Die Bedeutung von CRISP-Proteinen für die Fertilität des Hengstes:
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| adam_text | Titel: Die Bedeutung von CRISP-Proteinen für die Fertilität des Hengstes
Autor: Reineke, Alexandra
Jahr: 2000
Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 9
2 Literaturfibersicht 11
2.1 Anatomie und Physiologie des Genitaltraktes beim Hengst 11
2.1.1 Hoden (Testis) 11
2.1.2 Nebenhoden (Epididymis) 13
2.1.3 Samenleiter (Ductus deferens) 14
2.1.4 Akzessorische Geschlechtsdrüsen 14
2.1.4.1 Samenleiterampulle (Ampulla ductus deferentis) 15
2.1.4.2 Samenblasendrüse (Glandula vesicuiaris) 16
2.1.4.3 Vorsteherdrüse (Prostata) 16
2.1.4.4 Harnröhrenzwiebeldrüse (Glandula bulbourethralis) 17
2.2 Das Spermium 17
2.2.1 Morphologie des Spermiums 18
2.2.1.1 Spermienkopf 18
2.2.1.2 Spermienschwanz 19
2.2.1.3 Die Plasmamembran 20
2.3 Spermienreifung 21
2.3.1 Posttestikuläre Spermienreifung 22
2.3.2 Kapazitation 25
2.4 Akrosomreaktion 27
2.5 Der Befruchtungsvorgang 28
2.6 Das Seminalplasma 31
2.6.1 Zusammensetzung des Seminalplasmas 32
2.6.2 Seminalplasmaproteine 33
2.6.3 Equine Seminalplasmaproteine 36
2.7 CRISP-Proteine 39
3 Eigene Untersuchungen 42
3.1 Material und Methoden 42
3.1.1 Isolierung von HSP-3 aus Seminalplasma 42
3.1.2 Verwendete Antikörper 45
3.1.3 SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese 46
3.1.3.1 Probenvorbereitung 47
3.1.3.2 Durchfuhrung der SDS-Gelelektrophorese 49
3.1.4 Western Blot 51
3.1.5 Indirekte Immunfluoreszenzmikroskopie 52
3.1.5.1 Anfertigung der Ausstriche 52
3.1.5.2 Durchführung der indirekten Inununfluoreszenzniikroskopie 53
3.1.6 Qualitativer ELISA (enzyme-linked immunosorbant assay) 54
3.1.7 Kompetitiver ELISA zur Bestimmung von CRISP-Proteinen auf equinen
Spermien 55
3.1.7.1 Probengewinnung 55
3.1.7.2 Konventionelle spermatologische Untersuchung 56
3.1.7.3 Probenvorbereitung 56
3.1.7.4 ELISA-Protokoll 58
3.1.7.5 Datenanalyse 59
3.1.8 Molekularbiologische Methoden 60
3.1.8.1 Allgemeine Maßnahmen 60
3.1.8.2 Probengewinnung 60
3.1.8.3 mRNA-Präparation aus Gewebe 61
3.1.8.4 Reverse Transkription 63
3.1.8.5 Spezifische Primer 64
3.1.8.6 Poiymerase-Kettenreaktion (Polyraerase Chain Reaction/PCR) 64
3.1.8.7 Sequenzanalyse 66
3.2 Ergebnisse 69
3.2.1 Isolierung von CRISP-3 aus equinem Seminalplasma 69
3.2.2 Etablierung eines kompetitiven ELISA-Essays zur Quantifizierung der
CRISP-Proteinkonzentration in equinen Spermien 74
3.2.3 Korrelationen zwischen der Menge spermiengebundener CRISP-Proteine
und der Fertilität 79
3.2.4 Untersuchungen auf Proteinebene 87
3.2.4.1 Nachweis von CRISP-Proteinen in equinen Gewebeextrakten 88
3.2.4.2 Untersuchung von Geweben unterschiedlich fertiler Hengste auf
CRISP-Proteine 88
3.2.5 Untersuchungen auf Transkriptionsebene 91
3.2.6 Untersuchungen von bovinen und porzinen Gewebeextrakten auf CRISP-
Proteine 95
4 Diskussion 96
4.1 Bedeutung der CRISP-Proteine für die Fertilitätsbeurteilung 96
4.2 Bedeutung der CRISP-Proteine für die Fertilität 99
4.3 Schlußbetrachtung 106
5 Zusammenfassung 108
6 Summary 109
7 Literaturverzeichnis 110
8 Anhang 129
8.1 Chemikalien und ihre Hersteller 129
8.2 Tabelle der Fertilitätsdaten und der durchschnittlichen CRISP-Proteinwerte der
untersuchten Hengste. 131
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