Stoffwechselmodellierung von rekombinanten Escherichia coli bei Wachstum und heterologer Proteinproduktion:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Düsseldorf
VDI-Verl.
2001
|
| Ausgabe: | Als Ms. gedr. |
| Schriftenreihe: | Verein Deutscher Ingenieure: [Fortschrittberichte VDI / 17]
205 |
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: Braunschweig, Techn. Univ., Diss., 2000 |
| Beschreibung: | XI, 135 S. graph. Darst. |
| ISBN: | 3183205173 |
Internformat
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I
NHALTSVERZEICHNIS
S
YMBOL
-
UND
A
BKUERZUNGSVERZEICHNIS
IX
K
URZFASSUNG
XI
1
E
INLEITUNG
1
2
T
HEORIE
5
2.1
METHODEN
ZUR
QUANTIFIZIERUNG
VON
STOFFFLUESSEN
.
5
2.2
STOFFFLUSSANALYSE
DURCH
METABOLIT-BILANZIERUNG
.
6
2.2.1
BERECHNUNG
DER
STOFFFLUESSE
.
8
2.2.1.1
BESTIMMTE
UND
UEBERBESTIMMTE
NETZWERKE
.
8
2.2.1.2
UNTERBESTIMMTE
NETZWERKE
.
9
2.2.1.3
WARUM
LINEARE
PROGRAMMIERUNG?
.
11
2.2.1.4
SENSITIVITAETSANALYSE
.
12
2.2.1.5
LINEARE
ABHAENGIGKEITEN
.
13
2.2.1.6
KONSISTENZANALYSE
.
13
23
DAS
METABOLISCHE
NETZWERK
.
14
2.3.1
KATABOLE
STOFFWECHSELWEGE
.
15
2.3.2
ALTERNATIVE
STOFFWECHSELWEGE
.
16
2.3.2.1
DER
GLYOXYLAT-NEBENWEG
UND
ANDERE
ANAPLEROTISCHE
REAKTIONEN
.
16
2.3.2.2
DER
METHYLGLYOXAL-NEBENWEG
.
17
2.3.3
SUBSTRATAUFNAHME
.
18
2.3.4
AMMONIUMAUFNAHME
.
19
2.3.5
OXIDATIVE
PHOSPHORYLIERUNG
.
19
2.3.6
DIE
TRANSHYDROGENASEREAKTIONEN
.
20
2.3.7
ANABOLE
STOFFWECHSELWEGE
.
21
2.3.8
EIGENSCHAFTEN
DES
NETZWERKES
.
22
2.4
THEORETISCHE
STOFFFLUSSVERTEILUNGEN
.
24
2.4.1
WACHSTUMSENERGETIK
.
24
2.4.2
VEREINFACHTES
METABOLISCHES
MODELL
.
25
2.4.3
DETAILLIERTES
METABOLISCHES
MODELL
.
27
2.4.4 OPTIMALE
AMINOSAEUREAUSBEUTEN
.
28
2.4.5
OPTIMALE
AUSBEUTE
AN
REKOMBINANTEM
PROTEIN
.
32
VI
2.5
KINETISCHE
MODELLIERUNG
.
36
2.5.1
DIE
REGULATION
DER
REAKTIONSRATEN
.
36
2.5.2
REAKTIONSMODELLE
.
37
2.5.3
PARAMETERSCHAETZGENAUIGKEIT
.
40
3
M
ATERIAL
UND
M
ETHODEN
42
3.1
STAMM,
STAMMHALTUNG
UND
KULTURMEDIEN
.
42
3.1.1
MIKROORGANISMUS
UND
PLASMIDE
.
42
3.1.2
STAMMHALTUNG
.
43
3.1.3
MEDIEN
.
43
3.2
BIOREAKTOREN
UND
KULTIVIERUNGSPARAMETER
.
44
33
VERSUCHSDURCHFIIHRUNG
.
44
3.3.1
HERSTELLUNG
DES
INOKULUMS
.
44
3.3.2
INDUKTION
DER
PRODUKTBILDUNG
.
46
3.3.3
ZUFUETTERUNGSSTRATEGIE
.
46
3.3.4
ONLINE-BERECHNUNGEN
.
46
3.4
ABGASMESSUNG
.
47
3.5
ANALYTIK
.
48
3.5.1
BESTIMMUNG
DER
BIOMASSEKONZENTRATION
.
48
3.5.2
BESTIMMUNG
DER
AMMONIUMKONZENTRATION
.
48
3.5.3
PROTEINANALYTIK
.
48
3.5.3.1
PROBENVORBEREITUNG
.
49
3.S.3.2
SDS-GELEKTROPHORESE
.
49
3.5.3.3
DETEKTION
UND
QUANTIFIZIERUNG
.
50
3.5.4
RNA-MESSUNG
.
50
3.5.5
HIGH
PRESSURE
LIQUID
CHROMATOGRAPHY
(HPLC)
ANALYTIK
.
