Konstruktion und Charakterisierung einer cDNA library aus Pfotenballenepidermis des Hundes:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Zürich
Zentralstelle der Studentenschaft
2000
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|---|---|
| adam_text | Titel: Konstruktion und Charakterisierung einer cDNA- Library aus Pfotenballenepidermis des Hundes
Autor: Vennos, Cécile Penelope
Jahr: 2000
Inhalt
Inhalt 1
1. Zusammenfassung/ Summary 3
2. Tabellen- und Abbildungsverzeichnis 5
2.1. Tabellenverzeichnis 5
2.2. Abbildungsverzeichnis 5
3. Abkürzungsverzeichnis 7
4. Einleitung und Fragestellung 11
4.1. Die digitale Hyperkeratose beim lrish Terrier 11
4.2. Das palmoplantare keratoderma (PPK) beim Menschen 14
4.2.1. Desmosomen 16
4.2.2. Keratine 18
4.3. Strategien zur Untersuchung der Ursache von Erbkrankheiten 20
4.4. Expressionsstudien mit cDNA-Libraries 20
4.5. Fragestellung 21
5. Material und Methoden 23
5.1. Material 23
5.1.1. Tiere 23
5.1.2. Geräte 23
5.1.3. Computerprogramme 24
5.1.4. Kits 24
5.1.5. Chemikalien 25
5.1.6. Lösungen und Medien 27
5.1.7. Bakterien und Phagen 30
5.1.8. Enzyme 30
5.1.9. Veibrauchsmaterial 30
5.2. Methoden 32
5.2.1. Die Probenentnahme 32
5.2.2. Die Isolierung von totaler RNA aus Pfotenballenepidermis 32
5.2.3. Die Ergebnisbeurteilung der RNA Isolierung 32
5.2.3.1. Die Bestimmung der RNA Konzentration 32
5.2.3.2. Die Qualitätsprüfung der totalen RNA 32
5.2.4. Die Isolierung von mRNA aus der totalen RNA 33
5.2.5. Die Herstellung einer cDNA-Library aus Pfotenballenepidemus 33
_____________________________________Inhalt
5.2.5.1. Erststrang Synthese 33
5.2.5.2. Zweitstrang Synthese 34
5.2.5.3. Präparierung der cDNA Enden 35
5.2.5.3.1. Blunting 35
5.2.5.3.2. Ligation der EcoR I Adapter 36
5.2.5.3.3. Phosphorylierung der EcoR I Enden 36
5.2.5.3.4. Xho I Verdau 37
5.2.5.4. Grössenauftrennung der cDNA 37
5.2.5.5. Ligation in den Vektor 39
5.2.5.6. Packaging-Kontrolle und Ligations-Kontrolle 40
5.2.5.7. Packaging 41
5.2.5.8. Packaging-Kontrolle und Ligations-Kontrolle der cDNA. Titrierung 42
5.2.5.9. Amplifizieren der Library 42
5.2.5.10. Titrierung von P4 43
5.2.6. Stichprobe Keratin 9 44
5.2.6.1. DNA Extraktion 44
5.2.6.2. PCR-Reaktion 45
5.2.7. Random Klone: Plasmid DNA Extraktion 45
5.2.7.1. Ausplattieren und Picken der Random Klone 45
5.2.7.2. Auszappen der X-Einzelklone 46
5.2.7.3. Aufziehen der Klone und DNA-Extraktion 46
5.2.7.4. EcoRJ/XhoI Verdau 47
5.2.8. Sequenzieren von Plasmid DNA 47
5.2.8.1. Sequenzier-Reaktion 47
5.2.8.2. Präzipitation mit Ethanol 48
5.2.8.3. Sequenzier-Gel 48
6. Resultate 51
6.1. Isolierung von totaler RNA aus Pfotenballenepidermis 51
6.2. Charakterisierung der cDNA-Librarv 52
6.2.1. Stichprobe Keratin 9 52
6.2.2. 120 Expressed Sequence Tags 53
7. Diskussion 59
8. Literatur 69
9. Curriculum vitae 75
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