Zellulär-immunologische Reaktionen der BALB-c-Maus auf Infektionen mit Litomosoides sigmodontis, erfaßt mittels der RT-PCR-Technik:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Wettenberg
VVB Laufersweiler
1999
|
| Ausgabe: | 1. Aufl. |
| Schriftenreihe: | Edition scientifique
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| Beschreibung: | 224 S. graph. Darst. : 21 cm |
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
.
1
2.
LITERATURUEBERSICHT
.
3
2.1. FILARIOSEN
DES
MENSCHEN
.
3
2.1.1.
LYMPHATISCHE
FILARIOSE
DES
MENSCHEN
.
4
2.1.1.1.
KRANKHEITSFORMEN
.
4
2.2.
MODELLE
FUER
MENSCHLICHE
FILARIOSEN
.
6
2.3.
IMMUNREAKTIONEN
BEI
FILARIOSEN
.
7
2.3.1.
HUMORALE
REAKTIONEN
BEI
DER
LYMPHATISCHEN
FILARIOSE
.
8
2.3.2.
T-ZELL-REAKTIONEN
BEI
DER
LYMPHATISCHEN
FILARIOSE
DES
MENSCHEN
UND
IN
TIERMODELLEN
.
10
2.4. DIE
NAGETIERFILARIE
L.
SIGMODONTIS
.
18
2.4.1.
ENTWICKLUNG
VON
L.
SIGMODONTIS
.
18
2.4.2.
IMMUNREAKTIONEN
BEI
INFEKTIONEN
MIT
L.
SIGMODONTIS
.
21
2.5.
DIE
TECHNIK
DER
SEMI-QUANTITATIVEN
RT-PCR
.
24
2.5.1.
THEORETISCHE
ASPEKTE
DER PCR
BEI
SEMI-QUANTITATIVER
ANWENDUNG
.
24
2.5.2.
EINSATZ
DER
SEMI-QUANTITATIVEN
RT-PCR
ZUR
ERFASSUNG
VON
ZYTOKIN-PROFILEN
.
26
2.5.2.1.
(SEMI)QUANTITATIVE
RT-PCR
OHNE
VERWENDUNG
EINES
ZUSAETZLICHEN
STANDARDS
.
28
2.5.2.2.
(SEMI)QUANTITATIVE
RT-PCR
UNTER
VERWENDUNG
EINES
ZUSAETZLICHENEN
STANDARDS
.
28
2.5.2.2.1. VERWENDUNG
EINES
ENDOGENEN
STANDARDS
.
28
2.5.2.2.2.
VERWENDUNG
EINES
EXOGENEN
STANDARDS
.
30
2.5.3.
NACHWEIS
DER
AMPLIFIKATE
.
32
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
34
3.1.
VERSUCHSTIERE
.
34
3.1.1.
SIGMODON
HISPIDUS
(BAUMWOLLRATTEN)
.
34
3.1.2.
MASTOMYS
COUCHA
.
34
3.1.3.
BALB/C-MAEUSE.
34
3.2.
LITOMOSOIDES
SIGMODONTIS
.
35
3.2.1.
ZUCHT
UND
HALTUNG
VON
L.
SIGMODONTIS
.
35
3.2.2.
QUANTITATIVE
INFEKTION
MIT
L.
SIGMODONTIS
.
35
3.2.3.
BESTIMMUNG
DER
BLUT-MIKROFILARIENDICHTE
.
36
3.2.4.
PRAEPARATION
DER
PARASITENANTIGENE
.
37
3.2.4.1.
PRAEPARATION
VON
L.
SIGMORFONTIS-MIKROFILARIENANTIGEN
.
37
3.2.4.2.
PRAEPARATION
VON
ANTIGEN
ADULTER
WEIBLICHER
L.
SIGMODONTIS
.
38
3.3.
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
(1976)
.
38
3.4.
GELELEKTROPHORESEN
FUER
DNA-PROBEN
.
39
3.4.1.
AGAROSEGEL-ELEKTROPHORESE
.
39
3.4.2.
POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE
(PAGE)
.
40
3.5.
STIMULATION
VON
MILZZELLEN
MIT
MITOGEN
UND
ANTIGENEN
.
41
3.5.1.
GEWINNUNG
VON
MILZZELLEN
.
41
3.5.2.
BESTIMMUNG
DER
ANZAHL
UND
VITALITAET
DER
MILZZELLEN
.
41
3.5.3.
STIMULATION
DER
MILZZELLEN
MIT
MITOGEN
UND
FILARIEN-ANTIGENEN
SOWIE
ERNTE
DER
ZELLEN
.
42
3.6.
GEWINNUNG
VON
GESAMT-RNA
AUS
STIMULIERTEN
ZELLEN
.
43
3.6.1.
BESTIMMUNG
VON
KONZENTRATION
UND
INTAKTHEIT
DER
RNA
.
43
3.7.
DNASE
I-BEHANDLUNG
VON
RNA-PROBEN.
44
3.8.
INAKTIVIERUNG
DER
DNASE
I
UND
UEBERPRUEFUNG
DER
NACHFOLGEND
SYNTHETISIERTEN
CDNA
.
44
3.9.
REVERSE
TRANSKRIPTION
DER
GESAMT-RNA
.
45
3.10.
DAS
PLASMID
PMUS3
.
46
3.10.1.
AUFBAU
VON
PMUS3
.
46
3.10.2.
GEWINNUNG
VON
PMUS3
.
47
3.10.3.
