B-Zell-Entwicklung in Interleukin-2-Rezeptor gGamma (gc)-defizienten(Gamma-c)-defizienten) Mäusen:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2000
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Köln, Univ., Diss., 2000 |
| Beschreibung: | IX, 181 S. Ill., graph. Darst. : 21 cm |
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INHALT
I
INHALTSVERZEICHNIS
A.
EINLEITUNG
1
A.L
DIE
B-ZELL-ENTWICKLUNG
IN
DER
MAUS
1
A.1.1
DIE
FUNKTION
VON
ZYTOKINEN
IN
DER
B-ZELL-ENTWICKLUNG
5
A.2
DIE
FUNKTION
VON
B-ZELLEN
6
A.3
ZYTOKINE
8
A.4
DIE
IL-2RY-KETTE
9
A.4
1
DAS
IL-2/1L-2R
SYSTEM
13
A.4.2
DAS
IL-4/IL-4R
SYSTEM
15
A.4.3
DAS
IL-7/IL-7R
SYSTEM
17
A.4.4
DAS
IL-9/IL-9R
SYSTEM
19
A.4.5
DAS
IL-15/IL-15R
SYSTEM
20
A.4.6
YC-DEFIZIENTE
MAEUSE
21
A.S
YC-DEFIZIENZ
IM
MENSCHEN
(XSCID)
22
A.5.1
DIE
YC-DEFIZIENTE
MAUSMUTANTE
ALS
MODELL
FUER
XSCID
24
A.6
METHODIK
26
A.6.
1
DIE
KONVENTIONELLE
MUTAGENESE
26
A.6.2
DIE
KONDITIONALE
MUTAGENESE
26
A.7
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
28
B.
MATERIAL
UND
METHODEN
30
B.L
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
30
B.1.1
DNAPRAEPARATION
30
INHALT
B.
1.1.1
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
B.
1.1.2
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
DER
DNA-FRAGMENTE
ZUR
PRONUKLEUSINJEKTION
B.
1.2
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
B.
1.2.1
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
AUS
MAUSSCHWANZSPITZEN
UND
ZELLSUSPENSIONEN
B.
1.2.2
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
AUS
ORGANEN
B.
1.1.2
KONSTRUKTION
REKOMBINANTER
PLASMIDE
B.
1.4
DNA-SEQUENZIERUNG
B
.
1.5
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
B.
1.5.1
PCR
ZUR
GENOTYPISIERUNG
B.
1.5.2
PRAEPARATIVE
PCR
B.L.
5.2.1
PRIMER-VERLAENGERUNG-PCR
B.
1.5.1.2
PCR
ZUR
GEZIELTEN
MUTAGENESE
B.L.
6
SOUTHERN
BLOT
B.
1.6.1
RADIOAKTIVER
SOUTHERN
BLOT
B.
1.6.1.1
QUANTIFIZIERUNG
CRE-VERMITTELTER
REKOMBINATION
B.
1.6.2
NICHT-RADIOAKTIVER
SOUTHERN
BLOT
B.
1.7
SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTIDE
B.
1.7.1
SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTIDE
ZUR
GENOTYPISIERUNG
B.
1.7.1
SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTIDE
ZUR
SEQUENZIERUNG
B.
1.7.1
FUER
DIE
KONSTRUKTION
REKOMBINANTER
PLASMIDE
VERWENDETE
II
30
30
31
31
31
32
32
32
32
33
33
34
36
36
36
37
38
38
39
SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTIDE
40
B.2
GENERIERUNG
VON
TRANSGENEN
GRUENDERTIEREN,
DIE
CRE
B-ZELL-SPEZIFISCH
AUSPRAEGEN
40
B.2.1
HERSTELLUNG
DER
KLONIERUNGSSYSTEME
I
UND
II
ZUR
B-ZELL
SPEZIFISCHEN
EXPRESSION
VON
TRANSGENEN
40
B.2.
