Ionenkanäle in kultivierten Keratinozyten: elektrophysiologische Eigenschaften, funktionelle Bedeutung und Regulation durch extrazelluläre Mediatoren
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
DIE
HAUT
.
1
1.1.1
EPIDERMIS
.
1
1.1.2
REGULATION
DER
KERATINOZYTENPROLIFERATION
UND
-DIFFERENZIERUNG
.
4
1.1.2.1
WACHSTUMSFAKTOREN
UND
ZYTOKINE
.
4
1.1.2.2
NIEDERMOLEKULARE
MEDIATOREN
.
5
1.1.2.3
CALCIUM
.
6
1.2
LONENKANAELE
.
7
1.2.1
ARTEN
VON
LONENKANAELEN
UND
IHRE
REGULATION
.
7
1.2.1.1
CA
2
*-KANAELE
.
8
1.2.1.2
NA*-KANAELE
.
8
1.2.1.3
IC-KANAELE
.
8
1.2.1.4
CF-KANAELE
.
10
1.2.1.5
GAPJUNCTIONS
.
11
1.2.2
LONENKANAELE
IN
EPITHELIALEN
ZELLEN
.
11
1.2.3
ELEKTROPHYSIOLOGIE
VON
KERATINOZYTEN
.
11
1.3
ZIEL
DER
ARBEIT
.
13
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
15
2.1
BIOLOGISCHES
MATERIAL
.
15
2.1.1
BAKTERIENSTAEMME
.
15
2.1.2
EUKARYONTISCHE
ZELLEN
.
15
2.1.3 MEDIEN
UND
PLASTIKMATERIAL
FUER
DIE
ZELLKULTUR
.
15
2.2
CHEMIKALIEN
UND
ZYTOKINE
.
15
2.3
ELEKTROPHYSIOLOGIE
.
18
2.3.1
LOESUNGEN
.
18
2.3.1.1
BADLOESUNGEN
.
18
2.3.1.2
PIPETTENLOESUNGEN
.
19
2.3.2
GERAETE
UND
VERBRAUCHSMATERIAL
.
19
2.4
ZELL
UND
MOLEKULARBIOLOGIE
(MATERIAL)
.
20
2.4.1
ANTIKOERPER
.
20
2.4.2
ENZYME.
20
2.4.3
OLIGODESOXYNUKLEOTIDE
(PRIMER)
.
21
2.4.4
GERAETE
.
21
2.5
ZELLKULTUR
.
22
2.6
PATCH-CLAMP-EXPERIMENTE
.
22
2.6.1
GRUNDLAGEN
.
22
2.6.2
MESSAUFBAU
.
24
2.6.2.1
PIPETTEN
.
24
2.62.2
ELEKTRODEN
.
24
2.6.2.3
OPTIK
.
25
2.6.2.4 MESSTISCH
UND
MECHANISCHE
KOMPONENTEN
.
26
INHALTSVERZEICHNIS
26.2.5
ELEKTRONISCHE
KOMPONENTEN
.
26
2.6.2.6
DATENVERARBEITUNG
.
27
2.6.3
MESSKONFIGURATIONEN
.29
2.6.4
SEAL-BILDUNG
(HERSTELLUNG
DER
CELL-ATTACHED-KONFIGURATION)
.
30
2.6.5
EINZELKANALABLEITUNGEN
.
31
2.6.5.1
MESSUNGEN
IN
DER
CELL-ATTACHED-KONFIGURATION
.
31
2.6.5.2
MESSUNGEN
IN
DER
INSIDE-OUT-KONHGURATION.
31
2.6.6
GANZZELLABLEITUNGEN
.
32
2.6.6.1
MESSUNGEN
IN
DER
WHOLE-CELL-KONFIGURATION
.
32
2.6.6.2
MESSUNGEN
IN
DER
PERFORATED
PATCH-VARIATION
.
32
2.6.6.3
UNTERSUCHUNG
DER
ZELL-ZELL-KOMMUNIKATION
UEBER
GAP
JUNCTIONS
.
33
2.6.6.4
UV-AKTIVIERUNG
VON
CAGED
IP3
.
33
2.6.7
DATENAUSWERTUNG
.
33
2.7
ZELL
UND
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
34
2.7.1
MIKROBIOLOGISCHE
METHODEN
.
34
2.7.1.1
ANZUCHT
VON
E.
COLI.
.
34
2.7.1.2
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
E.
COLI
BAKTERIEN
.
35
2.7.1.3 TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
UND
BLAU/WEISS-SELEKTION
.
35
2.7.2
METHODEN
ZUR
PRAEPARATION
UND
MODIFIKATION
VON
NUKLEINSAEUREN
.
36
2.7.2.1
PLASMID-SCHNELLPRAEPARATION
AUS
2
ML-KULTUREN
.
