Belastungsintoleranz bei Patienten mit chronischer Herzinsuffizienz: Einfluß einer gesteigerten iNOS-Expression auf Schrittmacherenzyme des Energiestoffwechsels in der Skelettmuskulatur
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 1
2. EINLEITUNG
2.1. PATHOPHYSIOLOGIE DER HERZINSUFFIZIENZ 2
2.2. MORPHOLOGIE DER SKELETTMUSKULATUR BEI PATIENTEN MIT CHI 3
2.3. SKELETTMUSKELMETABOLISMUS 6
3. ZIELSETZUNG DER ARBEIT _ 9
4. MATERIAL
4.1. PATIENTENSELEKTION 10
4.2 CHEMIKALIEN 10
5. METHODEN
5.1. KLINISCHE METHODEN 11
5.1.1. ERGOSPIROMETRIE 11
5.1.2. MUSKELBIOPSIE 11
5.2. BIOCHEMISCHE METHODEN 12
5.2.1. HOMOGENISIEREN DER MUSKELBIOPSIE 12
5.2.2. VORSCHRIFTEN ZUR BESTIMMUNG VON ENZYMAKTIVITAETEN 12
5.2.2.1. KREATINKINASE 12
5.2.2.2. CITRATSYNTHASE ' 13
5.2.2.3. LAKTATDEHYDROGENASE 13
5.3. MOLEKULARBIOLOGISCHE UND HISTOLOGISCHE METHODEN 14
5.3.1. HAEMALAUN-EOSIN-FAERBUNG 14
5.3.2. IMMUNOHISTOCHEMISCHE DETEKTION DER INOS-EXPRESSION 14
5.3.3. IMMUNOHISTOCHEMISCHE DETEKTION VON NITROTYROSIN 15
5.3.4. PROTEINBESTIMMUNG 16
5.3.5. DISKONTINUIERLICHE SDS-GELELEKTROPHORESE 17
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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5.3.6. ELEKTROTRANSFER VON PROTEINEN AUF PVDF-MEMBRANEN 18
5.3.7. IMMUNODEKORATION DER MI-CK AUF PVDF-MEMBRANEN 19
5.4. ZELLKULTUREXPERIMENTE 20
5.4.1. KULTUR DER L6-RATTENSKELETTMUSKELMYOBLASTEN/-MYOTUBEN 20
5.4.2. VERVIELFAELTIGUNG GENETISCHER INFORMATION MITTELS PCR 20
5.4.3. REINIGUNG DER AMPLIFIZIERTEN DNS 21
5.4.4. LIGATION 21
5.4.5. TRANSFORMATION 22
5.4.6. ISOLATION VON PLASMID 23
5.4.7. ISOLATION VON PLASMID FUER DIE TRANSFEKTION 24
5.4.8. TRANSFEKTION 26
5.4.9. NITRIT-BESTIMMUNG 28
5.4.10. SNP-INKUBATION DER L6-RATTENSKELETTMUSKELMYOBLASTEN/
-MYOTUBEN 28
5.5. STATISTISCHE ANALYSE 29
6. ERGEBNISSE
6.1. PATIENTENKOLLEKTIV 30
6.2. SKELETTMUSKELMORPHOLOGIE 33
6.3. ERGEBNISSE DER BIOCHEMISCHEN SOWIE MOLEKULARBIOLOGISCHEN
ANALYSEN DER SKELETTMUSKULATUR 34
6.3.1. EXPRESSION DER MI-CK 34
6.3.2. ZUSAMMENHANG ZWISCHEN MI-CK-EXPRESSION UND V0
2MAX 36
6.3.3. KREATINKINASEAKTIVITAET 37
6.3.4. CITRATSYNTHASEAKTIVITAET 38
6.3.5. LAKTATDEHYDROGENASEAKTIVITAET 39
6.3.6. IMMUNOHISTOCHEMISCHE DETEKTION DER INOS-EXPRESSION 40
6.3.7. IMMUNOHISTOCHEMISCHE DETEKTION VON NITROTYROSIN 44
6.3.8. ZUSAMMENHANG ZWISCHEN INOS-EXPRESSION UND
BILDUNG VON NITROTYROSIN 47
6.3.9. ZUSAMMENHANG ZWISCHEN INOS-UND MI-CK-EXPRESSION 48
6.4. ERGEBNISSE DER ZELLKULTUREXPERIMENTE 49
6.4.1. EXPRESSION DER MI-CK IN TRANSIENT INOS-TRANSFIZIERTEN
L6-RATTENSKELETTMUSKELMYOBLASTEN/-MYOTUBEN 49
6.4.2. EXPRESSION DER MI-CK IN SNP-INKUBIERTEN L6-RATTEN-
SKELETTMUSKELMYOBLASTEN/-MYOTUBEN 52
7. DISKUSSION 54
7.1. ULTRASTRUKTURELLE VERAENDERUNGEN 57
7.2. VERAENDERUNGEN DES ENERGIESTOFFWECHSELS IN DER SKELETTMUSKULATUR
VON PATIENTEN MIT CHRONISCHER HERZINSUFFIZIENZ 58
7.3. NACHWEIS DER INOS-EXPRESSION IN DER SKELETTMUSKULATUR 63
7.4. EINFLUSS DER INOS-EXPRESSION AUF MI-CK-EXPRESSION UND
BELASTUNGSTOLERANZ _ 65
7.5. ZELLKULTUREXPERIMENTE UND BIOCHEMISCHE MECHANISMEN 65
7.6. SCHLUSSFOLGERUNGEN 68
8. ZUSAMMENFASSUNG 71
9. LITERATURVERZEICHNIS 74
ERKLAERUNG UEBER DIE EIGENSTAENDIGE ABFASSUNG DER ARBEIT
LEBENSLAUF UND WISSENSCHAFTLICHER WERDEGANG
DANKSAGUNG |
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