Reaktion von Pholasin mit reaktiven Sauerstoffverbindungen und Peroxidasen in Modellsystemen und neutrophilen Granulozyten:
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VI
1 EINLEITUNG 1
2 THEORETISCHER TEIL 3
2.1 DIE IMMUNABWEHR NEUTROPHILER GRANULOZYTEN 3
2.1.1 DIE AKTIVIERUNG NEUTROPHILER GRANULOZYTEN 3
2.1.1.1 WICHTIGE SIGNALWEGE 4
2.1.1.2 DEGRANULATION 5
2.1.1.3 DIE AKTIVIERUNG DER NADPH-OXIDASE 6
2.1.2 DIE BILDUNG REAKTIVER SAUERSTOFFVERBINDUNGEN 8
2.1.2.1 SUPEROXIDANIONRADIKALE UND WASSERSTOFFPEROXID 8
2.1.2.2 DIE REAKTIONEN DER MYELOPEROXIDASE UND DIE BILDUNG VON HYPO- 8
CHLORIGER SAEURE
2.1.2.3 BILDUNG WEITERER REAKTIVER SAUERSTOFFVERBINDUNGEN 11
2.2 METHODEN ZUM NACHWEIS REAKTIVER SAUERSTOFFVERBINDUNGEN 12
2.2.1 DER CYTOCHROM C-TEST 12
2.2.2 LUMINOL-CHEMILUMINESZENZ 13
2.2.3 LUCIGENIN-CHEMILUMINESZENZ 15
2.2.4 PHOLASIN-LUMINESZENZ 17
I
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
2.3 AUFGABENSTELLUNG
19
3 ERGEBNISSE 20
3.1 PHOLASIN-LUMINESZENZ IM VERGLEICH ZU ANDEREN METHODEN ZUM 20
NACHWEIS DER ROS
3.1.1 PHOLASIN-LUMINESZENZ UND LUMINOL-CHEMILUMINESZENZ 20
3.1.2 PHOLASIN-LUMINESZENZ UND CYTOCHROM C-TEST 21
3.2 PHOLASIN-LUMINESZENZ IN DEN MODELLSYSTEMEN 22
3.2.1 MODELLSYSTEME ZUR BILDUNG DER ROS 22
3.2.2 SUPEROXIDANIONRADIKALE UND PHOLASIN 25
3.2.3 WASSERSTOFFPEROXID UND PHOLASIN 27
3.2.4 REAKTION VON PHOLASIN MIT PEROXIDASEN 29
3.2.4.1 PHOLASIN UND MEERRETTICHPEROXIDASE 29
3.2.4.1.1 REAKTION MIT NATIVER MEERRETTICHPEROXIDASE UND DEN KOMPLEXEN
DES 30
PEROXIDASEZYKLUS
3.2.4.1.2. PHOLASIN-LUMINESZENZ IN ABHAENGIGKEIT VON DER
PEROXIDASEKONZENTRA- 31
TION
3.2.4.2 PHOLASIN UND MYELOPEROXIDASE 32
3.2.4.2.1 REAKTION MIT NATIVER MPO 33
3.2.4.2.2 PHOLASIN-LUMINESZENZ DER KOMPLEXE
I
UND
II
DER MPO 35
3.2.4.3 REAKTION VON PHOLASIN MIT PEROXIDASEN IN GEGENWART VON
SUPEROXID- 36
ANIONRADIKALEN
3.2.4.3.1 MEERRETTICHPEROXIDASE UND SUPEROXIDANIONRADIKALE 37
3.2.4.3.2 MYELOPEROXIDASE UND SUPEROXIDANIONRADIKALE 39
3.2.5 EINFLUSS VON HOCL/'OCL AUF DIE PHOLASIN-LUMINESZENZ 41
II
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.6 WEITERE UNTERSUCHUNGEN ZUR OXIDATION VON PHOLASIN 43
3.2.6.1 PHOLASIN-LUMINESZENZ UNTER AUSSCHLUSS VON SAUERSTOFF 43
3.2.6.2 PHOLASIN-OXIDATION DURCH ANDERE OXIDATIONSMITTEL 45