36
2.7.2.2
PLASMID-PRAEPARATION
MIT
DEM
QIAGEN-PLASMIDKIT.
.
36
2.7.2.3
AUFTRENNUNG
VON
DNA
DURCH
GELELEKTROPHORESE
.
37
2.7.2.4
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
DNA
.
37
2.7.2.5
EXTRAKTION
VON
DNA
MIT
PHENOL
UND
CHLOROFORM
.
37
2.7.2.6
FAELLUNG
VON
DNA
AUS
WAESSRIGER
LOESUNG
MIT
ETHANOL
UND
SALZ
.
38
2.7.2.7
ENZYMATISCHE
MODIFIKATIONEN
VON
DNA
.
38
2.7.2.8
SEQUENZIERUNG
DOPPELSTRAENGIGER
DNA
.
39
2.7.2.9
HERSTELLUNG
VON
CDNA
.
40
2.7.2.10
AMPLIFIKATION
UND
KLONIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
DURCH
PCR
.40
2.7.3
RNA-TECHNIKEN
.42
2.7.3.1
HERSTELLUNG
VON
RNASE-FREIEN
LOESUNGEN
UND
GEFAESSEN
.42
2.7.3.2
ISOLIERUNG
GESAMTZELLULAERER
RNA
.
42
2.7.3.3
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
RNA
.43
2.7.3.4
VORBEREITUNG
EINES
PLASMIDS
FUER
DIE IN-VITRO-TRANSKRIPTION
.
43
2.7.3.5 RNASE
PROTECTION
ASSAY.
.44
2.7.4
IMMUNOZYTOCHEMIE
.
48
2.7.5 MESSUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
CA
2
*-KONZENTRATION
.48
3
ERGEBNISSE
.
50
3.1
RUHEMEMBRANPOTENTIAL
.
50
3.2
EINZELKANALMESSUNGEN
.
51
3.2.1
KATIONENKANAL
.
52
3.2.2
CL-KANAL
.
54
3.3
ELEKTRISCHE
KOPPLUNG
.
56
3.4
AENDERUNGEN DES
MEMBRANPOTENTIALS
.
56
3.4.1
WACHSTUMSFAKTOREN
.
57
3.4.2
ATP,
BRADYKININ,
HISTAMIN
.
60
INHALTSVERZEICHNIS
3.5
LONALE
MECHANISMEN
DER
MEMBRANPOTENTIALAENDERUNG
.
61
3.5.1
DEPOLARISATION
.
62
3.5.2
HYPERPOLARISATION
.65
3.6
PHARMAKOLOGIE
DER
ATP-VERMITTELTEN
POTENTIALAENDERUNG.
67
3.7
REGULATION
DER
LONENKANALAKTIVITAET
-
SECOND
MESSENGER
SYSTEME
.
69
3.7.1
REGULATION
DURCH
PROTEINKINASE
C
UND
ADENYLATZYKLASE
.70
3.7.2
REGULATION
DURCH
CA
2+
.
71
3.7.2.1
ANSTIEG
DER
INTRAZELLULAEREN
CA
2
*-KONZENTRATION.
72
3.7.2.2
CA
2
*-ANSTIEG
DURCH
IP
3
.
73
3.7.2.3
ENTLEERUNG
DER
CA
2
*-SPEICHER
MIT
CYCLOPIAZONIC
ACID
(CPA)
.
74
3.7.2.4
REGULATION
UEBER
CALMODULIN
.
76
3.8
UNTERSUCHUNG
DER
EXPRESSION
VON
LONENKANAELEN
UND
REZEPTOREN
.
78
3.8.1
K10
UND
INVOLUCRIN-EXPRESSION
IN
HACAT-KERATINOZYTEN.
78
3.8.2 UNTERSUCHUNG
DER
P2Y2-REZEPTOR-EXPRESSION.
79
3.8.3 EXPRESSION
VON
CF-KANAELEN
.
81
3.8.4
UNTERSUCHUNG
DER
HSK4-EXPRESSION
.
82
3.9
EINFLUSS
DER
LONENKANALAKTIVITAET
AUF
DIE
KERATINOZYTENDIFFERENZIERUNG
.
84
4
DISKUSSION
.
87
4.1
MEMBRANPOTENTIAL
VON
HACAT-KERATINOZYTEN.
87
4.2
REGULATION
DER
LONENKANALAKTIVITAET
DURCH
INTRAZELLULAERE
BOTENSTOFFE
.
91
4.3
CL-KANAELE
.
94
4.4
KATIONENKANAELE
.
96
4.5
K
+
-KANAELE
.
96
4.6
EXTRAZELLULAERE
MEDIATOREN,
LONENKANAELE
UND
ZELLPROLIFERATION
.
98
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
103
6
LITERATURVERZEICHNIS
.
105
7
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
119
8
LEBENSLAUF.
.
122 |
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