In vivo Identifikation von dominanten Modifikationen von Hairless-Überexpressionsphänotypen bei Drososphila melanogaster (Meigen):
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2000
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Hohenheim, Univ., Diss., 2000 |
| Beschreibung: | VI, 210 S. Ill., graph. Darst. : 21 cm |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
DIE
ENTWICKLUNG
DER
ADULTEN
KOMPLEXAUGEN
2
1.1.1
DETERMINIERUNG
DES
AUGENIMAGINALGEWEBES
3
1.1.2
DIE
INITIATION
DER
MORPHOGENETISCHEN
FURCHE
6
1.1.3
DIFFERENZIERUNG
DES
LARVALEN
AUGENIMAGINALGEWEBES
8
1.1.4
DIFFERENZIERUNG
DES
PUPALEN
AUGENIMAGINALGEWEBES
11
1.2
DER
NOTCH
SIGNALWEG
IN
DER
AUGENENTWICKLUNG
12
1.2.1
DIE
NOTCH
SIGNALKASKADE
15
1.2.1.1
DIE
AKTIVIERUNG
DES
NOTCH
REZEPTORS
UND
SEINER
LIGANDEN
17
1.2.1.2
SIGNALTRANSDUKTION
UND
AKTIVIERUNG
DER
ZIELGENE
18
1.3
HAIRIESS
UND
DER
NOTCH
SIGNALWEG
20
1.4
ZIEL
DER
ARBEIT
22
2
MATERIAL
UND
METHODEN
24
2.1
MATERIALIEN
24
2.1.1
INTERNET-ADRESSEN
24
2.1.2
SOFTWARE
ZUR
DATENVERARBEITUNG
25
2.1.3
BEZUGSQUELLEN
VON
CHEMIKALIEN
25
2.1.4
LOESUNGEN
26
2.1.5
MEDIEN
31
2.1.5.1
FLUESSIGMEDIEN
UND
AGARPLATTEN
31
2.1.5.2
FLIEGENFUTTER
31
2.1.5.3 APFELSAFTPLATTEN
31
2.1.6
BAKTERIEN
UND
VEKTOREN
32
2.1.6.1
BAKTERIENSTAEMME
32
2.1.6.2
PLASMID-VEKTOREN
32
2.1.7
SUBKLONE
33
2.1.7.1
AUSGANGSKLONE
33
2.1.7.2
DNA-PLASMIDKONSTRUKTE
34
2.1.7.3 SONDEN
36
INHALTSVERZEICHNIS
2.1.8
PRIMER
(OLIGONUKLEOTIDE)
36
2.1.9
VERWENDETE
ANTIKOERPER
37
2.1.9.1
PRIMAERE
ANTIKOERPER
37
2.1.9.2
SEKUNDAERE
ANTIKOERPER
37
2.1.10
FLIEGENSTAEMME
38
2.2
METHODEN
38
2.2.1
ALLGEMEINE
MOLEKULARE
TECHNIKEN
38
2.2.1.1
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
ZELLEN
-
CACLJ
METHODE
38
2.2.1.2
HERSTELLUNG
HOCHKOMPETENTER
ZELLEN
FUER
DIE
ELEKTROPORATION
-
38
2.2.1.3
DNA
39
2.2.1.3.1
RESTRIKTIONSVERDAU
39
2.2.1.3.2
ISOLIERUNG
AUS
AGAROSEGELEN
UND
PRAEZIPITATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
39
2.2.1.3.3
AUFFUELLREAKTION
VON
DNA-FRAGMENTEN
40
2.2.1.3.4
DEPHOSPHORYLIERUNG
40
2.2.1.3.5
LIGATION
VON
DNA
MIT
PLASMIDVEKTOREN
41
2.2.1.3.6
TRANSFORMATION
VON
PLASMID-DNA
IN
E.
