Klonierung und Charakterisierung von Membranproteinen aus der CAM-Pflanze Kalanchoë daigremontiana (Crassulaceae):
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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| Beschreibung: | III, 163 Bl. Ill., graph. Darst. : 30 cm |
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INHALTSVERZEICHNIS
I
I EINLEITUNG.1
1.1 PLASMAMEMBRAN.1
1.1.1 PRIMAER AKTIVER TRANSPORT.1
1.1.2 SEKUNDAER AKTIVER TRANSPORT.4
1.1.3 PASSIVER TRANSPORT.6
1.2 MEMBRANSYSTEME DES CHLOROPLASTEN.7
1.2.1 INNERE UND AEUSSERE MEMBRAN DER CHLOROPLASTENHUELLE.7
1.2.2 THYLAKOIDMEMBRAN: PHOTOSYSTEM I UND H* ATP-SYNTHETASE.11
1.3 VAKUOLE UND TONOPLAST
.V.13
1.3.1 MALATTRANSPORT UEBER DEN TONOPLASTEN.16
1.3.2 BEKANNTE UND GEREINIGTE MALATTRANSPORTER.17
1.4 DIE VERSUCHSPFLANZE
KALANCHOEDAIGREMONTIANA
.18
1.5 VORAUSSETZUNGEN.18
1.6 ZIELSETZUNG.19
II MATERIAL UND METHODEN.20
2.1 MATERIAL. 20
2.1.1 GERAETE.:.20
2.1.2 CHEMIKALIEN.20
2.1.3 YYKIT"-SYSTEME.21
2.1.4 ENZYME.21
2.1.5 BAKTERIENSTAEMME.22
2.1.6 VEKTOREN.23
2.1.7 OLIGONUKLEOTIDSEQUENZEN.23
2.2 DIE VERSUCHSPFLANZE
KALANCHOE:DAIGREMONTIANA
.24
2.3 ARBEITEN MIT MIKROORGANISMAN.25
2.3.1 ANZUCHT DES PHAGEN
X AUF AGARPLATTEN.25
2.3.2 SUBKLONIERUNG AUS X ZAP UE (RAPID EXCISION).26
2.3.3 MEDIEN UND LOESUNGEN.26
2.4 AGAROSEGELELKTROPHORESE.27
2.5 REINIGUNG VON DNA AUS AGAROSE UND NACH ENZYMREAKTIONEN.29
2.6 ISOLIERUNG VON NUKLEINSAEUREN
AUS
KALANCHOE: DAIGREMONTIANA
. 29
2.6.1 GESAMT-NUKLEINSAEURE (CTAB-METHODE).,.30
2.6.2 DNA-ISOLIERUNG.30
2.6.3 RNA-ISOLIERUNG.30
2.6.4 MRNA-ISOLIERUNG.31
2.7 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA AUS E. COU.32
2.8 ISOLIERUNG VON DNA AUS DEM PHAGEN X.33
2.9 ANWENDUNGEN DER PCR.34
2.9.1 STANDARDBEDINGUNGEN DER PCR.34
2.9.2 REVERSE TRANSKRIPTION UND 3'-RACE.35
2.9.2.1 3 '-RACE MIT KDIPHOS.37
2.9.2.2 3 '-RACE MIT KD2MD.37
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/960598251
INHALTSVERZEICHNIS U
2.9.3 INVERSE PCR.37
2.10 KLONIERUNG VON PCR-PRODUKTEN.38
2.11 TRANSFORMATION VON
E.
COU.
.40
2.11.1 HERSTELLUNG KOMPETENTER ZELLEN UND ELEKTROPORATION.40
2.11.2 CHEMISCHE TRANSFORMATION (TRANSFORMAID
YY
C).41
2.11.3 INSERT-ANALYSE.41
2.12 ERSTELLEN EINER CDNA-BIBLIOTHEK
AUS
KALANCHOE DAIGREMONTIANA
.42
2.12.1 SYNTHESE DES CDNA-ERSTSTRANGS. .42
2.12.2 CDNA-AMPLIFIKATION MIT YYLONG DISTANCE" PCR.43
2.12.3 ADAPTORLIGATION.44
2.12.4 KLONIERUNG IN XGTL 1.45
2.12.5 VERPACKUNG IN PHAGENKOEPFE.45
2.12.6 AMPLIFIKATION UND LAGERUNG DER CDNA-BIBLIOTHEK.45
2.13 ERSTELLEN EINER GENOMISCHEN DNA-BIBLJOTHEK
AUS
KALANCHOE DAIGREMONTIANA
. 46
2.13.1 PARTIELLER RESTRIKTIONSVERDAU GENOMISCHER DNA MIT
SAUIA
L.46
2.13.2 PARTIELLE FILL-IN-REAKTION.46
2.13.3 KLONIERUNG IN
X
FIX II.47
2.13.4 VERPACKUNG IN PHAGENKOEPFE.48
