Molekulare und funktionale Analyse des Ephrin-A5-Gens der Maus:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2000
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | München, Techn. Univ., Diss., 2000 |
| Beschreibung: | VII, 166 Bl. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
_
1
1.1
P
RINZIPIEN
NEURONALER
K
ONNEKTIVITAET
1
1.2
D
AS
RETINOTEKTALE
S
YSTEM
2
1.3
T
YROSIN
-K
INASE
-R
EZEPTOREN
DES
E
PH
S
UBTYPS
UND
IHRE
L
IGANDEN
4
1.4
D
IE
R
OLLE
DER
E
PH
-R
EZEPTOREN
UND
E
PHRINE
BEI
DER
E
TABLIERUNG
DER
RETINOTEKTALEN
TOPOGRAPHIE
8
1.4.1
D
IE
F
AMILIE
DER
E
PH
A-R
EZEPTOREN
UND
E
PHRIN
-A-L
IGANDEN
8
1.4.2
D
IE
F
AMILIE
DER
E
PH
B-R
EZEPTOREN
UND
E
PHRIN
-B-L
IGANDEN
9
1.5
F
UNKTIONELLE
A
NALYSEN
DER
E
PH
-R
EZEPTOREN
UND
E
PHRINE
AN
TRANSGENEN
T
IEREN
11
1.6
R
EGUIATION
DER
E
PH
-R
EZEPTOREN
UND
E
PHRINE
13
1.7
Z
IELSETZUNG
DER
A
RBEIT
15
2
MATERIAL
UND
METHODEN
16
2.1
G
ERAETELISTE
16
2.2
B
EZUGSQUELLEN
VON
C
HEMIKALIEN
,
E
NZYMEN
UND
ANDEREM
V
ERBRAUCHSMATERIAL
18
2.3
Z
USAMMENSETZUNG
DER
R
EAGENZIEN
,
P
UFFER
UND
S
TAMMLOESUNGEN
20
2.3.1
M
OLEKULARBIOLOGIE
20
2.3.2
H
ISTOLOGIE
23
2.32.1
FAERBUNGEN
MIT
FUSIONSPROTEINEN
ALKALISCHER
PHOSPHATASE
23
2.3.2.2
IN
STO-HYBRIDISIERUNG
24
2.3.2.3
IMMUNHISTOCHEMISCHE
FAERBUNGEN
25
2.3.2.4
X-GAL-FAERBUNG
25
2.3.2.5
SKELETTFAERBUNG
26
2.3.4
ES-Z
ELL
-K
ULTUR
26
2.4
O
LIGONUKLEOTIDPRIMER
26
2.5
P
LASMID
-DNA-K
LONE
ZUR
H
ERSTELLUNG
VON
C
RNA-S
ONDEN
27
2.6
V
ERWENDETE
T
IERE
-
H
ALTUNG
28
2.7
B
ESTIMMUNG
EMBRYONALER
S
TADIEN
28
2.8
I
SOLIERUNG
GENOMISCHER
DNA
29
2.8.1
I
SOLIERUNG
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
G
EWEBE
29
2.8.2
I
SOLIERUNG
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
Z
ELLEN
30
2.9
I
SOLIERUNG
VON
RNA
30
2.10
G
EL
-E
LEKTROPHORESE
31
2.10.1
DNA-G
EL
-E
LEKTROPHORESE
31
2.10.2
D
ENATURIERENDE
RNA-G
EL
-E
LEKTROPHORESE
31
2.11
T
RANSFERTECHNIKEN
31
2.11.1
S
OUTHERN
-B
LOTTING
31
2.11.2
N
ORTHERN
-B
LOTTING
32
2.12
H
YBRIDISIERUNG
MIT
32
P
MARHERTEN
DNA-S
ONDEN
32
2.13
A
UTORADIOGRAPHIE
33
2.14
I
SOLIERUNG
VON
DNA-F
RAGMENTEN
AUS
A
GAROSEGELEN
33
2.15
M
OLEKULARE
K
LONIERUNGEN
34
2.15.1
L
IGATIONSREAKTIONEN
34
2.15.2
H
ERSTELLUNG
TRANSFORMATIONSKOMPETENTERE
W
-Z
ELLEN
34
2.15.3
T
RANSFORMATION
KOMPETENTERE
COU
-Z
ELLEN
34
2.15.4
P
LASMIDISOLIERUNG
AUS
TRANSFORMIERTEN
B
AKTERIEN
(M
INIPRAEPARATION
)
35
2.15.5
P
LASMIDISOLIERUNG
AUS
TRANSFORMIERTEN
B
AKTERIEN
(M
AXIPRAEPARATION
)
35
2.16
I
SOLIERUNG
VON
K
LONEN
AUS
EINER
GENOMISCHEN
P
HAGEN
-B
IBLIOTHEK
36
2.16.1
A
NZUCHT
DER
W
IRTSBAKTERIEN
36
2.16.2
T
ITERBESTIMMUNG
36
2.16.3
A
USPLATTIEREN
VON
P
HAGEN
36
2.16.4
T