COLI
BAKTERIENZELLEN
41
2.2.1.3.6.1
HITZESCHOCKTRANSFORMATION
41
2.2.1.3.6.2
ELEKTROTRANSFORMATION
(ELEKTROPORATION)
42
2.2.1.3.7
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
42
2.2.1.3.7.1
PLASMID-MINIPRAEPARATION
(LYSE
DURCH
KOCHEN)
42
2.2.1.3.7.2
PLASMID-MAXIPRAEPARATION
(CAESIUMCHLORID-ETHIDIUMBROMID-GRADIENT)
43
2.2.1.3.8
SEQUENZIERUNG
NACH SANGER
44
2.2.1.3.8.1
SEQUENZIERUNGSGEL
44
2.2.1.3.8.2
SEQUENZIERUNGSREAKTION
UND
SEQUENZANALYSE
44
2.2.1.3.9
POLYMERASE-CHAIN-REACTION
(PCR)
45
2.2.1.3.9.1
PCR
MIT
GENOMISCHER
DNA
AUS
FLIEGEN
ZUR
GENOTYPISIERUNG
45
2.2.1.3.9.2
PCR
ZUR
KLONIERUNG
DES
PGEX.-HAIRLESS
KONSTRUKTS
46
2.2.1.3.10
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
47
2.2.1.3.11
SOUTHERN
BLOT
47
2.2.1.3.12
HYBRIDISIERUNG
47
2.2.1.3.13
KOLONIE-FILTER-HYBRIDISIERUNG
48
INHALTSVERZEICHNIS
2.2.1.4 PROTEINPRAEPARATIONEN
48
2.2.1.4.1
WESTERN
BLOT
48
2.2.1.4.2
VORBEREITUNG
DER
EMBRYONEN
48
2.2.1.4.3
ANFERTIGUNG
DES
POLYACRYLAMIDMINIGELS
(10%)
UND
ELEKTROPHORESE
49
2.2.1.4.4
WESTERN
BLOT
UND
ANTIKOERPER-DETEKTION
50
2.2.1.4.5
EXPRESSION
UND
REINIGUNG
VON
FUSIONSPROTEIN
51
2.2.2
ARBEITEN
MIT
FLIEGEN
52
2.2.2.1
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
AUS
FLIEGEN
52
2.2.2.1.1
GROSSANSATZ
52
2.2.2.1.2
KLEINER
ANSATZ
53
2.2.22
PRAEPARATION
VON
KOMPLEXAUGEN
53
2.2.2.2.1
FIXIERUNG
DER
AUGEN
53
2.2.2.22
EINBETTUNG
DER
AUGEN
UND
SCHNITTE
54
2.2.2.3
FLIEGENZUCHT
54
2.2.2.4
ABSAMMELN
VIRGINELLER
WEIBCHEN
UND
KREUZUNGEN
54
2.2.2.5 KEIMBAHNTRANSFORMATION
-
ERZEUGUNG
TRANSGENER
FLIEGEN
55
2.2.2.5.
1
KO-INJEKTION
VON
TRANSFORMATIONSVEKTOR
UND
HELFERPLASMID
55
2.2.2.52
SELEKTION
UND
ETABLIERUNG
TRANSGENER
FLIEGENSTAEMME
55
2.2.2.6
EKTOPISCHE
UEBEREXPRESSION
MIT
DEM
GAL4-UAS
SYSTEM
56
2.2.22
MUTAGENESE
MIT
ETHYLMETHANSULFONAT
57
2.2.2.8
FJ-MODIFIKATOR-SCREEN
58
2.2.2.9
KOMPLEMENTATIONSANALYSE
(ALLELTEST)
UND
INTERAKTIONSTESTS
58
2.2.3
HISTOLOGISCHE
ARBEITEN
59
2.2.3.1
ABSAMMELN,
DECHORIONIEREN
UND
FIXIEREN
VON
EMBRYONEN
59
2.2.3.2
PRAEPARATION
VON
IMAGINALSCHEIBEN
59
2.2.3.3
ANTIKOERPERFAERBUNGEN
60
2.2.3.3.1
