Die löslichen Kollagene des bovinen Glaskörpers: Isolierung und Analyse verschiedener Formen von Kollagen IX und Kollagen II
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| Format: | Buch |
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| Veröffentlicht: |
1999
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
.
III
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
DER
AUFBAU
DES
BINDEGEWEBES
.
1
1.2.
KOLLAGENE:
WICHTIGE
BESTANDTEILE
DES
BINDEGEWEBES
.
2
1.3.
KOLLAGENE
DES
GLASKOERPERS
.
4
1.4.
KOLLAGEN
II
.
4
1.5.
KOLLAGEN
IX
.
7
1.6.
KOLLAGEN
II,
IX
UND
XI
IN
HETEROTYPISCHEN
FIBRILLEN
.
9
1.7.
DER
GLASKOERPER:
AUFBAU
UND
FUNKTION
.
10
1.8.
AUFGABENSTELLUNG
.
13
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
14
2.1.
MATERIAL
.
14
2.2.
PRAEPARATION
DES
GLASKOERPERS
.
14
2.2.1.
ENTNAHME
.
14
2.2.2.
ULTRAZENTRIFUGATION
.
15
2.2.3.
FRAKTIONIERTE
SALZFAELLUNG
.
15
2.2.4.
REINIGUNG
MIT
NATRIUMACETAT-PUFFER
.
16
2.3.
CHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN
.
16
2.3.1.
SDS-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
16
2.3.1.1.
PRINZIP
.
16
2.3.1.2.
DURCHFUEHRUNG
.
17
2.3.1.3.
REDUKTION
VON
DISULFID
(S-S)-BRUECKEN
.
18
2.3.1.4.
ENTSALZEN
VOR
SDS-PAGE
.
18
2.3.2.
WESTERN
BLOT
.
19
2.3.2.1.
PRINZIP
.
19
2.3.2.2.
DURCHFUEHRUNG
.
19
2.3.3.
DIETHYLAMINOETHYL
(DEAE)-ANIONENAUSTAUSCHER
CHROMATOGRAPHIE
.
20
2.3.3.1.
PRINZIP
.
20
2.3.3.2.
DURCHFUEHRUNG
.
21
2.4.
ANALYTISCHE
METHODEN
.
22
2.4.1.
PEPSIN
.
22
2.4.2.
KOLLAGENASE
.
23
2.4.3.
CHONDROITINASE
ABC
.
23
2.4.4.
HYALURONIDASE
.
24
2.4.5.
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
24
3.
ERGEBNISSE
.
26
3.1.
GEWINNUNG
UND
AUFTRENNUNG
DER
KOLLAGENE
.
26
3.1.1.
MATERIAL
UND
GEWINNUNG
.
26
3.1.2.
ANREICHERUNG
DER
KOLLAGENE
IM
UEBERSTAND
.
26
3.1.3.
FRAKTIONIERTE
NACI-FAELLUNG
.
27
3.1.4.
REINIGUNG
DURCH
NAAC-PUFFER
.
30
3.2.
IDENTIFIZIERUNG
DER
KOLLAGENE
.
30
3.2.1.
ANHAND
DES
LAUFVERHALTENS
IN
DER
SDS-PAGE
.
30
3.2.2.
DURCH
PEPSINVERDAU
.
31
3.2.3.
DURCH
KOLLAGENASEABBAU
.
33
3.2.4.
DURCH
SPEZIFISCHE
ANTIKOERPER
IM
WESTERN
BLOT
.
35
3.2.4.1.
ANTI
TYP
IL-ANTIKOERPER
.
35
3.2.4.2.
ANTI
TYP
IX-ANTIKOERPER
.
37
3.3.
CHARAKTERISIERUNG
DER
KOLLAGENE
.
38
3.3.1.
KOLLAGEN
II
.
38
3.3.1.1.
DEAE-CHROMATOGRAPHIE
MIT
HOHER
SALZKONZENTRATION
.
39
3.3.1.2.
DEAE-CHROMATOGRAPHIE
MIT
NIEDRIGER
SALZKONZENTRATION
.
41
3.3.2.
KOLLAGEN
IX
.
43
3.3.2.1.
DEAE-CHROMATOGRAPHIE
MIT
HOHER
SALZKONZENTRATION
.
43
3.3.2.2.
BEHANDLUNG
MIT
CHONDROITINASE
ABC
.
46
II
3.3.2.3.
BEHANDLUNG
MIT
CHONDROITINASE
ABC
UND
MERCAPTOETHANOL
.
48
3.3.2.4.
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
50
4.
DISKUSSION
.
52
4.1.
DIE
LOESLICHEN
KOLLAGENE
DES
GLASKOERPERS:
BISLANG
WENIG
UNTERSUCHT
.
52
4.2.
PRAEPARATION
UND
IDENTIFIKATION
VON
KOLLAGEN
II
UND
IX
.
53
4.3.
LOESLICHES
KOLLAGEN
II:
ENTDECKUNG
DER
LANGEN
UND
KURZEN
PN(LL)-PROPEPTIDE
.
55
4.4.
LOESLICHES
KOLLAGEN
IX:
IM
RINDERGLASKOERPER
KOMMEN
VIER
VERSCHIEDENE
FORMEN
VOR
.
58
4.5.
KOLLAGEN
IX:
MOEGLICHE
FUNKTIONEN
.
60
5.
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
.
63
5.1.
ZUSAMMENFASSUNG
.
63
5.2.
AUSBLICK
.
64 |
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