Die Rolle der Histone als Gen-Carrier bei der transgenen Expression des HIV-tat-Gens in Jurkat Zellen:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2000
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Frankfurt (Main), Univ., Diss., 2000 |
| Beschreibung: | 190 S. Ill., graph. Darst. : 21 cm |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
VORWORT
5
A
EINLEITUNG
7
A
1
ZIELZELLEN
DER
GENTHERAPIE
.
9
A
2
GENTRANSFERSYSTEME
12
A
3
ANSATZ
EINER
GENTHERAPIE
13
A
3.1
REZEPTORVERMITTELTER
GENTRANSFER
14
A
3.1.1
VIRALE
SYSTEME
ZUM
GENTRANSFER
IN
EUKARYONTEN
15
A
3.1.1.1
RETROVIRALE
VEKTOREN
16
A
3.1.1.2
ADENOVIRALE
VEKTOREN
19
A
3.1.1.3
ADENOASSOZIIERTER
VIRUS
VEKTOR
21
A
3.1.1.4
HERPES
SIMPLEX
VIRUS
VEKTOR
22
A
3.1.2
NICHT-VIRALE
SYSTEME
ZUM
GENTRANSFER
IN
EUKARYONTEN
24
A
3.2
NICHT-REZEPTORVERMITTELTE
GENTRANSFERSYSTEME
27
A
3.2.1
PHYSIKALISCHE
TRANSFEKTIONSMETHODEN
28
A
3.2.2
CHEMISCHE
TRANSFEKTIONSMETHODEN
29
A
3.2.2.1
DNA-COPRAEZIPITATION
30
A
3.2.2.2
POLYELEKTROLYTE
31
A
3.2.2.3
LIPOSOMEN
33
A
3.2.2.4
KATIONISCHE
LIPIDE
35
A
3.3
GEGENUEBERSTELLUNG
DER
VOR
UND
NACHTEILE
DER
VER
39
SCHIEDENEN
GENTRANSFERSYSTEME
B
ZIELSETZUNG
UND
PROBLEMSTELLUNG
DIESER
ARBEIT
41
C
MATERIALIEN
43
C
1
GERAETE
43
C
2
CHEMIKALIEN
UND
KITS
44
D
METHODEN
46
D
1
PLASMIDDARSTELLUNG
UND
ISOLATION
46
2
INHALTSVERZEICHNIS
D2
RESTRIKTIONSANALYSE
48
D3
SDS-PAGE
ZUR
REINHEITS
UND
QUALITAETSKONTROLLE
DER
HISTONCHARGEN
49
D
3.1
PROBENVORBEREITUNG
UND
HERSTELLUNG
DER
MINIGELE
49
D3.2
DURCHFUEHRUNG
DER
ELEKTROPHORESE
(PAGE)
UND
VISUAL
LISIERUNG
DER
ELEKTROPHORETISIERTEN
HISTONE
50
D4
ZELLEN
50
D5
TRANSFEKTION
51
D5.1
TRANSFEKTION
MIT
DEAE-DEXTRAN
53
D
5.2
TRANSFEKTION
MIT
LIPOFECTIN
53
D5.3
TRANSFEKTION
MIT
LIPOFECTAMINE
54
D
5.4
TRANSFEKTION
MIT
DOTAP
54
D
5.5
TRANSFEKTION
MIT
DOSPER
55
D
5.6
TRANSFEKTION
MIT
HISTONEN
UND
POLYLYSIN
55
D6
LYSE
DER
ZELLEN
56
D
7
PROTEINBESTIMMUNG
57
D8
RADIOACTIV-CAT-ASSAY
(FLUORDIFFUSION
CAT
ASSAY
(DU
PONT
BIOTECH)
AUS
BIOTECH
UPDATE
APRIL
1990)
57
D9
ELECTROPHORETIC
MOBILITY
SHIFT
ASSAY
(EMSA)
VON
HI
STON-PLASMID-DNA-KOMPLEXEN
60
D
10
DNASE-VERDAU
DER
PLASMID-DNA
IN
HISTON-PLASMID
DNA-KOMPLEXEN
61
D
10.1
DNASE-VERDAU
DER
PLASMID-DNA
MIT
DNASE
I
IN
GE
GENWART
VON
RESTRIKTIONSENZYMEN
61
D
10.2
DNASE-VERDAU
DER
PLASMID-DNA
DURCH
JURKAT
ZELLLYSAT
62
DU
DARSTELLUNG
UND
AUFARBEITUNG
VON
DESOXYOLIGONUKLEO
TIDEN
63
D
11.1
SYNTHESE
VON
ANTISENSE-OLIGONUKLEOTIDEN
MITTELS
EINES
DNA-SYNTHESIZERS
(ECOSYN
D300,
EPPENDORF
BIOTRONIK)
63
D
11.2
AUFARBEITUNG
UND
REINIGUNG
DER
SYNTHETISIERTEN
ANTI
SENSE
-OLIGONUKLEOTIDNUKLEOTIDE
67
INHALTSVERZEICHNIS
3
E
ERGEBNISSE
71
E
1
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
OPTIMIERUNG
DER
PARAMETER
DER
71
TRANSFEKTION
MIT
HISTON
UND
ANDEREN
TRANSFEKTAN
TEN/TRANSFEKTIONSSYSTEMEN
E
1.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
PLASMIDE
71
E
1.2
ERMITTELUNG
DES
TRANSAKTIVIERUNGSPOTENTIALS
VERSCHIE
73
DENER
GENTRANSFER-SYSTEME
E
1.2.1
ERMITTLUNG
DES
OPTIMALEN
DNA-TRANSFEKTANTEN
MAS-
74
SENVERHAELTNISSES
(RATIO)
VERSCHIEDENER
TRANSFEKTIONS
METHODEN
E
1.2.1.1
TRANSFEKTION
MIT
LIPOFECTIN
75
E
1.2.1.2
TRANSFEKTION
MIT
LIPOFECTAMINE
77
E
1.2.1.3
TRANSFEKTION
MIT
DOTAP
79
E
1.2.1.4
TRANSFEKTION
MIT
DOSPER
81
E
1.2.1.5
TRANSFEKTION
MIT
HISTON
H3
(FA.