ANTIKOERPERFAERBUNGEN
VON
EMBRYONEN
60
2.23.3.2
ANTIKOERPERFAERBUNGEN
VON
IMAGINALSCHEIBEN
60
2.2.3.4
KOBALTSULFID-FAERBUNG
AN
PUPALEN
AUGENIMAGINALSCHEIBEN
61
2.2.3.5
BRDU-FAERBUNGEN
AN
IMAGINALSCHEIBEN
61
2.2.3.6
ACRIDINE
ORANGE
(AO)
FAERBUNGEN
AN
IMAGINALSCHEIBEN
62
2.2.3.7
PRAEPARATION
ADULTER
FLUEGEL
62
INHALTSVERZEICHNIS
2.2.3.8
CUTICULA-PRAEPARATE
VON
EMBRYONEN
62
2.2.3.9
PRAEPARATION
POLYTAENER
CHROMOSOMEN
AUS
SPEICHELDRUESEN
DRITTER
LARVEN
63
3
ERGEBNISSE
64
3.1
EYELESS-GETRIEBENES
HAIRIESS
ERZEUGT
EINEN
SPEZIFISCHEN
AUGENPHAENOTYP
65
3.1.1
KATEGORISIERUNG
DES
RAUHEN-AUGEN-PHAENOTYPS
67
3.2
HAIRTESS-INDUZIERTE
LETALITAET
71
3.2.1
RETTUNG
DER
HAIRIESS
LETALITAET
DURCH
GEWEBESPEZIFISCHE,
EKTOPISCHE
HAIRIESS
EXPRESSION?
73
3.2.1.1
AUSWAHL
DER
GEEIGNETEN
HAIRIESS
ALLELE
74
3.2.1.2
MEIOTISCHE
REKOMBINATION
VON
HAIRIESS
75
3.2.1.3
EKTOPISCHE
EXPRESSION
VON
[UAS-FLH]
IN
HAIRIESS
MUTANTEN
77
3.2.1.4
MOLEKULARE
BEWEISFUEHRUNG
MITTELS
PCR
82
3.3
FEHLEXPRESSIONSEXPERIMENTE
MIT
HAIRIESS
DELETIONSKONSTRUKTEN
84
3.3.1
ERZEUGUNG
TRANSGENER
LINIEN
85
3.3.2
AUGENSPEZIFISCHE
FEHLEXPRESSION
DER
HAIRIESS
DELETIONSKONSTRUKTE
87
3.3.2.1
EYELESS-GETRIEBENE
EXPRESSION
DER
HAIRIESS
DELETIONSKONSTRUKTE
87
3.3.2.2 SEVENLESS-GETRIEBENE
EXPRESSION
DER
HAIRIESS
DELETIONSKONSTRUKTE
88
3.3.2.3 GLASS-GETRIEBENE
EXPRESSION
DER
HAIRIESS
DELETIONSKONSTRUKTE
90
3.3.3
FEHLEXPRESSION
DER
HAIRIESS
DELETIONSKONSTRUKTE
MIT
WEITEREN
TREIBERLINIEN
93
3.4
DOMINANT-NEGATIVE
KONSTRUKTE
VON
HAIRIESS
94
3.4.1
DIE
C-TERMINALEN
DOMAENE
VON
HAIRIESS
95
3.4.2
DIE
SU(H)
BINDEDOMAENE
VON
HAIRIESS
95
3.4.2.1
HERSTELLUNG
EINES
GEGEN
DIE
SU(H)
BINDEDOMAENE
GERICHTETEN
ANTIKOERPERS
100
3.5
SCREEN
NACH
DOMINANTEN
MODIFIKATOREN
VON
HAIR/ESS-UEBEREXPRESSIONSPHAENOTYPEN
102
3.5.1
VOR-SCREEN
103
3.5.2
AUSGANGSKONSTRUKTE
FUER
DEN
MODIFIKATOR
SCREEN
106
3.5.2.1
KLONIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
TRANSGENEN
LINIE
[EY-FLH]
106
3.5.2.2
KLONIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
TRANSGENEN
LINIE
[SEV-FLH]
106
3.S.2.3
MOBILISIERUNG
DES
P-ELEMENTS
[SEV-H
267-1]
111