3.2.7 ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE AN DEN MODELLEXPERIMENTEN 47
3.3 UNTERSUCHUNGEN AM ZELLULAEREN SYSTEM 47
3.3.1 BEEINFLUSSUNG DER ZELLANTWORT DURCH UNTERSCHIEDLICHE STIMULATOREN
47
3.3.2 EINFLUSS DER STIMULATOREN AUF DIE OXIDATIVE AKTIVITAET 49
3.3.3 DEGRANULATION DER MYELOPEROXIDASE UNTER VERSCHIEDENEN
STIMULATIONS- 50
BEDINGUNGEN ~
3.3.4 EINFLUSS VERSCHIEDENER STIMULATOREN AUF DIE PHOLASIN-LUMINESZENZ 51
NEUTROPHILER GRANULOZYTEN
3.3.4.1 PHOLASIN-LUMINESZENZ IN FMLP STIMULIERTEN ZELLEN 51
3.3.4.2 PHOLASIN-LUMINESZENZ IN FMLP/CYTOCHALASIN B STIMULIERTEN ZELLEN
52
3.3.4.3 PHOLASIN-LUMINESZENZ IN PMA STIMULIERTEN ZELLEN 54
3.3.5 EINFLUSS DER VON STIMULIERTEN ZELLEN ERZEUGTEN HOC1 AUF DIE
PHOLASIN- 55
LUMINESZENZ
3.3.6 EINFLUSS VON WIRKSTOFFEN AUF DEN YYRESPIRATORY BURST" VON
NEUTROPHILEN 56
GRANULOZYTEN *
4 ZUSAMMENFASSENDE DISKUSSION 58
5 EXPERIMENTELLER TEIL 65
5.1 CHEMIKALIEN, ENZYME UND PUFFER 65
5.1.1 CHEMIKALIEN 65
5.1.2 ENZYME 66
M
INHALTSVERZEICHNIS
5.1.3 PUFFER 66
5.2 UV/VIS-SPEKTROMETRISCHE UNTERSUCHUNGEN 67
5.2.1 SPEKTROMETRISCHE BESTIMMUNG DER H202-, OC1- UND HRP-KONZEN- 67
TRATION
5.2.2 DARSTELLUNG DER KOMPLEXE I, II UND III DER MEERRETTICHPEROXIDASE
67
5.3 CHEMILUMINESZENZMESSUNGEN 68
5.3.1 CHEMILUMINESZENZUNTERSUCHUNGEN AN DEN MODELLSYSTEMEN 68
5.3.2 LUMINESZENZMESSUNGEN UNTER AUSSCHLUSS VON SAUERSTOFF 69
5.4 UNTERSUCHUNGEN AM ZELLULAEREN SYSTEM 70
5.4.1 PRAEPARATION NEUTROPHILER GRANULOZYTEN 70
5.4.2 STIMULATION DER ZELLEN, BESTIMMUNG DER OXIDATIVEN AKTIVITAET UND 71
BEEINFLUSSUNG DER ZELLANTWORT
5.4.2.1 DER CYTOCHROM C-TEST 71
5.4.2.2 LUMINOL-CHEMILUMINESZENZ 71
5.4.3 PHOLASIN-LUMINESZQNZ VON NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN 72
5.4.3.1 BEEINFLUSSUNG DER ROS-BILDUNG 72
5.5 BESTIMMUNG DER FREIGESETZTEN MPO IN DEN ZELLUEBERSTAENDEN 73
5.5.1 PRAEPARATION DER ZELLUEBERSTAENDE 73
5.5.2 BESTIMMUNG DES MPO-GEHALTES MITTELS ELISA-TEST 73
5.6 POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 74
6 LITERATUR 76
IV
INHALTSVERZEICHNIS
ANHANG
SELBSTAENDIGKEITSERKLAERUNG
LEBENSLAUF
ZUSAMMENFASSUNG DER WISSENSCHAFTLICHEN ERGEBNISSE ZUR DISSERTATION
V |
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