RANSFER
VON
P
HAGEN
-DNA
AUF
N
YLONMEMBRANEN
36
2.16.5
G
EWINNUNG
REINER
P
HAGENKLONE
37
2.17
I
SOLIERUNG
VON
P
HAGEN
-DNA
37
2.18
C
HARAKTERISIERUNGGENOMISCHER
K
LONE
38
2.19
M
ARKIERUNG
VON
DNA
UND
C
RNA-S
ONDEN
39
2.19.1
M
ARKIERUNG
VON
DNA-S
ONDEN
MIT
32
P
39
2.19.2
M
ARKIERUNG
VON
C
RNA-S
ONDEN
MIT
35
S
40
2.19.3
M
ARKIERUNG
VON
C
RNA-S
ONDEN
MIT
D
IGOXIGENIN
40
2.20
R
EVERSE
T
RANSKRIPTION
DER
M
RNA
41
2.21
5
'
-RACE
42
2.22
G
ENOTYPISIERUNG
TRANSGENER
M
AEUSE
43
2.22.1
G
ENOTYPISIERUNG
DER
PWW
-A5
"
-M
UTANTEN
43
2.22.1.1
GENOTYPISIERUNG
UEBER
PCR
43
2.22.1.2
GENOTYPISIERUNG
UEBER
HYBRIDISIERUNGGENOMISCHERDNA
44
2.22.2
G
ENOTYPISIERUNG
DER
AM^-M
UTANTEN
44
2.22.3
G
ENOTYPISIERUNG
DER
WAEW
-A5-P
ROMOTOR
-T
RANSGENEN
45
2.23
DNA-S
EQUENZIERUNG
45
2.23.1
S
EQUENZREAKTIONEN
45
2.23.2
E
LEKTROPHORESEDES
S
EQUENZGELS
46
2.23.3
A
USWERTUNG
DER
S
EQUENZEN
47
2.24
RNA'/
NS
/
TU
-H
YBRIDISIERUNG
47
2.24.1
RNA-
VS
/
TO
-H
YBRIDISIERUNG
AN
G
ANZKOERPERPRAEPARATEN
VON
E
MBRYONEN
47
2.24.2
RNA-
VS
77V-H
YBRIDISIERUNG
AN
S
CHNITTEN
GEFRORENEN
G
EWEBES
48
2.24.2.1
HERSTELLUNG
VON
GEFRIERSCHNITTEN
48
2.24.2.2
HYBRIDISIERUNG
MIT
35
S-MARKIERTEN
CRNA-SONDEN
49
2.24.2.3
HYBRIDISIERUNG
MIT
DIGOXIGENIN-MARKIERTEN
CRNA-SONDEN
49
2.24.3
RNA-A
VOTU
-H
YBRIDISIERUNG
AN
P
ARAFFIN
-S
CHNITTEN
50
2.24.3.1
HERSTELLUNG
VON
PARAFFIN-SCHNITTEN
50
2.24.3.2
HYBRIDISIERUNG
MIT
35
S-MARKIERTEN
CRNA-SONDEN
50
2.24.3.3
HYBRIDISIERUNG
MIT
DIGOXIGENIN-MARKIERTEN
CRNA-SONDEN
51
2.25
H
AEMALAUN
/
E
OSIN
(HE)-F
AERBUNG
51
2.26
N
ISSL
-F
AERBUNG
51
2.27
R
EZEPTOR
-B
INDUNGSASSAYS
MIT
ALKALISCHER
P
HOSPHATASE
(AP)-F
USIONSPROTEINEN
52
2.28
IMMUNOHISTOCHEMISHE
FAERBUNG
AN
GANZKOERPERPRAEPARATEN
VON
EMBRYONEN
52
2.29
X-G
AL
-F
AERBUNG
53
2.30
S
KELETTFAERBUNG
53
2.31
F
AERBUNG
VON
A
XONEN
MIT
UPOPHILEN
F
ARBSTOFFEN
53
2.32
D
OKUMENTATION
HISTOLOGISCHER
E
RGEBNISSE
54
2.33
K
ULTIVIERUNG
UND
M
ANIPULATION
EMBRYONALER
S
TAMMZELLEN
(ES-Z
ELLEN
)
DER
M
AUS
55
2.33.1
V
ERWENDETE
ES-Z
ELLEN
55
2.33.2
P
RAEPARATION
UND
A
NZUCHT
VON
F
EEDERZELLEN
56
2.33.3
E
LEKTROPORATION
UND
S
ELEKTION
VON
ES-Z
ELLEN
56
2.33.3.1
VORBEREITUNG
DER
ES-ZELLEN
FUER
DIE
ELEKTROPORATION
56
2.33.3.2
VORBEREITUNG
DER
DNA
UND
ELEKTROPORATION
57
2.33.3.3
KULTUR
UND
EXPANSION
RESISTENTER
KLONE
57
2.33.3.4
UEBERPRUEFUNG
DER
ES-ZELL-DNA
AUF
HOMOLOGE
REKOMBINATION
58
2.33.3.5
VERMEHRUNG
DER
POSITIVEN
ES-ZELLKLONE
58
2.33.4
A
UFZUCHT
DER
P
///?/
N
-A5-M
UTANTEN
59
2.34
P
RAEPARATION
VON
DNA
FUER
DIE
O
OCYTEN
-M
IKROINJEKTION
59
3
ERGEBNISSE
61
3.1
C
DNA-I
SOUERUNG
DES
PH
V
-A5-G
ENS
UND
A
BLEITUNG
DER
P
ROTEINSTRUKTUR
61
3.2
S
TRUKTUR
DES
FTO
?