1.1
KLONIERUNGSSYSTEM
I
41
B.2.
1.2
KLONIERUNGSSYSTEM
II
43
B.2.2
KONSTRUKTION
DES
EXPRESSIONSVEKTORS
PHCD19CRE-TG-L.EXON
45
B.2.2.1
HERSTELLUNG
TRANSGENER
GRUENDERTIERE
MIT
PHCD19CRE-TG-L.EXON
45
B2.3
KONSTRUKTION
DES
EXPRESSIONSVEKTORS
PHCD19CRE-TG-2.EXON
47
INHALT
III
B.2.3.1
HERSTELLUNG
TRANSGENER
GRUENDERTIEREN
MIT
PHCD19CRE-TG-2.EXON
47
B.3
KONSTRUKTION
VERSCHIEDENER
PHCD19CREPR
KONSTRUKTE
47
B.3.1
KONSTRUKTION
VON
PHCD19
NLS
CREPR
89L
D
+
-2-L.EXON
48
B.3.
2
KONSTRUKTION
VON
PHCD19CREPR
89L
D
+
-19-2.EXON
48
B.3.
3
KONSTRUKTION
VON
PHCD19CREPR10-2.EXON
UND
KLONIERUNG
VON
PHCD
1
9CREPR30-2.EXON
49
B.4
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
51
B.4.1
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
(FACS)
51
B.4.
1.1
HERSTELLUNG
VON
EINZEL-ZELLSUSPENSIONEN
AUS
MAEUSEORGANEN
51
B.4.
1.2
ANALYSE
DER
ZELLOBERFLAECHENMOLEKUELE
52
B.4.
1.3
ANNEXINV
-FAERBUNG
53
B.4.1.
4
INTRAZELLULAERE
FAERBUNGEN
54
B.4.
1.4.1
INTRAZELLULAERE
CRE-FAERBUNG
54
B.4.
1.4.2
INTRAZELLULAERE
FAERBUNG
VON
ENDOGENEM
BCL-2
55
B.4.
1.4.3
INTRAZELLULAERE
FAERBUNG
VON
HUMANEM
(TRANSGENEM)
BCL-2
55
B.4.2
MAGNETISCHE
ZELLSORTIERUNG
(MACS)
55
B.4.3
ELISA
(ENZYME
LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY)
55
B.4.4
ZELLKULTUR
57
B4.4
1
KULTUR
VON
EMBRYONALEN
STAMMZELLEN
(ES-ZELLEN)
57
B.4.
5
BLASTOZYSTENINJEKTION
58
B.4.6
PRONUKLEUSMIKROINJEKTION
59
B.5
TIEREXPERIMENTELLE
METHODEN
59
B.5.1
MAEUSE
59
B.5.
2
IMMUNISIERUNG
60
B.5.
3
SUPEROVULATION
60
B.5.4
NARKOSE
60
B.5.
5
BLUTENTNAHME
60
INHALT
C.
ERGEBNISSE
IV
61
C.L
DIE
B-ZEIL-ENTWICKIUNG
IN
YC"
MAEUSEN
62
C.1.1
B-ZELL-ENTWICKLUNG
IM
KNOCHENMARK
YC-DEFIZIENTER
MAEUSE
62
C.L.
1.1
DIE
ANALYSE
DER
EXPRESSION
VON
CD
19
UND
B220
63
C.L.
1.2
ANALYSE
DER
KNOCHENMARKZELLEN
NACH
HARDY
65
C.L.
1.3
DIE
ANALYSE
DER
FRAKTION
A
69
C.L.
2
ANALYSE
DES
B-ZELL-KOMPARTIMENTES
DER
MILZ
VON
YC-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
72
C.L.
3
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ANALYSEN
DER
B-ZELL-ENTWICKLUNG
IN
YC
"
MAEUSEN
74
C.2
SEROLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
YC-DEFIZIENTER
MAEUSE
74
C.2.