2.13.5 AMPLIFIKATION UND LAGERUNG DER GEN-BIBLIOTHEK.48
2.14 NICHT-RADIOAKTIVER NACHWEIS VON NUKLEINSAEUREN AUF
NYLONMEMBRANEN MIT DIGOXIGENIN-MARKIERTER SONDE.49
2.14.1 MARKIERUNG DER SONDE MIT DIG-11-DUTP DURCH NICK TRANSLATION.49
2.14.2 MARKIERUNG DER SONDE MIT DIG-11-DUTP DURCH TERMINALE
TRANSFERASE.50
2.14.3 PLAQUE-LIFT.50
2.14.4 SOUTHEM-BLOT.51
2.14.5 HYBRIDISIERUNG DER SONDE.51
2.14.6 DETEKTION DER SONDE DURCH CHEMILUMINESZENZ.52
2.14.7 IDENTIFIZIERUNG POSITIVER PLAQUES.53
2.15 SEQUENZIERUNG VON DNA.54
2.15.1 SEQUENZREAKTION MIT CY-5-MARKIERTEM PRIMER.54
2.15.2 SEQUENZREAKTION MIT CY-5-MARKIERTEN DDNTPS.,.54
2.15.3 POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE.55
2.16 COMPUTERANALYSE.56
III ERGEBNISSE.57
3.1 SUCHE NACH DEM MALATTRANSPORTER-GEN.57
3.2 ABLEITUNG DEGENERIERTER OLIGONUKLEOTIDE.59
3.3 NUKLEINSAEUREISOLIERUNG AUS
KALANCHOE DAIGREMONTIANA
.61
3.4 GROESSE UND QUALITAET DER CDNA-BIBLIOTHEK.63
3.5 GROESSE UND QUALITAET DER GENOMISCHEN DNA-BIBLIOTHEK.65
3.6 NUKLEINSAEURESEQUENZEN FUER DAS HA33-PROTEIN.66
3.6.1 ERMITTLUNG DER CDNA-SEQUENZ.67
INHALTSVERZEICHNIS
ITT
3.6.2 ERMITTLUNG DER SEQUENZ AUF GENOMEBENE.68
3.6.3 CHARAKTERISIERUNG DER NUKLEINSAEURESEQUENZ AUS KALANCHOE
DAIGREMONTIANA.70
3.6.4 VERGLEICHENDE ANALYSE MIT HOMOLOGEN DATENBANKSEQUENZEN.75
3.6.5 PHYLOGENETISCHE UNTERSUCHUNGEN.85
3.6.6 EXPRESSION IN NICHT-GRUENEM GEWEBE.88
3.7 NUKLEINSAEURESEQUENZEN FUER DAS HA34-PROTEIN.89
3.7.1 KLON HA34-1.91
3.7.1.1 ERMITTLUNG DER CDNA-SEQUENZ AUS KALANCHOE DAIGREMONTIANA.91
3.7.1.2 CHARAKTERISIERUNG DER CDNA SEQUENZ AUS KALPNCHOE
DAIGREMONTIANA.92
3.7.1.3 HOMOLOGE KLONE AUS ARABIDOPSIS THALIANA UND ZEA MAYS.94
3.7.1.4 VERGLEICH MIT WEITEREN HOMOLOGEN DATENBANKSEQUENZEN.97
3.7.2 KLON HA34-2.102
3.7.2.1
ERMITTLUNG UND CHARAKTERISIERUNG DER CDNA-SEQUENZ.102
3.7.2.1 VERGLEICH MIT HOMOLOGEN DATENBANKSEQUENZEN.105
3.7.3 KLON HA34-3. 109
3.7.3.1
KLONIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DES GENS AUS KALANCHOE
DAIGREMONTIANA.'.109
3.7.3.2 VERGLEICHENDE ANALYSE MIT HOMOLOGEN PROTEINEN.113
3.7.3.3 PHYLOGENETISCHE UNTERSUCHUNGEN.125
3.7.4 KLON HA34-4. 128
IV DISKUSSION.132
4.1 AUSGANGSSITUATION UND VORGEHENSWEISE.132
4.2 MOLEKUARBIOLOGISCHES ARBEITEN MIT KALANCHOE
DAIGREMONTIANA.1 33
4.3 ABLEITUNG VON OLIGONUKLEOTIDEN AUS AMINOSAEURESEQUENZEN. 133
4.4 HA33: DER TRIOSEPHOSPHAT/PHOSPHAT TRANSLOKATOR.134
4.5 HA34: DER MALATCARRIER?.137
4.5.1 KLONHA34-L: L35 RIBOSOIPALES PROTEIN.139
4.5.2 KLON HA34-2: UNTEREINHEIT PSAL IM REAKTIONSZENTRUM DES PHOTOSYSTEM
1.141
4.5.3 KLON HA34-3: KLON HA34-3: Y-UNTEREINHEIT DER CHLOROPLASTIDAEREN ATP
SYNTHETASE.143
4.6 ABSCHLIESSENDE BETRACHTUNGEN.145
V ZUSAMMENFASSUNG.JL.147
VI LITERATURVERZEICHNIS.148 |
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