Stimulation von Zellen des angeborenen Immunsystems durch bakterielle DNA:
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| Format: | Buch |
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| Veröffentlicht: |
2000
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| Beschreibung: | München, Techn. Univ., Habil.-Schr., 2000 |
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2
INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG 6
VERZEICHNIS DER ABKURZUNGEN 8
EINLEITUNG 9
1. DER AUFBAU DES IMMUNSYSTEMS 9
1.1 DIE ANGEBORENE UND DIE ERWORBENE RESISTENZ 9
1.2 FUNKTIONELLE GLIEDERUNG DES IMMUNSYSTEMS 10
1.3 AKTIVIERUNG UND FUNKTIONELLE VERFLECHTUNG VON ANGEBORENEM
UND ERWORBENEM IMMUNSYSTEM 11
1.4 ZELLWANDBESTANDTEILE VON BAKTERIEN AKTIVIEREN INNATE IMMUNZELLEN
UEBER MEMBRANPROTEINE DER ,TOLL-LIKE' REZEPTOR (TLR)-FAMILIE 12
2. MOLEKULARE MECHANISMEN DER ZELLAKTIVIERUNG 13
2.1 SIGNALTRANSDUKTION 13
2.2 AKTIVIERUNG VON
NF-KB ' 14
2.3 AKTIVIERUNG VON AP-1 16
2.4 MITOGEN-AKTIVIERTE PROTEINKINASEN 16
/
/
3. BAKTERIELLE DNA STIMULIERT ZELLEN DES ANGEBORENEN IMMUNSYSTEMS 18
3.1 GESCHICHTLICHE ENTWICKLUNG VON BAKTERIELLER DNA ALS STIMULUS
FUER IMMUNZELLEN 18
3.2 DAS ,CPG-MOTIF ALS STIMULATORISCHES PRINZIP BAKTERIELLER DNA
(CPG-DNA) 19
3.3 MOLEKULARE MECHANISMEN VON CPG-DNA 19
4. SPEKTRUM UND ZIEL VORLIEGENDER ARBEIT
20
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3
MATERIAL UND METHODEN 22
1. ZELLKULTUR 22
1.1 KULTUR VON ZELLINIEN 22
1.2 ISOLIERUNG UND KULTUR VON DENDRITISCHEN ZELLEN AUS MURINEM
KNOCHENMARK 22
1.3 ISOLIERUNG VON PERITONEALMAKROPHAGEN
YY
23
1.4 TRANSFEKTION VON ZELLEN 23
1.5 HERSTELLUNG STABILER TRANSFEKTANTEN 23
2. ZYTOFLUOROMETRISCHE UNTERSUCHUNG VON ZELLEN IM FACS (FLUORESCENCE
ACTIVATED CELL SORTER) 24
3. ZYTOKINBESTIMMUNG IM ELISA 24
4. LUZIFERASE REPORTERASSAY 24
5. WESTERN BLOT 25
6. IN-VITRO KINASEASSAY 26
7. HERSTELLUNG REKOMBINANTER GST
(GLUTATHION-S-TRANSFERASE)-FUSIONSPROTEINE 27
8. MESSUNG DER DNA-BINDUNGAKTIVITAET VON TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
(ELECTROMOBILITY SHIFIT ASSAY (EMSA)) 28
9. BESTIMMUNG DER MRNA-MENGE VON IL-12 P40 UND TNF IM
,RNASE PROTECTION ASSAY (RPA)' 28
10. BESTIMMUNG DER ENDOSOMALEN AUFNAHME VON CPG-ODN 29
11. PLASMIDE, ANTIKOERPER UND REAGENZIEN 29
11.1 PLASMIDE 29
11.2 ANTIKOERPER 30
11.3 REAGENZIEN 30
/
ERGEBNISSE 32
1. SIGNALTRANSDUKTION DURCH CPG-DNA 32
1.1. CPG-DNA AKTIVIERT DEN TRANSKRIPTIONSFAKTOR AP-1 UEBER KLASSISCHE
SIGNALWEGE 32
1.1.1 DIE MAKROPHAGEN-ZELLINIE ,ANA-1 ' WIRD AKTIVIERT DURCH CPG-DNA 32
1.1.2 TRANSKRIPTIONELLE AKTIVIERUNG VON AP-1 DURCH CPG-DNA 34
1.1.3 UNTERSUCHUNG DER AP-1 -BINDUNGSAKTIVITAET UNTER STIMULATION DURCH
CPG-DNA 3 5
4
1.1.4 CPG-DNA INDUZIERT DIE PHOSPHORYLIERUNG VON C-JUN UND ATF2 36
1.1.5 CPG-DNA AKTIVIERT STRESSKINASEN 37
1.2. CPG-DNA AKTIVIERT ERK/MAP KINASEN IN MAKROPHAGEN
39
1.2.1 CPG-DNA INDUZIERT ERK1/2 IN DER MAKROPHAGEN-ZELLINIE RAW264.7 UND
PRIMAEREN MAKROPHAGEN 39
1.2.2 AKTIVIERUNG VON ERK1/2 KORRELIERT MIT PHOSPHORYLIERUNG VON
THR202/TYR204 41
1.2.3 CPG-DNA INDUZIERT ERK1/2 ,UEBER' MEK1/2 41
1.3 CPG-DNA AKTIVIERT DEN IICB-KINASEN (IKK)-KOMPLEX 42
1.3.1 CPG-DNA INDUZIERT DIE DEGRADATION VON HCBA IN RAW264.7-ZELLEN 43
1.3.2 CPG-DNA AKTIVIERT IKKA/SS 43
1.4 CPG-DNA AKTIVIERT APCS UEBER SIGNALTRANSDUKTIONSMOLEKUELE DES
TLR/IL-IR-PATHWAY 44
1.4.1 IL-12 P40 WIRD ,UEBER' TRAF6 AKTIVIERT 46
1.4.2 CPG-DNA AKTIVIERT IKK UND JNK ,UEBER' TRAF6 47
1.4.3 CPG-DNA INDUZIERT IL-12 P40, IKK UND JNK ,UEBER' MYD88 48
1.4.4 CPG-DNA-ABHAENGIGE EFFEKTORMECHANISMEN BENOETIGEN MYD88 50
2.
