Isolierung und Charakterisierung von mikrovaskulärem Endothel aus humanem Fettgewebe:
Gespeichert in:
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| Veröffentlicht: |
2000
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2
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
UND
ZIELSETZUNG
4
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
10
2.1.
CHEMIKALIEN
UND
MATERIAL
10
2.2.
LOESUNGEN
12
2.3.
METHODEN
14
2.3.1.
ISOLIERUNGS-UND
KULTIVIERUNGSMETHODEN
15
2.3.1.1.
REPRODUKTION
VERSCHIEDENER
TECHNIKEN
ZUR
ISOLIERUNG
15
MIKROVASKULAERER
ZELLKULTUREN
2.3.1.1.1.
DICHTESEDIMENTATIONSTECHNIK
16
2.3.1.1.2.
EINFACHE
PERCOLLDICHTEZENTRIFUGATION
17
2.3.1.1.3.
LEKTINGEKOPPELTE
MAGNETDISSOZIATION
(DYNABEADS)
18
2.3.1.1.4.
KULTIVIERUNG
MIKROVASKULAERER
MISCHZELLKULTUREN
19
2.3.1.1.4.1.
KULTIVIERUNGSBEDINGUNGEN
19
2.3.1.1.4.2.
PROLIFERATIONSKONTROLLE
19
2.3.1.2.
ETABLIERUNG
REINER
MIKROVASKULAERER
ENDOTHELZELLKULTUREN
20
2.3.1.2.1.
ISOLIERUNG
UND
ANREICHERUNG
MIKROVASKULAERER
ENDOTHELZELLEN
20
2.3.1.2.2.
KULTIVIERUNG
REINER
MIKROVASKULAERER
ENDOTHELZELLKULTUREN
24
2.3.1.2.3.
PROLIFERATIONSKONTROLLE
25
2.3.2.
CHARAKTERISIERUNGSMETHODEN
25
2.3.2.1.
HISTOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNGSMETHODEN
25
2.3.2.L1.
ENZYMHISTOLOGIE
25
2.3.2.1.2.
IMMUNFLUORESZENZHISTOLOGIE
26
2.3.2.2.
METABOLISCHE
UNTERSUCHUNGEN
26
2.3.2.2.I.
GESAMTPROTEINBESTIMMUNG
NACH
LOWRY
26
2.3.2.2.2.
INTRAZELLULAERE
AUFNAHME
VON
DIL
(DIOCTADECYLTETRAMETHYL-INDO
26
CARBOCYANIN)
MARKIERTEM
ACETYL-LDL
DURCH
MIKROVASKULAERE
ENDOTHELZELLEN
2.3.2.2.3.
PROSTACYCLINPRODUKTION
(PGI
2
)
27
2.3.3.
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
(REM)
UNTERSUCHUNGEN
28
2.3.4.
STATISTISCHE
TESTS
28
3.
ERGEBNISSE
29
3.1.
REPRODUKTION
VERSCHIEDENER
IN
DER
LITERATUR
BESCHRIEBENER
VER
29
FAHREN
ZUR
ISOLIERUNG
MIKROVASKULAEREN
ENDOTHELS
3
3.2.
ENTWICKLUNG
EINER
NEUEN
ISOLIERUNGSMETHODE
ZUR
GEWINNUNG
31
REINER
MIKROVASKULAERER
ENDOTHELZELLKULTUREN
3.2.1.
ENZYMATISCH-MECHANISCHE
DESINTEGRATION
DES
FETTGEWEBES
31
3.2.2.
ANREICHERUNG
DER
ENDOTHELZELLEN
UND
KAPILLAREN
IM
PERCOLL
34
DICHTEGRADIENTEN
3.2.3.
ETABLIERUNG
DER
PRIMAERKULTUREN
UND
ENTFERNUNG
VERBLIEBENER
35
FREMDZELLEN
3.3.
CHARAKTERISIERUNG
DER
MIKROVASKULAEREN
ZELLLINIEN
37
3.3.1.
HISTOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
MIKROVASKULAEREN
ZELLLINIEN
37
3.3.1.1.
PHASENKONTRASTMIKROSKOPIE
37
3.3.1.2.
ENZYMHISTOLOGIE
37
3.3.1.3.
IMMUNFLUORESZENZHISTOLOGIE
-
38
3.3.2.
RASTERCLCKTRONENMIKROSKOPIE
38
3.3.3.
NACHWEIS
SPEZIFISCHER
STOFFWECHSELAKTIVITAETEN
38
3.3.3.1.
AUFNAHME
VON
DIL-MARKIERTEM
ACETYL-LDL
38
3.3.3.2.
PROSTACYCLINPRODUKTION
(PGI
2
)
40
4.
DISKUSSION
41
4.1.
REPRODUKTION
DER
VORBESCHRIEBENEN
VERFAHREN
ZUR
ISOLIERUNG
43
MIKROVASKULAERER
ENDOTHELZELLEN
4.2.
ENTWICKLUNG
EINER
METHODE
ZUR
ETABLIERUNG
REINER
45
MIKROVASKULAERER
ENDOTHELKULTUREN
AUS
HUMANEM
FETTGEWEBE
4.3.
CHARAKTERISIERUNG
DER
NACH
DEN
UNTERSCHIEDLICHEN
VERFAHREN
47
ETABLIERTEN
ZELLKULTUREN
4.4.
SCHLUSSFOLGERUNG
UND
AUSBLICK
48
5.
ZUSAMMENFASSUNG/SUMMARY
49
6.
LITERATURVERZEICHNIS
52
7.
GLOSSAR
57
8.
DANKSAGUNG
58
9.
LEBENSLAUF
59
10.
ERKLAERUNG
60 |
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