50
3.5.6
ENZYMBASIERTE
GLUCOSEANALYSE
.
51
3.5.7
INTRAZELLULAERE
MESSUNGEN
.
51
3.5.7.1
PROBENNAHME
.
51
3.5.7.2
BESTIMMUNG
INTRAZELLULAERER
ADENOSINNUKLEOTIDE
.
53
3.5.7.3
BESTIMMUNG
INTRAZELLULAERER
ZUCKERPHOSPHATE
.
53
3.6
VERWENDETE
SOFTWARE
.
54
VN
4
E
RGEBNISSE
UND
D
ISKUSSION
55
4.1
STOFFINUSSVERTEILUNGEN
WAEHREND
WACHSTUM
VON
E.
COLI
.
55
4.1.1
STATIONAERE
ZUSTAENDE
IN
KONTINUIERLICHER
KULTUR
.
55
4.1.1.1
VALIDIERUNG
DES
STOECHIOMETRISCHEN
MODELLS
.
55
4.1.1.2
VALIDIERUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
STOFFFLUESSE
.
56
4.1.1.3
EINFLUSS
DER
VERDUENNUNGSRATE
AUF
ENERGETIK
UND
STOFFFLUESSE
.
57
4.1.2
DYNAMIK
IN
KONTINUIERLICHER
KULTUR
.
60
4.1.2.1
EXTRAZELLULAERE
RATEN
.
61
4.1.2.2
ADENOSINNUKLEOTIDE
UND
ENERGETISCHER
ZUSTAND
.
62
4.1.2.3
EXTRA-
UND
INTRAZELLULAERE
METABOLITE
.
64
4.1.2.4
SIMULATION
DER
AKTIVIERUNG
DES
METHYLGLYOXAL-WEGES
.
66
4.1.3
ZUSAMMENFASSUNG
.
69
4.2
STOFFFLUESSE
WAEHREND
REKOMBINANTER
PROTEINPRODUKTION
.
70
4.2.1
TEMPERATUR-INDUZIERTE
PRODUKTION
VON
HFGF-2
IN
HOCHZELLDICHTEKULTIVIERUNGEN
70
4.2.1.1
TYPISCHER
VERLAUF
EINER
HOCHZELLDICHTEKULTIVIERUNG
.
70
4.2.1.2
INTRAZELLULAERE
STOFFFLUESSE
.
71
4.2.1.3
ENERGETIK
.
77
4.2.1.4
CHARAKTERISIERUNG
DER
METABOLISCHEN
ZUSTAENDE
.
79
4.2.1.5
VERGLEICH
IN
VIVO
UND
OPTIMALE
STOFFFLUSSVERTEILUNG
.
81
4.2.2
TEMPERATUR-INDUZIERTE
PRODUKTION
VON
HUMANEM
INSULIN
.
84
4.2.3
EFFEKT
EINES
STABILEN
UND
INSTABILEN
REKOMBINANTEN
PROTEINS
AUF
DEN
WIRTSMETABOLISMUS
.
85
4.2.4
ZUSAMMENFASSUNG
.
88
43
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
SUBSTRATE
AUF
WACHSTUM
UND
PRODUKTBILDUNG
.
90
4.3.1
TEMPERATUR-INDUZIERTE
HFGF-2-PRODUKTION
IN
BATCH-KULTIVIERUNGEN
.
90
4.3.2
HOCHZELLDICHTEKULTIVIERUNG
MIT
FRUCTOSE
ALS
SUBSTRAT
.
93
4.3.2.1
KULTIVIERUNGSVERLAUF
.
93
4.3.2.2
INTRAZELLULAERE
STOFFFLUESSE
.
95
4.3.3
ZUSAMMENFASSUNG
.
99
4.4
METABOLISCHE
DYNAMIK
WAEHREND
REKOMBINANTER
PROTEINPRODUKTION
.
100
4.4.1
CHEMISCH-INDUZIERTE
PRODUKTION
VON
HFGF-2
-
UEBERBLICK
.
100
4.4.2
VERGLEICH
VON
CHEMISCH-MIT
TEMPERATUR-INDUZIERTER
HFGF-2-PRODUKTION
.
.
.101
4.4.3
GLYCOLYTISCHE
ZUCKERPHOSPHATE
UND
ADENOSINNUKLEOTIDE
.
102
VIII
4.4.4
KINETISCHES
MODELL
.
107
4.4.4.1
MODELLSTRUKTUR
UND
MASSENBILANZEN
.
107
4.4.4.2
REAKTIONSKINETIKEN
.
108
4.4.43
ERGEBNISSE
DER
MODELLIERUNG
.
111
4.4.4.4
PARAMETERSCHAETZGENAUIGKEIT
.
115
4.4.5
ZUSAMMENFASSUNG
.
118
5
Z
USAMMENFASSUNG
UND
A
USBLICK
119
6
A
NHANG
122
7
L
ITERATURVERZEICHNIS
126 |
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