Zur Struktur und Expression zweier keimzellspezifischer Gene: MCS und HASH:
Gespeichert in:
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|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Diss.-Verl. NG-Kopierladen
2000
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: Göttingen, Univ., Diss., 1997 |
| Beschreibung: | XII, 163 S. Ill., graph. Darst. : 21 cm |
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
SEITE
MU
1
EINLEITUNG
1
1.1
GENEXPRESSION
WAEHREND
DER
SPERMATOGENESE
1
1.2
DAS
"MITOCHONDRIAL
CAPSULE
SELENOPROTEIN"
(MCS)
-
EIN
STRUKTURPROTEIN
DER
MITOCHONDRIENKAPSEL
DES
SPERMIUMS
2
1.3
AKROSIN
-
EIN
WICHTIGES
ENZYM
IM
FERTILISATIONSPROZEB
4
2
MATERIAL
UND
METHODEN
9
2.1
CHEMIKALIEN
9
2.2
GEBRAUCHSWAREN
11
2.3
STERILISATION
11
2.4
PUFFER
UND
STAMMLOESUNGEN
11
2.5
VERWENDETE
BAKTERIENSTAEMME,
VEKTOREN,
GEWEBEPTOBEN,
TIERE,
GENSONDEN
UND
BIBLIOTHEKEN
17
2.5.1
BAKTERIENSTAEMME
17
2.5.2
VEKTOREN
17
2.5.3
GEWEBEPROBEN
UND
TIERE
17
2.5.4
GENSONDEN
17
2.5
5
SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTIDE
18
2
5.6
BIBLIOTHEKEN
19
2.5.6.1
CDNA-BIBLIOTHEK
AUS
MENSCHLICHEM
TESTIS
19
2.5.6.2
CDNA-BIBLIOTHEKEN
AUS
RATTENTESTIS
19
2.5.6.3
CDNA-BIBLIOTHEK
AUS
MAUSTESTIS
20
2.5.6.4
GENOMISCHE
COSMID-BIBLIOTHEK
AUS
MENSCHLICHER
DNA
20
2.5.6.5
GENOMISCHE
PHAGEN-BIBLIOTHEKEN
AUS
DNA
DER
RATTE
20
2.6
MEDIEN,
ANTIBIOTIKA
UND
AGARPLATTEN
21
2.6.1
MEDIEN
FUER
BAKTERIEN
UND
PHAGEN
21
N
INHALTSVERZEICHNIS
2.6.2
ANTIBIOTIKA
22
2.6.3
X-GAL-PLATTEN
22
2.7
METHODEN
22
2.7.1
METHODEN
ZUR
ISOLIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
22
2.7.1.1
ISOLIERUNG
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
GEWEBEN
22
2.7.1.2
MINIPRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
23
2.7.1.3
MAXIPRAEPARATION
VON
PLASMID
ODER
COSMID-DNA
24
2.7.1.4
ISOLIERUNG
VON
PHAGEN-DNA
24
2.7.2
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
25
2.7.3
ISOLIERUNG
VON
POLY
A(+)-RNA
25
2.7.4
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
26
2.8
RESTRIKTIONSENZYMATISCHE
SPALTUNG
VON
DNA
26
2.9
GELELEKTROPHORESE
VON
NUKLEINSAEUREN
26
2.9.1
HORIZONTAL-GELELEKTROPHORESE
26
2.9.2
VERTIKAL-GELELEKTROPHORESE
27
2.9.3
DENATURIERENDE
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
27
2.9.4
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(PAGE)
28
2.9.4.1
PAGE
ZUR
AUFTRENNUNG
VON
KLEINEN
DNA-FRAGMENTEN
28
2.9.4.2
PAGE
ZUR
ANALYSE
VON
SEQUENZPROBEN
28
2.94.2.1
PAGE
ZUR
AUFTRENNUNG
33
S
ODER
32
P-MARKIERTER
PROBEN
28
2.9.4.2.2
PAGE
ZUR
AUFTRENNUNG
FLUORESENZMARKIERTER
PROBEN
28
2.9.4.2.3
SDS-PAGE
ZUR
AUFTRENNUNG
VON
PROTEINEN
29
2.10
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
29
2.10.1
