Analyse coronaviraler thermosensitiver Mutanten:
Gespeichert in:
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Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
2000
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INHALTSVERZEICHNIS
1
.
-
.1
1.1
CORONAVIREN
.
1
1.1.1
PATHOLOGIE
.
2
1.1.2
GEWEBEKULTUR
DES
HUMANEN
CORONAVIRUS
.
3
1.1.3
MORPHOLOGIE
UND
STRUKTUR
.
3
1.1.4
GENOMSTRUKTUR
UND
-ORGANISATION
.
4
1.1.5
CORONAVIRALE
GENEXPRESSION
.
.
.
6
1.2
DAS
CORONAVIRALE
REPLIKASEGEN
.
8
1.2.1
DIE
POLYPROTEMPROZESSIERUNG
.10
1.2.
1
.1
DIE
PAPAIN-AEHNLICHE
PROTEINASE
.10
1.2.1.2
DIE
3C-AEHNLICHE
PROTEINASE
.
11
1.2.2
RNA-REPLIKATION
.
15
1.2.3
RNA-TRANSKRIPTION
.16
1.3
THERMOSENSITIVE
MUTANTEN
.19
1.3.1
DIE
TS-MUTANTE
MHV
ALB TS
16
.
20
1.4
ZIELSETZUNG
.
22
2.1
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
23
2.2
ENZYME
.
23
2.3
MEDIEN
UND
MEDIENZUSATZE
FUER
GEWEBEKULTUR
.
24
2.4
ZELLINIEN
.
25
2.5
VIREN
.
26
2.6
GEWEBEKULTURFLASCHEN
UND
-PLATTEN
.
26
2.7
SONSTIGE
MATERIALIEN
.
27
2.8
GERAETE
.
27
3
METHODEN
.^.YY.^.^.-.^.^.^.28
3.1
ZELLKULTUR.
.
28
3.2
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
.
28
3.3
INFEKTION
.
29
3.3.1
INFEKTION
DES
ZELLMONOLAYER
EINER
MITTLEREN
GEWEBEKULTURFLASCHE
(MHV
UND
.
29
HCV)
.
29
3.3.2
INFEKTION
DES
ZELLMONOLAYERS
EINER
KLEINEN
GEWEBEKULTURFLASCHE
(MHV
UND
.
29
HCV)
.
29
3.3.3
INFEKTION
ZUR
ERSTELLUNG
EINER
WACHSTUMSKURVE
(HCV)
.
29
3.4
TCIDSO-VIRUSTITRATION
(HCV)
.
30
3.5
PLAQUE
ASSAY
(MHV
UND
HCV)
.
30
3.6
PLAQUEREINIGUNG
(MHV
UND
HCV)
.
30
3.7
ANFAERBUNG
EINES
PLAQUE
ASSAYS
(MHV)
.
31
3.8
ISOLIERUNG
VON
POLYADENYLIERTER
RNA
AUS
INFIZIERTEN
ZELLEN
(MHV)
.
31
3.9
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
32
3.10
PCR
.
32
3.11
TBE-AGAROSEGEL
.
33
3.12
DNA-SEQUENZIERUNG
.
33
4
ERGEBNISSE.
.
35
4.1
SEQUENZANALYSE
DES
POLYMERASELOKUS
DES
MURINEN
HEPATITISVIRUS
.
35
4.1.1
GLIEDERUNG
DES
MHV-POLYMERASELOKUS
.
35
4.1.2
IDENTIFIKATION
DER
MUTATION
VON
MHV
ALB TS
16
UND
DER
REVERSION
VON
.
36
MHV
ALBLOER
IM
VERGLEICH
MIT
MHV
OH99
.
36
4.1.2.1
GEWINNUNG
DER
DNA
VON
MHV
OH99,
MHV
ALB
TS
16
UND
MHV
ALBLOER
.
36
4.1.2.2
IDENTIFIZIERUNG
DER
MUTATION
VON
MHV
ALB
TS
16
IN
FRAGMENT
#4
.
37
4.1.2.3
ERGEBNIS-UEBERSICHT
.
47
4.1.3
BESTAETIGUNG
DER
MUTATION
UND
REVERSION
IN
DREI
UNABHAENGIGEN
ISOLATEN
.51
4.1.3.1
GEWINNUNG
DES
ZWEIFACH
PLAQUEGEREINIGTEN
MHV
ALB
TS
LOEUNDMHV
.51
ALBLOER
.51
4.1.3.1.1
GEWINNUNG
DES
VIRUSSTOCKS
VONMHVALBTS
16
.
51
4.1.3.1.2
GEWINNUNG
DES
PLAQUEGEREINIGTEN VIRUSSTOCKS
VON
MHV
ALB
TS
16
.51
4.1.3.1.3
ERSTE
PLAQUEREINIGUNG
VON
MHV
ALB
TS
16
UND
MHV
ALB
1
6R
.
52
4.1.3.1.4
ZWEITE
PLAQUEREINIGUNG
VON
MHV ALB
TS
16
UND
MHV
ALBLOER
.
52
4.1.3.2
ISOLIERUNG
VON
POLYADENYLIERTER
RNA
VON
MHV
ALB TS
16
UND
MHV
.
54
ALBLOER
AUS
INFIZIERTEN
ZELLEN
.
54
4.1.3.2.1
INFEKTION
.
54
II
4.1.3.2.2
ISOLIERUNG
VON
POLYADENYLIERTER
RNA
MIT
HILFE VON
DYNABEADS
.
54
4.1.3.3
GEWINNUNG
DER
DNA
.
54
4.1.3.4
BESTAETIGUNG
DER
MUTATION
UND
REVERSION
.
55
4.1.4
BESTAETIGUNG
DER
MHV-ALBL6-SPEZIFISCHEN
POSITION
.
57
4.1.4.1
GEWINNUNG
DER
DNA
.
58
4.1.4.2
BESTAETIGUNG
DER
MHV-ALBL6-SPEZIFISCHEN
POSITION
16.957
.
59
4.2
DAS
HUMANE
CORONAVIRUS
229E
.61
4.2.1
DAS
HUMANE
CORONAVIRUS
229E
VON
HAMRE
UND
PROCKNOW
(1966)
.61
4.2.1.1
GEWINNUNG
DES
VIRUSSTOCKS
MIT
HCV
229E
.
61
4.2.1.2
GEWINNUNG
DES
PLAQUEGEREINIGTEN VIRUSSTOCKS MIT
HCV
229E
.
61
4.2.2
INAKTIVIERUNGSKURVE
.
64
4.2.3
WACHSTUMSKURVE
.
67
5
DISKUSSION
.
70
5.1
SEQUENZANALYSE
DES
MHV
OH99,
MHV
ALB
TS
16
UND
MHV
ALBLOER
.
70
5.2
DAS
HUMANE
CORONAVIRUS
229E
.
73
6
ZUSAMMENFASSUNG
.75
7
LITERATURVERZEICHNIS
.YYYY.YY.YY.YY.YY.77
8
ABKUERZUNGEN
.YY.YY.84
9
APPENDIX
-
_
.YYYY.YY.YY.
M
.YY.YY.YYYY.YYYY.YY
M
YY.YYYYYYYY.YYYY.
M
.YY
-
.87
9.1
PRIMER
.
87
9.2
SEQUENZUBERSICHT
.
89
9.3
SEQUENZ
VON
MHV
A59
.
95
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