Frühe Entwicklungsschritte in der Pathogenese der B-Zell-Lymphome vom mukosa-assoziierten lymphatischen Gewebe (MALT)-Typ:
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
I
I. EINLEITUNG_ 1
1. DIE B- UNDT-ZELLEN DES IMMUNSYSTEMS.2
/.
1 DIE AUFGABEN DER B- UND T-ZELLEN
.
2
1.2 DIE ANTIGENERKENNUNG UEBER B-ZELL-REZEPTOR (BCR) BZW. T-ZELL-REZEPTOR
(TCR)
.
3
2.
DIE NORMALE ENTWICKLUNG VON B-ZELLEN.4
2.1 DIE KONTROLLMECHANISMEN DER B-ZELL-ENTWICKLUNG
.
4
2.2 DAS INSTRUMENT DER T-ZELL-KONTROLLE: FAS (CD9S, APO-L)-VERMITTELTE
APOPTOSE
.
10
3. DIE MALT-TYP LYMPHOME UND DLBL.13
3.1 DIE ENTSTEHUNGSVORAUSSETZUNG: ANLAGE VON SEKUNDAEREM LYMPHATISCHEN
GEWEBE
(MALT)
.
13
3.2 DIE TUMORZELLEN UND IHRE PROGRESSION
.
13
3.3 DIE PATHOLOGIE
.
14
3.4 DER EINFLUSS VON ANTIGEN- UND T-ZELL-STIMULATION AUF DIE MALIGNEN
B-ZELLEN
.
14
3.5 DAS PARADOXON DER MALT-TYP LYMPHOMGENESE
.
16
4. DIE AUFGABENSTELLUNG.16
H. MATERIAL UND METHODEN.18
1. MATERIAL.18
1.1 UNTERSUCHTE LYMPHOME
.
18
1.2 DIE WICHTIGSTEN PUFFER UND LOESUNGEN
.
20
\
1.3 OLIGONUKLEOTIDE
.
23
1.4 GROESSENSTANDARDS
.
24
1.5 ARBEITSGERAETE
.
25
2.
METHODEN.26
J
2.1 METHODEN ZUR UNTERSUCHUNG TUMOR-INFILTRIERENDER T-ZELLEN
.
26
2.1.1 ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA AUS TIEFGEFRORENEM TUMORGEWEBE.26
2.1.2 CDNA-SYNTHESE.26
2.1.3 GAPDH-PCR.27
2.1.4 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE.28
2.1.5 T-ZELL-REZEPTOR (TCR) VSS-FAMILIENSPEZIFISCHE RT- PCR.28
2.1.6 TCR-ANALYSEN.30
2.1.7 KLONIERUNG UND SEQUENZIERUNG DER CDR3-REGION DES TCR.32
2.1.8 EINSTELLEN DER CDNA FUER EINE SEMIQUANTITATIVE RT-PCR.36
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/961566655
II
INHALTSVERZEICHNI S
2.1.9 SEMIQUANTITATIVE FASL-SPEZIFISCHE RT- PCR AN TUMOR-INFILTRIERENDEN
T-ZELLEN.36
2.2 METHODEN ZUR UNTERSUCHUNG MALIGNER UND NORMALER B-ZELLEN
.
38
2.2
.1 IMMUNOMAGNETISCHE ISOLIERUNG MALIGNER B-ZELLEN.38
2.2.2 IMMUNOMAGNETISCHE ISOLIERUNG NORMALER T- UND B-ZELLEN AUS
TONSILLEN.38
2.2.3 ZELLKULTUR.
39
2.2.3
.1
ZELLZAHLBESTIMMUNG NACH NEUBAUER.
39
2.2.3.2 AKTIVIERUNG VON NORMALEN T-ZELLEN UEBER ANTI-CD3-STIMULATION.39
2.2.3.3 T/B-ZELL-KOKULTUR.40
2.2.4 FACS-ANALYSE.
41
2.2.4.1 REINHEITSKONTROLLE ISOLIERTER ZELLEN.42
2.2.4.2 MESSUNG VON FAS-EXPRESSION UND APOPTOSERATE (7-AAD-VERSUCH)
MALIGNER EI-
ZELLEN .
44
2.2.5 ISOLIERUNG VON GESAMT-RNA AUS B-ZELLEN NACH DER T/B-ZELL-KOKULTUR
UND DARAN
ANSCHLIESSENDE CDNA-SYNTHESE.
