacterium glutamicum beteiligten Enzyme:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
I
ABKUERZUNGEN
IV
1.
EINLEITUNG
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
6
2.1.
CHEMIKALIEN
6
2.2.
BAKTERIENSTAEMME,
PLASMIDE
UND
OLIGONUKLEOTIDE
6
2.3.
NAEHRMEDIEN
UND
KULTIVIERUNGSBEDINGUNGEN
8
2.3.1.
NAEHRMEDIEN
8
2.3.2.
STAMMHALTUNG
UND
KULTIVIERUNGSBEDINGUNGEN
11
2.4.
TRANSFORMATIONSTECHNIKEN
12
2.5.
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
VON
DNA
13
2.6.
ANALYSE,
REKOMBINATION
UND
AMPLIFIKATION
VON
DNA
15
2.6.1.
RESTRIKTION
UND
MODIFIKATION
VON
DNA
15
2.6.2.
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
17
2
6.3.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
17
2.6.4.
SEQUENZIERUNG
VON
DNA
18
2.6.5.
SOUTHERN-BLOT-HYBRIDISIERUNG
19
2.7.
PRAEPARATION
UND
ANALYSE
VON
RNA
21
2.7.1.
ISOLIERUNG
VON
RNA
AUS
C.
GLUTAMICUM
2
1
2.7.2.
NORTHEM-BLOT-HYBRIDISIERUNG
22
2.7.3.
PRIMER-EXTENSION-ANALYSEN
24
2.8.
PRAEPARATION
UND
ANALYSE
VON
PROTEINEN
26
2.8.1.
HERSTELLUNG
VON
ZELLEXTRAKTEN
UND
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
PROTEINEN
26
2.8.2.
KONZENTRIERUNG
UND
ENTSALZEN
VON
PROTEINLOESUNGEN
28
2.8.3.
TRICHLORESSIGSAEURE
(TCA)-FAELLUNG
VON
PROTEINEN
29
2.8.4
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
29
2.8.5.
FAERBUNG
VON
PROTEINEN
IN
POLYACRYLAMID-GELEN
29
2.9.
IN
W'VO-MARKIERUNG
VON
PROTEINEN
MIT
L-[
35
S]METHIONIN
30
II
INHALTSVERZEICHNIS
2.10.
BESTIMMUNG
VON
ENZYMAKTIVITAETEN
31
2.10.1.
BESTIMMUNG
DER
CHLORAMPHENICOL-ACETYLTRANSFERASE-AKTIVITAET
31
2.10.2
BESTIMMUNG
DER
ACETAT-KINASE-AKTIVITAET
31
2.10.3.
BESTIMMUNG
DER
PHOSPHOTRANSACETYLASE-AKTIVITAET
32
2.10.4.
BESTIMMUNG
DER
ISOCITRAT-LYASE-AKTIVITAET
33
2.10.5.
BESTIMMUNG
DER
MALAT-SYNTHASE-AKTIVITAET
33
2.10.6.
BESTIMMUNG
DER
CITRAT-SYNTHASE-AKTIVITAET
34
2.11.
ANREICHERUNG
EINES
DNA-BINDENDEN
PROTEINS
34
2.11.1.
AMONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
34
2.11.2.
HEPARIN-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
35
2.113
DNA-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
35
2.12.
GELRETARDATIONSEXPERIMENTE
37
2.13.
ZWEIDIMENSIONALE
GELELEKTROPHORESE
37
3.
ERGEBNISSE
'
43
3.1.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
REGULATION
DER
AM
ACETATSTOFFWECHSEL
VON
C.
GLUTAMICUM
BETEILIGTEN
ENZYME
DURCH
DIE
KOHLENSTOFFQUEILE
IM
MEDIUM
43
3.2.
ANALYSE
DERPTA
UND
AC^-SPEZIFISCHEN
TRANSKRIPTE
IN
C.
GLUTAMICUM
44
3.3.
TRANSKRIPTIONSSTARTBESTIMMUNG
DER
AM
ACETATSTOFFWECHSEL
BETEILIGTEN
GENE
46
3.3.1
TRANSKRIPTIONSSTARTBESTIMMUNG
DES
ACEA
UND
DES
ACESS-GENS
46
3.3.2.
TRANSKRIPTIONSSTARTBESTIMMUNG
DES
PTA-ACK-OPERONS
51
3.4.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
TRANKRIPTIONELLEN
REGULATION
DER
AM
ACETAT
STOFFWECHSEL
VON
C.
GLUTAMICUM
BETEILIGTEN
GENE
54
3.5.
IDENTIFIZIERUNG
EINES
GENS,
DESSEN
GENPRODUKT
AN
DER
REGULATION
DES
ACETATSTOFFWECHSELS
BETEILIGT
IST
56
3.5.1.
EXPERIMENTE
ZUR
KOMPLEMENTATION
EINER
POTENTIELL
REGULATIONSDEFEKTEN
C.
GLUTAMICUM-MUTANTE
56
3.5.2.
VERSUCHE
ZUR
REGULATION
DES
CORYNEBAKTERIELLEN
ACESS-PROMOTORS
IN
E.
COLI
62
3.5.3.
TRANSPOSONMUTAGENESE
VON
C.
GLUTAMICUM
ATCC
14752
65
3.6.
ANREICHERUNG
UND
TEILREINIGUNG
EINES
AN
DER
REGULATION
DES
ACETATSTOFFWECHSELS
BETEILIGTEN
REGULATORPROTEINS
72
3.7.
VERGLEICH
DER
PROTEINSYNTHESE
IN
C.
GLUTAMICUM-ZELLTN
NACH
WACHSTUM
AUF
GLUKOSE
BZW.
ACETAT
78
INHALTSVERZEICHNIS
III
4.
DISKUSSION
84
S.
ZUSAMMENFASSUNG
99
6.
LITERATUR
103
ANHANG
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