INHALTSVERZEICHNIS
3.5.3
DOMINANT-MODIFIZIERENDE
DEFIZIENZEN
UND
KANDIDATENGENE
112
3.5.4
SCREEN
AUF
DOMINANTE
MODIFIKATOREN
DES
[EY-FLH]
PHAENOTYPS
116
3.5.5
SCREEN
AUF
DOMINANTE
MODIFIKATOREN
DES
[SEV-FLH]
PHAENOTYPS
116
3.5.6
GENETISCHE
UND
PHAENOTYPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
NEU
ISOLIERTEN
MUTANTEN
118
3.5.6.1
MUTANTE
61
(M
EI
)
120
3.5.6.2
MUTANTE
62
(M
62
)
122
3.5.6.3 MUTANTE
"
(M
63
)
127
3.5.6.4
MUTANTE
610
(M
610
)
132
3.S.6.5
MUTANTE
69
(M
69
)
133
3.5.6.6
MUTANTE
612
(M
612
)
UND
MUTANTE
614
(M
614
)
139
3.5.6.7
MUTANTE
615
(M
615
)
140
3.5.6.8
MUTANTE
617
(M
617
)
142
3.5.OE.9
X-CHROMOSOMALE
MUTANTEN
(M
64
;
M
BI
1
;
M
616
;
M
618
)
150
4
DISKUSSION
160
4.1
HAIRIESS
IST
IN
DIE
AUGENENTWICKLUNG
INVOLVIERT
160
4.2
WAIRZEJJ-INDUZIERTE
LETALITAET
161
4.3
RETTUNG
DER
LETALITAET
DER
HAIRIESS
MUTATION
DURCH
EKTOPISCHE
HAIRIESS
EXPRESSION?
163
4.4
FEHLEXPRESSIONSEXPERIMENTE
MIT
DEN
HAIRIESS
DELETIONSKONSTRUKTEN
163
4.5
DOMINANT-NEGATIVE
EFFEKTE
VON
HAIRIESS
166
4.6
SCREEN
NACH
DOMINANTEN
MODIFIKATOREN
VON
HAIRLESS
UEBEREXPRESSIONSPHAENOTYPEN
168
4.6.1
DEFIZIENZEN
UND
KANDIDATENGENE
168
4.6.2
NEUE
INTERAKTIONSPARTNER
VON
HAIRIESS
169
4.6.2.1
DELTA*
170
4.6.2.2
STAR*
UND
STAR*
0
171
4.6.2.3
RUGOSE*
UND
RUGOSE
E
"
173
4.6.2.4
WEITERE
MUTATIONEN
174
4.6.2.4.1
MUTATION
69
174
4.6.2.4.2
MUTATION
617
175
INHALTSVERZEICHNIS
5
ZUSAMMENFASSUNG
177
6
LITERATUR
179
7
APPENDICES
198
7.1
TRANSGENE
STAEMME
198
7.1.1
GAL4
TREIBERLINIEN
198
7.1.2
UAS
LINIEN
198
7.1.3
SONSTIGE
LINIEN
199
7.2
BALANCER
UND
MARKER
199
7.3
MUTANTEN
199
7.3.1
X-CHROMOSOM
200
7.3.2
ZWEITES
CHROMOSOM
200
7.3.3
DRITTES
CHROMOSOM
200
7.3.4
VIERTES
CHROMOSOM
201
7.4
SONSTIGE
LINIEN
201
7.5
DEFIZIENZEN
201
7.5.1
DEFIZIENZ-KIT
VOM
DROSOPHILA
STOCK
CENTER
IN
UMEA
(SCHWEDEN)
201
7.5.1.1
X-CHROMOSOM
202
7.5.1.2
ZWEITES
CHROMOSOM
203
7.5.1.3
DRITTES
CHROMOSOM
206
7.6
REKOMBINATIONSKARTIERUNG
VON
M
E9
209 |
| any_adam_object | 1 |
| author | Schreiber, Simone Lore |
| author_facet | Schreiber, Simone Lore |
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