1
BESTIMMUNG
DER
SERUM-ANTIKOERPER
YC-DEFIZIENTER
MAEUSE
74
C.2
2
T-ZELL-ABHAENGIGE
UND
T-ZELL-UNABHAENGIGE
IMMUNANTWORTEN
IN
YC-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
77
C.2.
3
ZUSAMMENFASSUNG
DER
SEROLOGISCHEN
UNTERSUCHUNGEN
80
C.3
EINFLUSS
VON
V-GEN-INSERTIONEN
AUF
DIE
B-ZELL-ENTWICKLUNG
IN
YC-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
80
C.3.1
V-GEN-I
NSERTIONSMAEUSE
82
C.3.2
ANALYSE
VON
5
WOCHEN
ALTEN
V-GEN-INSERTIONSMAEUSEN
82
C.3.3
ANALYSE
VON
12
WOCHEN
ALTEN
V-GEN-INSERTIONSMAEUSEN
86
C.3.4
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ANALYSEN
DER
V-GEN-INSERTIONSMAEUSE
88
C.4
T-ZELL-DEFIZIENTE
YC"
MAEUSE
89
C.4.1
YCLNUDE
DOPPELMUTANTEN
92
C.4.2
YC7
TCRSS^
DOPPELMUTANTEN
93
C.4.2.
1
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE
ANALYSE
DER
KNOCHENMARKSZELLEN
93
C.4.2.2
ANALYSE
DER
MILZZELLEN
98
C.4.2.
3
CHARAKTERISIERUNG
DER
YC"
B
ZELLEN
101
C.4.2.4
T-ZELL-UNABHAENGIGE
IMMUNANTWORTEN
IN
YCTTCRSS''
"
MAEUSEN
105
INHALT
V
C.4.3
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ANALYSEN
T-ZELL-DEFIZIENTER
YC*
MAEUSE
108
C.5
EINFLUSS
EINES
BCL-2
TRANSGENS
AUF
DEN
ERHALT
VON
B-ZELLEN
IN
DER
MILZ
VON
T-ZELL-DEFIZIENTEN
YC'
MAEUSEN
108
C.5.1
DIE
KREUZUNG
VON
YC7TCRSS~'~
DOPPELMUTANTEN
UND
EP-BCL-2-22
TRANSGENEN
MAEUSEN
108
C.6
DIE
ROLLE
VON
IL-7RA-ABHAENGIGEN,
YE-UNABHAENGIGEN
FAKTOREN
IN
DER
B-ZELL-ENTWICKLUNG
IN
YC-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
111
C.6.1
ANALYSE
DER
KNOCHENMARKSZELLEN
113
C.6.2
ANALYSE
DER
MILZZELLEN
117
C.7
KONDITIONALE
MUTAGENESE
DER
YC
119
C.7.1
HERSTELLUNG
CHIMAERER
TIERE
UND
TRANSMISSION
DES
YC
NOX
ALLELS
IN
DIE
KEIMBAHN
119
C.7.2
DAS
YC"
X
ALLEL
VERURSACHT
KEINEN
PHAENOTYP
UND
IST
DELETIERBAR
120
C.7.2.1
BA!2CRE
X
YC
NOX
120
C.7.
3
T-ZELL-SPEZIFISCHE
INAKTIVIERUNG
DER
YC
123
C.
7.3.1
ANALYSE
DER
LCKCRE
+
/YC
FLOX/Y
MAEUSE
123
C.7
4
B-ZELL-SPEZIFISCHE
INAKTIVIERUNG
DER
YC
126
C.
7.4.1
ANALYSE
DER
CD19
CRE/+
/YC
F,OX/Y
MAEUSE
126
C.8
GENERIERUNG
EINER
CRE-TRANSGEN
MAUSLINIE,
DIE
CRE
B-ZELL-SPEZIFISCH
EXPRIMIERT
130
C.8.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
GRUENDERTIERE
131
C.8.