LINEARISIERUNG
UND
AUFREINIGUNG
VON
PMUS3
.
47
3.10.4.
IN
VITRO
TRANSKRIPTION
VON
PMUS3
.
48
3.10.5.
REVERSE
TRANSKRIPTION
VON
PMUS3
.
49
3.11.
POLYMERASE
KETTEN
REAKTION
(PCR)
.
50
3.11.1.
BESTIMMUNG
DER
OPTIMALEN
MGCLJ
UND
PRIMERKONZENTRATIONEN
.
51
3.11.2.
BESTIMMUNG
DER
IN
DER
PCR
EINZUSETZENDEN
CDNA-MENGE
.
52
3.11.3.
RNA-TITRATIONSSTUDIEN
.
53
3.11.4.
OPTIMIERUNG
DER
ANNEALING-TEMPERATUR
.
53
3.11.5.
OPTIMIERUNG
DER
ZYKLUSZAHL
.
53
3.11.6.
OPTIMIERUNG
DES
VERHAELTNISSES
MAUS-CDNA
ZU PLASMID-CDNA
.
54
3.11.7.
UNTERSUCHUNG
DER
AMPLIFIKATIONSKONSTANZ
.
54
3.11.8.
QUANTIFIZIERUNG
DER
PCR-AMPLIFIKATE
.
55
3.12.
SOUTHERNBLOT
.
56
3.13.
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.
59
4.
VERSUCHSPLANUNG
.
61
4.1.
VORVERSUCHE
.
61
4.2.
HAUPTVERSUCH
.
61
5.
ERGEBNISSE
.
64
5.1.
ETABLIERUNG
DER
SEMI-QUANTITATIVEN
RT-PCR
.
64
5.1.1.
GEWINNUNG
DER
RNA-PROBEN
UND
REVERSE
TRANSKRIPTION
DER
RNA
IN
CDNA
.
64
5.1.2.
BEHANDLUNG
DER
RNA-PROBEN
MITDNASE
I
UND
INAKTIVIERUNG
DERDNASEL
.
66
5.1.3.
PLASMIDGEWINNUNG
UND
WEITERBEARBEITUNG
.
68
5.1.4.
ERGEBNISSE
ZUR
OPTIMIERUNG
DER
PCR
.
69
5.1.4.1.
ANNEALING-TEMPERATUR,
MGCLJ
UND
PRIMERKONZENTRATION
.
69
5.1.4.2.
ERGEBNISSE
DER
OPTIMIERUNG
DER
ZYKLUSZAHL
.
70
5.1.4.3.
ERGEBNISSE
DER
TITRATIONSSTUDIEN
.
79
5.1.4.3.1.
CDNA-TITRATIONSSTUDIEN
.
79
5.1.4.3.2.
RNA-TITRATIONSSTUDIEN
.
84
5.1.4.4.
ERGEBNISSE
ZUR
UNTERSUCHUNG
DER
AMPLIFIKATIONSKONSTANZ
.
86
5.1.4.5.
PCR-SCHEMA
FUER
DEN
HAUPTVERSUCH
.
90
5.1.5.
SOUTHEMBLOT
.
92
5.2.
ERGEBNISSE
DER
QUANTITATIVEN
INFEKTION
MIT
L.
SIGMODONTIS
BEI
BALB/C-MAEUSEN
.
96
5.2.1.
MIKROFILARAEMIE
.
96
5.2.2.
WURMBUERDE
.
99
5.3.
TRANSKRIPTION
DER
UNTERSCHIEDLICHEN
ZYTOKIN-GENE
IM
VERLAUF
DER
INFEKTION
MITZ.
SIGMODONTIS
.
103
5.3.1.
RNA-PRAEPARATIONEN
DER
ZELLEN
DER
TIERE
DES
HAUPTVERSUCHS
.
103
5.3.2.
ERFASSUNG
DER SSJ-MIKROGLOBULIN-GEN-TRANSKRIPTE
.
103
5.3.3.
IL-2-GEN-TRANSKRIPTION
.
105
5.3.4.
IL-4-GEN-TRANSKRIPTION
.
112
5.3.5.
IL-5-GEN-TRANSKRIPTION
.
119
5.3.6.
IL-10-GEN-TRANSKRIPTION
.
125
5.3.7.
IL-13-GEN-TRANSKRIPTION
.
131
5.3.8.
IFNY-GEN-TRANSKRIPTION
.
138
5.3.9.
TNFA-GEN-TRANSKRIPTION
.
144
6.
DISKUSSION
.
150
6.1.
EINFUEHRUNG
DER
SEMI-QUANTITATIVEN
RT-PCR
ZUR
BESTIMMUNG
VON
ZYTOKINPROFILEN
.
150
6.2.
ZU
PARASITAEMIE
UND
WURMPOPULATION
NACH
QUANTITATIVER
INFEKTION
VON
BALB/C-MAEUSEN
MIT
LITOMOSOIDES
SIGMODONTIS
.
157
6.3.
ZUR
MITOGEN
UND
ANTIGEN-INDUZIERTEN
TRANSKRIPTION
VON
ZYTOKIN-GENEN
IN
VITRO
IM
VERLAUF
DER
L.
SIGMODONTIS-INFEKTION
DER
BALB/C-MAUS
.
161
7.
ZUSAMMENFASSUNG
.
184
8.
SUMMARY
.
188
9.
LITERATURVERZEICHNIS
_
191
10.
ANHANG
.
221 |
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