Untersuchungen zum molekularen Mechanismus der Substrattranslokation über das Enzym IIMtl und Analyse der mtl-Gene aus Klebsiella pneumoniae:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2000
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
EINLEITUNG
.
I
U.
MATERIAL
UND
METHODEN
II.
1
BAKTCRIENSTAEMME
UND
PLASMID
.
17
11.2
CHEMIKALIEN,
ISOTOPE
UND
ENZYME
.
19
11.3
NAEHRMEDIEN
.
20
11.4
ANZUCHTVERFAHREN
.
22
11.5
HERSTELLEN
VON
ZELLEXTRAKTEN
.
23
II.
6
CHEMISCHE
UND
BIOCHEMISCH-ANALYTISCHE
METHODEN
.
24
II.
7
DNA-TECHNIKEN
UND
GENETISCHE
METHODEN
.
30
II.8
COMPUTERPROGRAMME
.
34
UL
ERGEBNISSE
III.L
ISOLIERUNG
VON
MTLA-MUTANTEN
AUS
KLEBSIELLA
PNEUMONIAE
.
35
III
1.1
DIE
VOLLSTAENDIGE
SEQUENZ
UND
GENPRODUKTE
DES
M/Z-OPERONS
AUS
KLEBSIELLA
PNEUMONIAE
.
36
IN.
1.1.1
KLONIERUNG
DES
MTZ-OPERONS
AUS
KAY2026
.
36
III
1.1.2
RESTRIKTIONSANALYSE
UND
SUBKLONIERUNG
.
37
III.L.
1.3
SEQUENZIERUNG
DES
MZ/-OPERONS.
38
III.L
1.4
KLONIERUNG
DES
INTAKTEN
UND
EINES
CARBOXYTERMINAL
VERKUERZTEN
MRZX-GENS
AUS
KLEBSIELLA
PNEUMONIAE
.
45
HI.
1.2
SELEKTION
VON
MTLA-MUTANTEN,
DIE
IN
DER
LAGE
SIND,
AUF
FREIEM
MANNITOL
ZU
WACHSEN
.
46
ID.
1.2.1
SEQUENZIERUNG
VERSCHIEDENER
MRZ4-ALLELE
AUS
DEN
TRANSLOKATIONSMUTANTEN
.
51
M.2
PHYSIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VON
MTLA-MUTANTEN
AUS
KLEBSIELLA
PNEUMONIAE
UND
ESCHERICHIA
COLI
.
54
III.2.1
EINBRINGEN
DER
MUTATIONEN
H256P
BZW.
Y
UND
E218A
IN
EIN
INTAKTES
MTLA-PROTEIN
.
54
M.2.2
WACHSTUM
DER
TRANSLOKATIONSMUTANTEN
AUF
MANNITOL
IN
AN,
UND
ABWESENHEIT
DER
D-ARABINITOL-DEHYDROGENASE
.
55
M.2.3
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHISCHE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
ERLASSUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
SUBSTRAT
UND
SUBSTRATPHOSPHATKONZENTRATIONEN
.
59
M.2.3.1
DC-UNTERSUCHUNGEN
MIT
EINEM
MTT
STAMM
.
59
III.2.3.2
DC-UNTERSUCHUNGEN
MIT
DEM
MTLD'
STAMM
JWL239
.
61
III.2.3
.3
DC-UNTERSUCHUNGEN
MIT
DEM
MTLA-MUTANTEN
AUS
KAY2026
.
66
III.2
3.4
ANALYSE
DER
CHROMOSOMALEN
MT/X-MUTATION
DES
STAMMES
JWL170
.
68
NI.2
3
5
TRANSPORT
VON
NIEDRIGAFFINEN
NEBENSUBSTRATEN
UEBER
DAS
II
MI1
.
71
II1.2.4
TRANSPORTMESSUNGEN
UND
K
M
-WERTBESTINUNUNG
.
75
FFL.2.5
UNTERSUCHUNG
WEITERER
PLASMIDKODIERTER
MTLA-MUTANTEN
.
77
UI.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
MANNITOLLP-DEHYDROGENASE
AUS
KLEBSIELLA
PNEUMONIAE
KAY2026
.
80
III.3
1
KLONIERUNG
EINER
VERKUERZTEN
MTL
IP-DEHYDROGENASE
AUS
KAY2026
.
81
III.3.2
NACHWEIS
DER
GENPRODUKTE
DURCH
T7-UEBEREXPRESSION
.
82
III.3.3
ENZYMATISCHE
AKTIVITAET
DER
VERKUERZTEN
MTLIP-DEHYDROGENASE
.
83
III.3.3
.1
IN
VIVO
NACHWEIS
DER
MTLLP-DEHYDROGENASEAKTIVITAET
.
85
M.3.4
ZELLWACHSTUM
BEI
VERSCHIEDENEN
MANNITOL-KONZENTRATIONEN
.
87
NI.3.5
HEMMUNG
DES
ZELLWACHSTUMS
DURCH
ZUGABE
VON
MANNITOL
.
88
III.3.6
INAKTIVIERUNG
DER
MANNITOLLP-DEHYDROGENASE
DURCH
ZUGABE
VON
TOLUOL
.
91
NI.3.7
TEMPERATURINAKTIVIERUNG
DER
MANNITOLLP-DEHYDROGENASE
.
93
IV.
DISKUSSION
IV.
1
ANALYSE
DER
MTL
DNA-SEQUENZ
AUS
KLEBSIELLA
PNEUMONIAE
.
95
FV.2
MTLA
.
98
IV.3
MTLD
.
106
IV.3.1
AKTIVITAET
EINER
CARBOXYTERMINAL
VERKUERZTEN
MANNITOL
IP-DEHYDROGENASE
.
108
IV.4
MODELLE
ZUR
BESCHREIBUNG
DES
MOLEKULAREN
MECHANISMUS
DER
SUBSTRATTRANSLOKATION
UEBER
EIN
ENZYM
II
.
110
IV.4.1
TRANSLOKATION
VON
HOCHAFFINEN
SUBSTRATEN
UEBER
EIN
ENZYM
II
.
114
IV.4.2
TRANSLOKATION
VON
NIEDRIGAFFINEN
SUBSTRATEN
UEBER
EIN
ENZYM
II
.
116
IV.4.3
TRANSLOKATIONSMUTANTEN
DES
II
MD
.
119
V.
ZUSAMMENFASSUNG
.
125
VI.
LITERATURVERZEICHNIS
.
127
VII.
ANHANG |
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