1.1
CRE-EXPRESSION
131
C.8.
1.2
UEBERSICHT
UEBER
DIE
TRANSGENEN
MAUSSTAEMME
133
C.8.
1.3
EFFIZIENZ
UND
ZELL-SPEZIFITAET
DER
CRE-VERMITTELTEN
REKOMBINATION
IN
HCD19CRE-TRANSGENEN
MAUSSTAEMMEN
134
INHALT
VI
D.
DISKUSSION
138
D.L
DIE
ANALYSE
DER
B-ZELL-ENTWICKLUNG
IN
YC-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
138
D.
1.1
DIE
B-ZELL-ENTWICKLUNG
IST
IN
YC-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
IN
EINEM
FRUEHEN
STADIUM
BEEINTRAECHTIGT
138
D.
1.2.1
ANALYSE
DER
B-ZELL-ENTWICKLUNG
NACH
HARDY
1
39
D.
1.2.2
V-GEN-INSERTIONEN
KOENNEN
DIE
B-ZELL-ENTWICKLUNG
IN
YC-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
NICHT
WIEDERHERSTELLEN
140
D.
1.3
B-ZEIL-ENTWICKLUNG
IN
ERWACHSENEN
YC-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
142
D.2
B-ZELL-ENTWICKLUNG
IN
T-ZELL-DEFIZIENTEN
YC"
MAEUSEN
143
D.2.
1
YC
IST
NICHT
NOTWENDIG
FUER
DIE
LPS-INDUZIERTE
PROLIFERATION
VON
B-ZELLEN
IN
VITRO
145
D.2.2
DIE
B-ZELLEN
T-ZELL-DEFIZIENTER
YC*
MAEUSE
KOENNEN
EINE
ANTIGEN-SPEZIFISCHE
IMMUNANTWORT
GENERIEREN
146
D.3
DAS
ZYTOKIN
TSLP
FOERDERT
DIE
ENTWICKLUNG
ODER
DEN
ERHALT
VON
IGM*
B-ZELLEN
146
D.4
MOEGLICHE
URSACHEN
FUER
DIE
T-ZELL-ABHAENGIGE
REDUKTION
DER
B-ZELLEN
IN
YC-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
ISO
D.S
DIE
YCTTCRSS
^
DOPPELMUTANTE
-
DAS
BESSERE
MAUSMODEL)
FUER
XSCID?
154
D.6
DAS
YC
FLM
ALLEL
EIGNET
SICH
ZUR
CRE-LOXP
VERMITTELTEN
GENINAKTIVIERUNG
IN
VIVO
154
D.7
DIE
CHARAKTERISIERUNG
VON
HCD19CRE-TG
MAUSLINIEN
154
INHALT
VH
E.
AUSBLICK
157
E.L
MECHANISMUS
DER
T-ZELL-ABHAENGIGEN
REDUKTION
VON
B-ZELIEN
IN
YC
'
MAEUSEN
157
E.2
WEITERE
CHARAKTERISIERUNG
DER
YC~
B-ZELLEN
158
E.4
DIE
ROLLE
DER
YC
FUER
DIE
GENERIERUNG
EINER
T-ZELL-ABHAENGIGEN
IMMUNREAKTION
UND
DIE
ROLLE
DERYC
IN
DEM
PROZESS
DER
SOMATISCHEN
MUTATION
158
E.5
BEDEUTUNG
YC-ABHAENGIGER
ZYTOKINE
FUER
DEN
ERHALT
VON
GEDAECHTNIS-B-ZELLEN
159
F.
ZUSAMMENFASSUNG
160
G.
LITERATUR
162
H.
VERSICHERUNG
178
I.
ANMERKUNGEN
179
J.
DANKSAGUNG
180
K.
LEBENSLAUF
181 |
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| author | Voßhenrich, Christian A. J. 1968- |
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