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
MIT
DER
"JET-SORB
"
-METHODE
29
2.10.2
MARKIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
30
2.10.2.1
"RANDOM
PRIME''-MARKIERUNG
30
2.10.2.2
ENDMARKIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
30
2.10.2.3
RADIOAKTIVE
IN-VITRO
TRANSKRIPTION
31
2.10.2.4
RADIOAKTIVE
ENDMARKIERUNG
VON
DNA
32
2.11
TRANSFERTECHNIKEN
32
2.11.1
SOUTHERN-BLOTTING
32
2.11.2
NORTHEM-BLOTTING
32
2.11.3
ELEKTROBLOTTING
VON
PROTEINEN
33
M
INHALTSVERZEICHNIS
2.12
HYBRIDISIERUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
DNA
AN
NUKLEINSAEUREN
33
2.12.1
HYBRIDISIERUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
OLIGONUKLEOTIDE
AN
DNA
ODER
RNA
AUF
NITROCELLULOSEFILTER
33
2.12.2
EXPOSITION
DER
AUTORADIOGRAMME
34
2.13
ISOLIERUNG
REKOMBINANTER
KLONE
AUS
EINER
PHAGEN-BIBLIOTHEK
34
2.13.1
AUSPLATTIERUNG
DER
PHAGEN-BIBLIOTHEK
34
2.13.2
TRANSFER
DER
PHAGEN
AUF
NITROCELLULOSEFILTER
34
2.13.3
DENATURIERUNG
UND
HYBRIDISIERUNG
DER
PHAGEN-DNA
34
2.13.4
ANREICHERUNG
UND
ISOLIERUNG
DER
POSITIV
REKOMBINANTEN
PHAGEN
35
2.14
ISOLIERUNG
REKOMBINANTER
KLONE
AUS
EINER
COSMID-BIBLIOTHEK
35
2.14.1
AUSPLATTIEREN
DER
COSMID-BIBLIOTHEK
AUF
NITROCELLULOSEFILTER
36
2.14.2
LYSE
DER
BAKTERIEN
UND
DENATURIERUNG
DER
COSMID-DNA
36
2.14.3
IDENTIFIKATION
POSITIVER
COSMID-KLONE
36
2.15
SUBKLONIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
36
2.15.1
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
MIT
VEKTOR-DNA
37
2.15.2
HERSTELLUNG
UND
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
ZELLEN
37
2.16
"PRIMER-EXTENSION"-ANALYSE
38
2.16.1
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DES
PRIMERS
38
2.16.2
HYBRIDISIERUNG
DES
PRIMERS
AN
DIE
RNA
38
2.16.3
"PRIMER-EXTENSION"-REAKTION
38
2.17
SEQUENZANALYSE
VON
DNA
39
2.17.1
SEQUENZREAKTION
FUER
DIE
RADIOAKTIVE
SEQUENZANALYSE
VON
DNA
39
2.17.2
SEQUENZREAKTION
FUER
DIE
NICHT-RADIOAKTIVE
SEQUENZANALYSE
VON
DNA
39
2.17.3
DIREKTE
SEQUENZIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
40
2.17.4
ELEKTRONISCHE
VERWALTUNG
UND
ANALYSE
DER
SEQUENZDATEN
40
2.18
"POLYMERASE
CHAIN
REAKTION"
(PCR)
40
2.18.1
PCR
AN
PLASMID-DNA
41
2.18.2
PCR
AN
GENOMISCHER
DNA
41
2.18.3
PCR
AN
PHAGEN-DNA
42
2.18.4
REVERSE
PCR
(RT-PCR)
43
2.19
KONSTRUKTION
VON
MARATHON-CDNA-BANKEN
43
2.19.1
SYNTHESE
DER
MARATHON-CDNA-BANK
44
INHALTSVERZEICHNIS
IV
2.19.2
AMPLIFIKATION
VON
SPEZIFISCHEN
CDNAS
AUS
DER
MARATHON-CDNA
BANKEN
45
2.20
IN
V/U-HYBRIDISIERUNG
47
2.20.1
VORBEHANDLUNG
DER
OBJEKTTRAEGER
47
2.20.2
FIXIERUNG
DES
GEWEBES
47
2.20.3
LINEARISIERUNG
UND
VORBEREITUNG
DER
PROBEN
FUER
IN
SRIU-HYBRIDISIERUNG
47
2.20.4
MARKIERUNG
VON
RNA-PROBEN
48
2.20.5
KONTROLLE
DER
TRANSKRIPTE
48
2.20.6
HERSTELLUNG
