Die Bedeutung der CD4+-T-Zellantwort im Mausmodell der Masern-Virus-induzierten Enzephalitis:
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2000
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UEBERSICHT
1. EINLEITUNG UND FRAGESTELLUNG 1
2. MATERIALIEN 11
2.1. GERAETE 11
2.2. VERBRAUCHSMATERIALIEN 11
2.3. RADIOCHEMIKALIEN 12
2.4. MEDIEN, LOESUNGEN, PUFFER 12
2.4.1. ZELLKULTUR 12
2.4.2. DURCHFLUSSZYTOMETRIE 13
2.4.3. ELISA 14
2.4.4. VIRUSREINIGUNG _ 14
2.4.5.
IN
SITA-HYBRIDISIERUNG 14
2.4.6. IMMUNHISTOCHEMIE 16
2.4.7. AFFINIAETSCHROMATOGRAPHIE 16
2.5. ZELLINIEN UND ANTIKOERPER 17
2.6. REKOMBINANTE PROTEINE 18
2.7. VIRUSSTAEMME 18
2.8. VERSUCHSTIERE 19
3. METHODEN 20
3.1. ZELLKULTUR 20
3.1.1. HALTUNG VON SUAEPENSIONSZELLEN 20
3.1.2. HALTUNG VON ADHAERENTEN ZELLEN 20
3.2. TIEREXPERIMENTE 20
3.2.1. INFEKTION 20
3.2.2. DEPLETION VON T-ZELLEN 20
3.2.3. SCHUTZVERSUCHE 21
3.2.4. ADOPTIVER TRANSFER VON LYMPHOZYTEN 21
3.2.5. NEUTRALISIERUNG VON IFN-Y 21
3.2.6. ORGANENTNAHME 22
3.2.7. PRAEPARATION VON MILZZELLEN, LYMPHKNOTEN
UND ANTIGEN-PRAESENTIERENDEN ZELLEN 22
3.2.8. BLUTENTNAHME UND SERUMGEWINNUNG 22
3.3. PROLIFERATIONSTEST 23
3.4. CHROMFREISETZUNGSVERSUCH 23
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.5. BESTIMMUNG VON ZYTOKINEN IM T-ZELLKULTURUEBERSTAND 24
3.6. VIROLOGISCHE METHODEN 25
3.6.1. VIRUSANZUCHT 25
3.6.1.1. MV-EDMONSTON 25
3.6.1.2. ZUCHT VON CAM/RB 25
3.6.1.3. VAKZINIA-VIRUS I 25
3.6.2. MV-PLAQUETEST 26
3.6.3. VAKZINIA-PLAQUETEST 26
3.6.4. VIRUSISOLIERUNG AUS DEM ZNS 26
3.6.5. NEUTRALISATIONSTEST 27
3.6.6. IFN-Y NEUTRALISATIONSTEST 27
3.6.7. GEWINNUNG VON MASERN-VIRUS ANTIGEN 29
3.6.8. ELISA ZUM NACHWEIS MV-SPEZIFISCHER ANTIKOERPER 29
3.7. HISTOLOGIE 30
3.8.
IN
S/TW-HYBRIDISIERUNG 30
3.9. IMMUNHISTOCHEMIE 32
3.9.1. PARAFFINPRAEPARATE 32
3.9.2. GEFRIERPRAEPARATE 33
3.10. ANALYTISCHE DURCHFLUSSZYTOMETRIE 33
3.11. REINIGUNG VON IMMUNGLOBULINEN 34
3.11.1. HYBRIDOMA-UEB^RSTAND 34
3.11.2. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE MIT PROTEIN G 34
3.11.3. PROTEINBESTIMMUNG 3 5
4. ERGEBNISSE 36
4.1. VERGLEICH DES KRANKHEITSVERLAUFS
IN EMPFAENGLICHEN UND RESISTENTEN MAEUSEN 36
4.2. VIRUSRUECKISOLIERUNG AUS DEM ZNS 38
4.3. UEBERPRUEFUNG DER VIRUSAUSBREITUNG IM GEHIRN 39
4.4. VERGLEICHENDE HISTOLOGISCHE ANALYSE 41
4.5. BESTIMMUNG DER IMMUNREAKTIVITAET IM ZNS 42
4.6. ANALYSE DER MV-SPEZIFISCHEN CD4+ T-ZELLANTWORT 44
4.7. PROTEKTIVE KAPAZITAET SEKUNDAERER MV-SPEZIFISCHER CD4+ T-ZELLEN 46
4.8. DIE FAS-VERMITTELTE LYSE ALS ANTIVIRALER EFFEKTORMECHANISMUS 47
4.9. IFN-Y PRODUKTION MV-SPEZIFISCHER CD4+ T-ZELLEN 50
4.10. ANTIVIRALE WIRKUNG VON IFN-Y GEGEN DAS MV 51
4.11. IFN-Y ALS REGULATOR DER MV-SPEZIFISCHEN IMMUNANTWORT 54
4.11.1 MIGRATION MV-SPEZIFISCHER CD4+ T-ZELLEN IN DAS ZNS 54
4.11.2. ANTIGENPROZESSIERUNG UND - PRAESENTATION 55
4.12. CD4+T-ZELLEN ALS HELFERZELLEN 58
4.12.1. CD4+ T-ZELLEN ALS HELFER FUER CD8+ T-ZELLEN 58
4.12.1.1. T-ZELLHILFE FUER PRIMAERE MV-SPEZIFISCHE CD8+ T-ZELLEN 58
4.12.1.2. SEKUNDAERE CD8+ T-ZELLEN 60
4.12.2. CD4+ T-ZELLEN ALS HELFER DER HUMORALEN IMMUNANTWORT 61
4.12.2.1. GRUNDLAGE EINER SCHUETZENDEN HUMORALEN IMMUNANTWORT 61
4.12.2.2. PROTEKTIVE KAPAZITAET SEKUNDAERER B-ZELLEN 63
4.12.2.3. DIE ROLLE CD4+ T-ZELLEN BEI DER BILDUNG
EINER SCHUETZENDEN HUMORALEN IMMUNANTWORT 64
5. DISKUSSION 67
6. ZUSAMMENFASSUNG 77
7. SUMMARY 79
LITERATUR
ABKUERZUNGEN |
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