Polymerase-Kettenreaktion zum Nachweis von Francisella tularensis in Zecken:
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2000
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| adam_text | Titel: Polymerase-Kettenreaktion zum Nachweis von Francisella tularensis in Zecken
Autor: Sedlmayer, Martina
Jahr: 2000
Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis II
Abkürzungsverzeichnis IV
1 Einleitung 1
2 Material und Methoden 7
2.1 Referenzstamm 7
2.2 Zecken 7
2.2.1 Präparation und Aufbereitung der Zecken 7
2.3 Kultivierung von Francisella tularensis 8
2.3.1 Nährmedien und Supplemente 8
2.3.2 Anzüchtung von Francisella tularensis 9
2.3.3 Quantifizierung von Francisella fu/arens/s-Suspensionen durch
mikroskopische Zählung 9
2.3.4 Titration von Francisella fu/arens/s-Suspensionen in der Kultur 10
2.4 Isolierung der Francisella tularensis-DNA 10
2.5 Polymerase-Kettenreaktion (PCR) zum Nachweis von
Francisella tularensis 11
2.5.1 FopA-PCR 11
2.5.2 Nachweis der PCR-Produkte mittels Agarose-Gel-Elektrophorese 12
2.5.3 Bestimmung der analytischen Sensitivitat der PCR 13
2.5.4 Bestimmung der Spezifität der PCR 13
2.6 DNA-Sequenzierung von PCR-Amplifikaten 13
2.7 Restriktionsenzym-Analyse von PCR-Produkten 14
2.8 Geräte 15
2.9 Computerprogramme 15
3 Ergebnisse 16
3.1 Polymerase-Kettenreaktion (FopA-PCR) zum Nachweis
von Francisella tularensis 16
3.1.1 Restriktionsenzymanalyse des Fop/J-PCR-Amplifikats 16
3.1.2 DNA-Sequenzanalyse von Fop4-PCR-Produkten 16
Inhaltsverzeichnis
3.1.3 Bestimmung der analytischen Sensitivität der FopA-PCR 17
3.1.4 Überprüfung der Spezifität der FopA-PCR 17
3.2 Anzüchtung von Francisella tularensis in der Kultur 18
3.2.1 Ermittlung einer Wachstumskurve von Francisella tularensis 18
3.2.2 Titration von Francisella tularensis in Cysteine Heart Bouillon 18
3.3 Untersuchung der Zecken 18
4 Diskussion 20
5 Tabellen und Abbildungen 24
6 Zusammenfassung 32
7 Summary 33
8 Literaturverzeichnis 34
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