45
2.2.6 UNTERSUCHUNG DER EXPRESSION APOPTOSE-RELEVANTER GENE MITTELS
MULTIPLEX RT-PCR.46
2.2.7 DENSITOMETRISCHE AUSWERTUNG DER MULTIPLEX RT-PCR.47
2.2.8 FAS-SPEZIFISCHE RT-PCR.
47
2.2.9 KLONIERUNG UND SEQUENZIERUNG VON FAS CDNA MALIGNER B-ZELLEN.49
2.2.10 ISOLIERUNG VON GESAMTPROTEIN AUS B-ZELLEN NACH T/B-ZELL-KOKULTUR.
49
2.2.11 POLYACRYLAMID - GELELEKTROPHORESE (PAGE).
49
2.2.12 SEMI-DRY TRANSFER (BLOTTING) DER AUFGETRENNTEN PROTEINE AUF EINE
NITROCELLULOSE-
MEMBRAN.
51
2.2.13 IMMUNOBIOTTING.
51
2.2.14 IMMUNOPRAEZIPITATION VON LOESLICHEM FAS (SFAS).
53
M. ERGEBNISSE_54
1
. DAS T-ZELL-REPERTOIRE VON PATIENTEN MIT MALT-TYP LYMPHOM ZEIGT
ANTIGEN
INDUZIERTE KLONALE T-ZELL-EXPANSIONEN.
54
2. DIE TUMOR-INFILTRIERENDEN T-ZELLEN ZWEIER PATIENTEN MIT MALT-TYP
LYMPHOM
BESITZEN AEHNLICHE ANTIGENERKENNUNGS STELLEN.
57
3. FASL MRNA WIRD IN MALT-TYP LYMPHOMEN IN VIVO VON T-ZELLEN
EXPRIMIERT.60
4. DER T-ZELL-EINFLUSS STEIGERT DIE FAS-EXPRESSION NORMALER
GEDAECHTNIS-B-ZELLEN
UND MALIGNER B-ZELLEN AUS MALT-TYP LYMPHOMEN.62
INHALTSVERZEICHNIS III
5. EINIGE MALT-TYP LYMPHOME UND FAST ALLE UNTERSUCHTEN DLBL ZEIGEN
VERMINDERTE
SENSITIVITAET GEGENUEBER T-ZELL INDUZIERTER, FAS/FASL-VERMITTELTER
APOPTOSE.65
6. DER T-ZELL-EINFLUSS VERHINDERT DIE SPALTUNG VON PARP IN MALIGNEN
B-ZELLEN.70
7. DIE EXPRESSION APOPTOSE-RELEVANTER GENE IN NORMALEN UND MALIGNEN
B-ZELLEN
ZEIGT KEIN CHARAKTERISTISCHES MUSTER IN APOPTOSE-RESISTENTEN B-ZELLEN.72
8. EINIGE MALIGNE B-ZELLEN EXPRIMIEREN MRNA FUER LOESLICHES FAS (SOLUBLE
FAS, SFAS),
JEDOCH KEIN PROTEIN. 74
9. MALT-TYP LYMPHOME WEISEN MUTATIONEN IN FAS-TRANSKRIPTEN MALIGNER
B-ZELLEN
AUF.77
10. ZUSAMMENFASSENDE ERGEBNISTABELLE.7.83
IV. DISKUSSION_84
1. TUMOR-INFILTRIERENDE T-ZELLEN SIND WICHTIGE BESTANDTEILE DER MALT-TYP
LYMPHOME.84
2. DIE RESISTENZ GEGENUEBER FAS-VERMITTELTER APOPTOSE KOENNTE AUF
MUTATIONEN IN DEN
FAS-TRANSKRIPTEN MALIGNER B-ZELLEN ZURUECKZUFUEHREN SEIN.87
3. FAS-MUTATIONEN UND APOPTOSE-RESISTENZ SIND CHARAKTERISTIKA DER FRUEHEN
MALT-
TYP LYMPHOMGENESE.,.95
V. ZUSAMMENFASSUNG_98
VL SUMMARY_100
VII. LITERATURVERZEICHNIS
.101
VFFL. ANHANG_ 113
ABKUERZUNGS VERZEICHNIS.113
LEBENSLAUF.117
PUBLIKATIONEN.118 |
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