VON
PARAFFINSCHNITTEN
49
2.20.7
ENTPARAFFINIERUNG,
PRAEINKUBATION
UND
VORHYBRIDISIERUNG
DER
GEWEBESCHNITTE
49
2.20.8
HYBRIDISIERUNG
DER
GEWEBESCHNITTE
UND
DETEKTION
DER
MARKIERTEN
PROBE
50
2.20.9
FAERBEN
DER
SCHNITTE
51
2.21
PROTEINANALYSEN
51
2.21.1
COOMASSIE-BLAU-FAERBUNG
VON
SDS-PAGE-GELEN
51
2.21.2
BESTIMMUNG
VON
PROTEINKONZENTRATION
51
2.22
EXPRESSION
VON
REKOMBINANTEM
PROTEIN
52
2.22.1
KLONIERUNG
DES
EXPRESSIONS-KONSTRUKTS
52
2.22.2
INDUKTION
UND
AUFREINIGUNG
VON
REKOMBINANTEN
PROTEIN
52
2.23
GEL
RETARDATION
ASSAY
53
2.23.1
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
FUER
DEN
GEL
RETARDATION
ASSAY
53
2.23.2
PROTEIN-DNA-BINDUNGSREAKTION
53
2.23.3
GELELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
DER
PROTEIN-DNA-KOMPLEXE
54
3
ERGEBNISSE
55
3.1
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
CDNA
FUER
DAS
MENSCHLICHE
"MITOCHONDRIAL
CAPSULE
SELENOPROTEIN"
(MCS)
55
3.1.1
ANALYSE
DER
VON
DER
CDNA
ABGELEITETEN
MCS-PRIMAERSTRUKTUR
58
3.1.2
UNTERSUCHUNG
ZUR
GEWEBESPEZIFISCHEN
EXPRESSION
59
3.1.3
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
ZELLSPEZIFISCHEN
EXPRESSION
DES
MENSCHLICHEN
MCS-GENS
60
V
INHALTAVERZEICHNIA
3.1.4
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
KONSERVIERUNG
DES
MCS-GENS
BEI
SAEUGERN
62
3.2
STRUKTUR
DES
MCS-GENS
DES
MENSCHEN
63
3.2.1
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
GENOMISCHER
KLONE
FUER
DAS
MENSCHLICHE
MCS-GEN
63
3.3
UNTERSUCHUNGEN
UEBER
DIE
ANZAHL
DER
MCS-GENE
IM
GENOM
DES
MENSCHEN
67
3.4
CHROMOSOMALE
LOKALISATION
DES
MCS-GENS
DES
MENSCHEN
70
3.5
IDENTIFIZIERUNG
VON
CDNA-KLONEN
FUER
DNA-BINDENDE
PROTEINE
AUS
EINER
XGTL
1
CDNA-EXPRESSIONSBIBLIOTHEK
DER
RATTE
71
3.5.1
UNTERSUCHUNG
EINES
GST-HASH
5B-FUSIONSPROTEINS
73
3.5.2
UNTERSUCHUNG
ZUR
IDENTIFIZIERUNG
VON
PROTEIN-DNA-INTERAKTIONEN
76
3.5.3
ISOLIERUNG
WEITERER
HASH
CDNA-KLONE
AUS
EINER
5'
XGTLO
RATTENTESTIS
CDNA-BIBLIOTHEK
78
3.5.4
ISOLIERUNG
ZWEIER
CDNA-FRAGMENTE
FUER
DEN
VOLLSTAENDIGEN
3'-BEREICH
DER
MRNA
DES
HASH-PROTEINS
DER
RATTE
79
3.5.5
ISOLIERUNG
EINES
CDNA-KLONS
FUER
DEN
5-BEREICH
DERHASH-MRNA
80
3.5.6
ANALYSE
DER
NUKLEOTIDSEQUENZEN
DER
HASH-CDNA-KLONE
82
3.5.7
ANALYSE
DER
VON
DER
CDNA
ABGELEITETEN
HASH-PROTEIN
PRIMAERSTRUKTUR
84
3.5.8
ANALYSE
DER
DREI
HASH-TRANSKRIPTE
86
3.5.9
EXPRESSIONSANALYSE
DES
HASH-GENS
DER
RATTE
87
3.5.9.1
GEWEBESPEZIFISCHE
TRANSKRIPTION
DES
HASH-GENS
DER
RATTE
87
3.5.9.2
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
EXPRESSION
DES
HASH-GENS
IN
DER
TESTISENTWICKLUNG
DER
RATTE
88
3.59.3
UNTERSUCHUNG
ZUR
EXPRESSION
DES
HASH-GENS
IN
DER
TESTISENTWICKLUNG
DURCH
RT-PCR
88
3.5.9.4
UNTERSUCHUNG
ZUR
ZELLSPEZIFISCHEN
EXPRESSION
DES
HASH-GENS
DER
RATTE
90
3.5.9.5