FLUKA)
83
E
1.2.1.6
TRANSFEKTION
MIT
HISTON
H4
(FA.
FLUKA)
92
E
1.2.2
EINFLUSS
DER
KONTAKTZEIT
AUF
DAS
GENTRANSFERPOTENTIAL
100
VERSCHIEDENER
TRANSFEKTIONSSYSTEME
E
1.2.2.1
TRANSFEKTION
MIT
LIPOFECTIN
IN
ABHAENGIGKEIT
DER
KON
100
TAKTZEIT
E
1.2.2.2
TRANSFEKTION
MIT
LIPOFECTAMINE
IN
ABHAENGIGKEIT
DER
102
KONTAKTZEIT
E
1.2.2.3
TRANSFEKTION
MIT
DOTAP
IN
ABHAENGIGKEIT
DER
KON
104
TAKTZEIT
E
1.2.2.4
TRANSFEKTION
MIT
DOSPER
IN
ABHAENGIGKEIT
DER
KONTAKT
106
ZEIT
E
1.2.2.5
TRANSFEKTION
MIT
HISTON
H3
IN
ABHAENGIGKEIT
DER
KON
108
TAKTZEIT
(FA.
FLUKA)
E
1.2.2.6
TRANSFEKTION
MIT
HISTON
H4
IN
ABHAENGIGKEIT
DER
KON
114
TAKTZEIT
(FA.
FLUKA)
E
1.3
TRANSFEKTION
MIT
EINER
L:L-MISCHUNG
DER
HISTONE
H3
121
UND
H4
(FA.
FLUKA)
4
INHALTSVERZEICHNIS
E2
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
MECHANISMUS
DER
HISTONWIRKUNG
BEI
DER
GENTRANSFEKTION
123
E2.1
KINETISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
PLASMID-DNA-HISTON
KOMPLEXBILDUNG
124
E2.2
ELECTROPHORETIC
MOBILITY
SHIFT
ASSAY
(EMSA)
EXPERIMENTE
DER
PLASMID-DNA-HISTON-KOMPLEXE
127
E2.3
TRANSFEKTIONS
UND
EMSA-EXPERIMENTE
MIT
DEN
HISTO
NEN
HL
UND
H2A
UND
POLYLYSIN
129
E2.4
TRANSFEKTIONSVERSUCHE
MIT
DEN
HISTONEN
H3
UND
H4
IN
GEGENWART
VON
MONOKLONALEN
HISTON-ANTIKOERPERN
-
133
E
2.5
ELECTROPHORETIC
MOBILITY
SHIFT
ASSAY
(EMSA)
EXPERIMENTE
MIT
PLASMID-DNA-HISTON-KOMPLEXEN
IN
GEGENWART
VON
HISTONANTIKOERPEM
136
E2.6
STABILITAET
DER
PLASMID-DNA-HISTON-KOMPLEXE
GEGEN
UEBER
NUKLEASEN
139
E2.7
CHARAKTERISIERUNG
DER
HISTONCHARGEN
143
E3
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
ANWENDUNG
DES
HISTONVERMITTEL
TEN
DNA-TRANSFERS
VON
ANTISENSE
OLIGINUKLEOTIDEN
146
F
DISKUSSION
152
G
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
165
H
LITERATURVERZEICHNIS
169
I
VERWENDETE
ABKUERZUNGEN
186
J
PUBLIKATIONSVERZEICHNIS
189
J1
ORGINALARBEITEN
189
J2
SONSTIGES
190 |
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