Untersuchungen zur Stabilisierung der Chinoprotein Glucose-Dehydrogenase aus Acinetobacter calcoaceticus durch chemische Quervernetzung:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2000
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INHALT
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
STABILISIERUNG
VON
PROTEINEN
DURCH
CHEMISCHE
MODIFIZIERUNG
1
1.1.1.
THERMISCHE
INAKTIVIERUNG
VON
PROTEINEN
1
1.1.2.
METHODEN
ZUR
STABILISIERUNG
VON
PROTEINEN
GEGEN
THERMISCHE
INAKTIVIERUNG
2
1.2.
DIE
GLUCOSE-DEHYDROGENASE,
EIN
CHINOPROTEIN
8
1.3.
DIE
VERWENDUNG
DES
ENZYMS
IM
BEREICH
DIAGNOSTICA
ZUR
BLUTZUCKERBESTIMMUNG
16
2.
PROBLEMSTELLUNG
18
3.
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
20
3.1.
MODIFIZIERUNG
DER
GLUCDOR
DURCH
REAKTION
MIT
20
VERSCHIEDENEN
IMIDOESTERN
3.1.1.
DURCHFUEHRUNG
DER
MODIFIZIERUNGSREAKTIONEN
20
3.1.2.
CHARAKTERISIERUNG
DER
MODIFIZIERTEN
GLUCDOR
25
3.1.3.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
THERMISCHEN
STABILITAET
38
3.1.3.1.
STABILITAETSTEST
39
3.1.3.2.
DIFFERENTIAL
SCANNING
CALORIMETRY
(DSC)
47
3.1.3.3.
STABILITAETSTEST
UNTER
THERMISCHER
LANGZEIT
BELASTUNG
49
3.1.4.
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
UNTER
BERUECK
SICHTIGUNG
DER
ROENTGENSTRUKTUR
51
3.2.
ISOLIERUNG
UND
UNTERSUCHUNG
DER
KOVALENT
VERKNUEPFTEN
DMS
UND
DMH-GLUCDOR-DIMEREN
AUS
DEM
GESAMTANSATZ
56
3.2.1.
ISOLIERUNG
DER
KOVALENT
VERKNUEPFTEN
GLUCDOR
.
DIMEREN
56
3.2.2.
STABILITAETSTEST
DER
ISOLIERTEN
DIMEREN
64
3.3.
UNTERSUCHUNG
DER
STABILITAET
DMH-MODIFIZIERTER
GLUCDOR
BEI
ERHOEHTER
INKUBATIONSKONZENTRATION
IM
STABILITAETSTEST
66
3.4.
MODIFIZIERUNG
DER
GLUCDOR
DURCH
CHEMISCHE
QUER
VERNETZUNG
MIT
DMH
UND
PEGYLIERUNG
70
3.4.1.
CHARAKTERISIERUNG
DER
MODIFIZIERTEN
GLUCDOR
78
3.4.2.
STABILITAETSTEST
80
4.
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
83
5.
EXPERIMENTELLER
TEIL
86
5.1.
ALLGEMEINES
86
5.1.1.
GERAETE
UND
MATERIALIEN
86
5.1.2.
VERWENDETE
CHEMIKALIEN
87
5.2.
ALLGEMEINE
METHODEN
89
5.2.1.
BESTIMMUNG
DES
PROTEINGEHALTES
89
5.2.1.1.
GLUCDOR-APO-ENZYM
89
5.2.1.2.
GLUCDOR-HOLO-ENZYM
89
5.2.2.
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
89
5.2.3.
GELSCAN
90
5.2.4.
MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG
91
5.2.5.
BESTIMMUNG
VON
AMINOGRUPPEN
DURCH
2,4,6
TRINITROBENZOLSULFONSAEURE
91
5.2.6.
BESTIMMUNG
VON
SULFHYDRYLGRUPPEN
92
5.2.6.1.
METHODE
NACH
GRASSETTI
92
5.2.6.2.
METHODE
NACH
ELLMAN
93
5.2.7.
AKTIVITAETSTEST
DER
GLUCDOR
94
5.2.8.
STABILITAETSTEST
DER
GLUCDOR
96
5.2.9.
UMKEHRPHASEN-HPLC
98
5.2.10.
DIFFERENTIAL
SCANNING
CALORIMETRY
(DSC)
98
5.3.
ENZYMATISCHE
ARBEITEN
99
5.3.1.
PQQ-REKONSTITUTION
DER
GLUCDOR
99
5.3.2.
CHEMISCHE
MODIFIZIERUNG
DER
GLUCDOR
99
5.3.2.1.
MODIFIZIERUNG
DER
GLUCDOR
DURCH
REAKTION
MIT
IMIDOESTERN
99
5.3.2.2.
KOMBINATION
VON
QUERVERNETZUNG
UND
PEGYLIERUNG
100
5.3.3.
ISOLIERUNG
DER
KOVALENT
ZUM
DIMEREN
VERKNUEPFTEN
ANTEILE
AUS
DEM
GESAMTIMIDOESTERMODIFIZIERUNGS-
ANSATZ
103
5.3.3.1.
FPLC-GELFILTRATION
UNTER
NATIVEN
BEDINGUNGEN
103
5.3.3.2.
VORBEHANDLUNG
MIT
CDTA
UND
GELFILTRATION
UNTER
NORMALDRUCK
104
5.3.3.3.
VORBEHANDLUNG
MIT
EGTA
UND
FPLC
GELFILTRATION
104
5.3.3.4.
VERSUCH
ZUR
REAKTIVIERUNG
VON
MONO
MERISIERTEM
GLUCDOR-APO-ENZYM
104
5.3.3.5.
PRAEPARATIVE
ABTRENNUNG
VON
MONOMERISIERBAREN
ANTEILEN
AUS
DEN
GESAMTMODIFIZIERUNGSANSAETZEN
DER
DMS
UND
DMH-GLUCDOR
105
6.
LITERATURVERZEICHNIS
106
7.
ANHANG
110 |
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