Produktion des Neurotrophins BDNF und Expression des BDNF-Rezeptors TrkB durch humane Immunzellen:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1
INTERAKTIONEN
ZWISCHEN
IMMUNSYSTEM
UND
NERVENSYSTEM
1
1.2
NEUROTROPHLNE
UND
NEUROTROPHIN-REZEPTOREN
2
1.2.1
ALLGEMEINE
CHARAKTERISTIKA
DER
NEUROTROPHLNE
2
1.2.2
WIRKUNGEN
DER
NEUROTROPHLNE
3
1.2.3
DAS
NEUROTROPHIN
BDNF
4
1.2.4
ALLGEMEINE
CHARAKTERISTIKA
DER
NEUROTROPHIN-REZEPTOREN
6
1.2.5
DER
BDNF-REZEPTOR
TRKB
10
1.3
BEDEUTUNG
DER
NEUROTROPHLNE
IM
IMMUNSYSTEM
12
1.4
GEGENSTAND
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
14
1.4.1
AUFGABENSTELLUNG
14
1.4.2
VERSUCHSPLANUNG
15
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
16
2.1
VERWENDETE
MATERIALIEN
16
2.2
ISOLIERUNG
DER
IMMUNZELLSUBPOPULATIONEN
21
2.2.1
ISOLIERUNG
VON
MONONUKLEAEREN
ZELLEN
AUS
DEM
PERIPHEREN
BLUT
21
2.2.2
IMMUNOMAGNETISCHE
SEPARATION
VON
IMMUNZELLSUBPOPULATIONEN
21
2.3
STIMULATION
DER
IMMUNZELLSUBPOPULATLONEN 23
2.4
ETABLIERUNG
UND
KULTIVIERUNG
ANTIGEN-SPEZIFISCHER
T-ZELL-LLNLEN
23
2.4.1
PRINZIP
DER
GENERIERUNG
ANTIGEN-SPEZIFISCHER
T-ZELL-LINIEN
23
2.4.2
ANSATZ
EINER
PRIMAERKULTUR
24
2.4.3
RESTIMULATION
UND
SPLIT-WELL-VERFAHREN
24
2.4.4
EXPANSION
UND
LANGZEITKULTIVIERUNG
ETABLIERTER
T-ZELL-LINLEN
25
2.5
RADIOAKTIVER
3H-THYMIDLN-PROLIFERATIONSTEST
25
2.6
ZELLZAEHLUNG
26
2.7
FACS-ANALYSE
DER
IMMUNZELLSUBPOPULATIONEN 27
2.8
RT-PCR
ZUM
NACHWEIS
VON
BDNF
UND
TRKB-MRNS
IN
IMMUNZELLEN
28
2.8.1
RNS-ISOLIERUNG
28
2.8.2
REVERSE
TRANSKRIPTION
VON
RNS
IN
KOMPLEMENTAERE
DNS
29
2.8.3
POLYMERASEKETTENREAKTION
30
2.8.4
AGAROSE-GEL-ELEKTROPHORESE
32
2.9
WESTEM-BLOTTLNG
ZUM
NACHWEIS
VON
TRKB-PROTELN
IN
IMMUNZELLEN
33
2.9.1
ZELLYSE
UND
PROTEINBINDUNG
33
2.9.2
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
33
2.9.3
TRANSFER
DER
PROTEINE
AUF
NITROZELLULOSE
35
2.9.4
FAERBEMETHODEN
FOR
DIE
GELE
UND
DIE
NITROZELLULOSEMEMBRANEN
36
2.9.5
IMMUNOCHEMISCHER
NACHWEIS
VON
TRKB-PROTEIN
36
2.10
ELISA
ZUM
NACHWEIS
VON
BDNF-PROTELN
UND
IFN-Y-PROTELN
37
2.11
BIOAKTIVITAETSMESSUNG
DES
VON
IMMUNZELLEN
SEZEMLERTEN
BDNF
37
3.
ERGEBNISSE
38
3.1
AUFREINIGUNGSQUALITAET
DER
IMMUNZELLSUBPOPULATIONEN 38
3.2
STIMULATION
DER
IMMUNZELLSUBPOPULATIONEN 39
3.3
UNTERSUCHUNG
DER
BDNF-PRODUKTION
IN
IMMUNZELLEN
40
3.3.1
EXPRESSION
VON
BDNF-MRNS
IN
IMMUNZELLEN
40
3.3.2
SEKRETION
VON
BDNF-PROTEIN
DURCH
IMMUNZELLEN
40
3.3.3
BIOAKTIVITAET
DES
VON
IMMUNZELLEN
SEZEMIERTEN
BDNF
43
3.3.4
VERGLEICH
DER
PROLIFERATION,
IFN^
UND
BDNF-SEKRETION
VON
T-ZELL-LLNIEN
45
3.4
UNTERSUCHUNG
DER
TRKB*REZEPTOR-EXPRESSION
IN
IMMUNZELLEN
47
3.4.1
EXPRESSION
VON
TRKB-REZEPTOR-MRNS
IN
IMMUNZELLEN
47
3.4.2
EXPRESSION
VON
TRKB-REZEPTOR-PROTEIN
IN
IMMUNZELLEN
50
3.5
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
52
4.
DISKUSSION
53
4.1
ZUSAMMENFASSUNG
UND
BEWERTUNG
DER
EXPERIMENTE
53
4.1.1
PRODUKTION
VON
BDNF
IN
IMMUNZELLEN
53
4.1.2
EXPRESSION
DES
BDNF-REZEPTORS
TRKB
IN
IMMUNZELLEN
55
4.2
BEDEUTUNG
DER
EXPRESSION
VON
BDNF-REZEPTOREN
IM
IMMUNSYSTEM
57
4.2.1
DAS
IMMUNSYSTEM
ALS
ZIEL
FUER
DAS
VON
IMMUNZELLEN
SEZEMIERTE
BDNF
57
4.2.2
EXPRESSION
DES
GP145TRKB-REZEPTORS
IM
IMMUNSYSTEM
58
4.2.3
EXPRESSION
DES
GP95TRKB-REZEPTORS
IM
IMMUNSYSTEM
59
4.2.4
EXPRESSION
DES
P75-NEUROTROPHIN-REZEPTORS
IM
IMMUNSYSTEM
60
4.2.5
WEITERFUEHRENDE
UNTERSUCHUNGEN
61
4.3
BEDEUTUNG
DER
BDNF-SEKRETION
VON
IMMUNZELLEN
IM
NERVENSYSTEM
62
4.3.1
DAS
NERVENSYSTEM
ALS
ZIEL
FUER
DAS
VON
IMMUNZELLEN
SEZEMIERTE
BDNF
62
4.3.2
NEUROPROTEKTIVE
UND
NEUROREGENERATIVE
KOMPONENTEN
DER
ENTZUENDUNG
62
4.3.3
IMMUNZELLEN
ALS
TRANSPORTVEHIKEL
FUER
NEUROTROPHE
FAKTOREN
INS
ZNS
65
4.3.4
NEUROPROTEKTION
UND
NEUROREGENERATION
BEI
DER
MULTIPLEN
SKLEROSE
66
5.
ZUSAMMENFASSUNG
69
6.
LITERATURVERZEICHNIS
70
7.
VERZEICHNIS
DER
VERWENDETEN
ABKUERZUNGEN
85
8.
DANKSAGUNG
87
9.
EIGENE
VEROEFFENTLICHUNGEN
ZUM
THEMA
88
10.
LEBENSLAUF
89 |
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