FUNKTIONELLE BEDEUTUNG CPG-DNA-AKTIVIERTER SIGNALWEGE FUER
EFFEKTORMECHANISMEN ANTIGEN-PRAESENTIERENDER ZELLEN (APC)
52
2.1 AKTIVIERUNG VON P38 REGULIERT DIE FREISETZUNG VON TNF UND IL-12 53
2.2 AKTIVIERUNG DES ERK/MAPK-PATHWAYS' REGULIERT TNF UND IL-12 IN
GEGENSINNIGER WEISE 54
2.3 CPG-DNA-INDUZIERTEERK/MAPKSUPPRIMIERENIL-12P40AUFPROMOTEREBENE 55
2.4 KEINE BEEINFLUSSUNG DER ERK-AKTIVITAET DURCH ,PRIMING' VON/
MAKROPHAGEN MIT INTERFERON Y 58
2.5 ZELLTYP-SPEZIFISCHE AKTIVIERUNG VON MAP KINASEN: CPG-DNA AKTIVIERT
ERK IN MAKROPHAGEN, ABER NICHT IN DENDRITISCHEN ZELLEN 59
3. AKTIVIERUNG VON ZELLEN DURCH CPG-DNA BENOETIGT ENDO-
SOMALE AUFNAHME UND MATURATION 62
3.1 CPG-DNA WIRD VON ZELLEN DURCH CG-UNABHAENGIGE ENDOZYTOSE AUFGENOMMEN
63
3.2 INHIBITION ENDOSOMALER AUFNAHME UND ENDOSOMALER AZIDIFIZIERUNG
BLOCKIEREN DIE AKTIVIERUNG VON ZELLEN DURCH CPG-DNA* 65
5
DISKUSSION 68
1. CPG-DNA AKTIVIERT KLASSISCHE SIGNALTRANSDUKTIONSWEGE 68
1.1 CPG-DNA AKTIVIERT DEN TRANSKRIPTIONSFAKTOR AP-1 68
1.2 CPG-DNA AKTIVIERT STRESSKINASEN UND KINASEN DES IKK-KOMPLEX' 69
2. CPG-DNA-INDUZIERTE MAP KINASEN REGULIEREN EFFEKTOR-
MECHANISMEN VON ZELLEN DES ANGEBORENEN IMMUNSYSTEMS 71
2.1 P3 8-KINASEN REGULIEREN DIE PRODUKTION VON TNF UND IL-12 71
2.2 CPG-DNA INDUZIERT MEK/ERK IN MAKROPHAGEN:
DIFFERENZIELLE REGULATION VON TNF UND IL-12 72
2.3 DIE ZELLTYP-ABHAENGIGE AKTIVIERUNG DES MEK/ERK-PATHWAYS DURCH
CPG-DNA KONTROLLIERT DIE FREISETZUNG VON IL-12 74
3. CPG-DNA AKTIVIERT ZELLEN UEBER DEN TLR/IL-LR-SIGNALWEG 76
4. ENDOSOMALE AUFNAHME VON CPG-ODN UND ENDOSOMALE REIFUNG ALS
VORAUSSETZUNG FUER CPG-DNA-ABHAENGIGE ZELLAKTIVIERUNG 78
*
5. BAKTERIELLE DNA AKTIVIERT ZELLEN DES ANGEBORENEN
IMMUNSYSTEMS: EIN MODELL 80
DANKSAGUNG 82
LITERATURVERZEICHNIS
83 |
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