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
KONSERVIERUNG
DES
HASH-GENS
IN
DER
EVOLUTION
94
3
6
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
HASH-CDNA
DER
MAUS
95
3.6.1
ISOLIERUNG
VON
HASH-CDNA-KLONEN
DER
MAUS
95
3.6.2
ISOLIERUNG
VON
CDNA-FRAGMENTEN
FUER
DIE
5
'-UND
3
'-BEREICHE
DER
HASH-MRNA
DER
MAUS
95
VI
INHALTSVERZEICHNIS
3.6.3
ANALYSE
DER
NUKLEOTIDSEQUENZEN
DER
CDNA-KLONE
DER
MAUS
97
3.6.4
EXPRESSIONSANALYSE
DES
HASH-GENS
DER
MAUS
DURCH
NORTHEM-BLOT
EXPERIMENTE
99
3.6.4.1
UNTERSUCHUNG
DER
GEWEBESPEZIFISCHEN
TRANSKRIPTION
DES
HASH
GENS
DER
MAUS
99
3.OE.4.2
UNTERSUCHUNG
ZUR
EXPRESSION
DES
HASH-GENS
IN
DER
TESTISENTWICKLUNG
DER
MAUS
100
3.6.4.3
EXPRESSION
DES
HASH-GENS
BEI
MAUS-MUTANTEN
MIT
KEIMZELLDEFEKTEN
101
3.6.4.4
UNTERSUCHUNG
ZUR
ZELLSPEZIFISCHEN
EXPRESSION
DES
HASH-GENS
BEI
DER
MAUS
103
3.6.5
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
EXPRESSION
DES
HASH-GENS
BEI
DER
MAUS
DURCH
RT-PCR
106
3.6.5.1
GEWEBESPEZIFISCHE
UND
ZELLSPEZIFISCHE
TRANSKRIPTION
DES
HASH-GENS
BEI
DER
MAUS
106
3.7
STRUKTUR
DES
HASH-GENS
DER
RATTE
108
3.7.1
ISOLIERUNG
GENOMISCHER
KLONE
FUER
DAS
HASH-GEN
DER
RATTE
108
3.7.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
GENOMISCHEN
KLONE
FUER
DAS
HASH-GEN
DER
RATTE
109
3.7.3
SEQUENZANALYSE
UND
GENOMISCHE
ORGANISATION
DES
HASH-GENS
DER
RATTE
112
3.7.4
UNTERSUCHUNGEN
UEBER
DIE
KOPIEZAHL
DES
HASH-GENS
IM
GENOM
DER
RATTE
115
3.7.5
KONSERVIERUNG
DES
HASH-GENS
IN
DER
EVOLUTION
116
3.7.6
CHROMOSOMALE
LOKALISATION
DES
HASH-GENS
DER
RATTE
118
4
DISKUSSION
121
4.1
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
CDNA
UND
GEN
FUER
DAS
MENSCHLICHE
"MITOCHONDRIAL
CAPSULE
SELENOPROTEIN"
(MCS)
121
4.1.1
ANALYSE
DES
MCS-CDNA-KLONS
DES
MENSCHEN
121
4.2
DER
OFFENE
LESERAHMEN
DER
MCS-CDNA
123
4.3
ANALYSE
DER
PRIMAERSTRUKTUR
DES
MCS
123
4.4
ANALYSE
DER
GENOMISCHEN
ORGANISATION
DES
MCS-GENS
DES
MENSCHEN
125
INHALTSVERZEICHNIS
VN
4.5
ANALYSE
DER
EXPRESSION
DES
MENSCHLICHEN
MCS-GENS
127
4.6
ANALYSE
DER
PROTEIN-DNA-INTERAKTIONEN
IN
DER
PROMOTORREGION
DES
PROAKROSINGENS
DER
RATTE
129
4.7
ISOLIERUNG
DER
HASH-CDNA-KLONE
UND
ANALYSE
DER
NUKLEOTIDSEQUENZEN
BEI
RATTE
UND
MAUS
129
4.8
ANALYSE
DER
PRIMAERSTRUKTUR
DES
HASH-PROTEINS
BEI
RATTE
UND
MAUS
131
4.9
ANALYSE
DER
EXPRESSION
DES
HASH-GENS
VON
MAUS
UND
RATTE
134
4.10
ALTERNATIVES
SPLEISSEN
DER
HASH-MRNA
138
4.11
ANALYSE
DER
GENOMISCHEN
ORGANISATION
DES
HASH-GENS
DER
RATTE
142
4.12
KONSERVIERUNG
DES
HASH-GENS
IN
DER
EVOLUTION
143
4.13
CHROMOSOMALE
LOKALISATION
DES
HASH-GENS
143
5
ZUSAMMENFASSUNG
145
5.1
HUMAN
MITOCHONDRIAL
CAPSULE
SELENOPROTEIN
(MCS)
145
5.2
DAS
HASH-GEN
146
6
LITERATUR
147 |
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