LV
-A5-G
ENS
62
3.2.1
A
MPLIFIKATION
UND
S
EQUENZBESTIMMUNG
DER
C
DNA
UEBER
5'
-RACE
62
3.2.2
G
ENOMISCHE
S
OUTHERN
-B
LOT
-A
NALYSE
DES
E
PHRIN
-A5-G
ENS
64
3.2.3
I
SOLIERUNG
UND
K
ARTIERUNG
DER
X-P
HAGEN
65
3.3
E
XPRESSION
DES
PHAE
V
-A5-G
ENS
70
3.3.1
N
ORTHERN
-B
LOT
-A
NALYSE
70
3.3.2
E
MBRYONALE
E
XPRESSION
VON
E
PHRIN
-A5
70
3-3.3
EPHR1N-A5-EXMSSSVM
IM
ZENTRALNERVENSYSTEM
74
3.3.3.1
EPHRIN-A5-EXPRESSION
IN
HYPOTHALAMUS
UND
HYPOPHYSE
75
3.3.3.2
PN'N-A5-EXPRESSION
IN
CORTICALEN
STRUKTUREN
78
3.3.3.3
PNN-A5-EXPRESSION
IM
OLFAKTORISCHEN
SYSTEM
79
3.3.3.4
EXPRESSION
VON
EPBRIN-A5
IM
CEREBELLUM
82
3.4
V
ERGLEICHENDE
E
XPRESSIONSANALYSE
VON
E
PHBIN
-A5
UW
E
PHRIN
-A2
83
3.5
M
UTAGENISIERUNG
VON
E
PHRIN
-A5
84
3.5.1
S
TRATEGIE
DER
HOMOLOGEN
R
EKOMBINATION
84
3.5.2
K
LONIERUNG
DES
PGK
W*-M
UTAGENISIERUNGSKONSTRUKTS
86
3.5.3
D
IE
E
LEKTROPORATION
DES
PGK
A
,
EO
R
-K
ONSTRUKTES
88
3.5.4
D
IE
G
ENERIERUNG
VON
C
HIMAEREN
AUS
DEN
MUTAGENISIERTEN
ES-Z
ELLEN
89
3.5.5
K
LONIERUNG
DES
LAC
Z-PGK
A
'E
O
'
-M
UTAGENISIERUNGS
-
KONSTRUKTES
91
3.5.6
D
IE
E
LEKTROPORATIONDESMC
Z-PGK-(VE
OE
R
-K
ONSTRUKTES
93
3.5.7
D
IE
G
ENERIERUNG
VON
C
HIMAEREN
AUS
DEN
MUTAGENISIERTEN
ES-Z
ELLEN
93
3.6
A
NALYSE
DES
P
HAENOTYPS
PWR
/.
V
-A5
DEFIZIENTER
M
AEUSE
96
3.6.1
K
ONTROLLE
DES
FFL/?/N-A5-TRANSKRIPTS
BEI
DEN
M
UTANTEN
96
3.6.2
A
NALYSE
DER
W
URFGROEBEN
-
EMBRYONALE
L
ETALITAET
98
3.6.3
A
NALYSE
DER
D
EFEKTE
DES
ANTERIOREN
N
EURALROHRS
98
3.6.4
Z
ELLIDENTITAETSANALYSE
BEI
DEN
E
PHRIN
-A5
,,
SO
"
,
BO
-V
OETW
100
3.6.5
A
NALYSE
DER
E
NTWICKLUNG
DES
N
ERVENSYSTEMS
102
3.6.6
A
NALYSE
DES
RETINOCOLUCULAREN
S
YSTEMS
104
3.6.7
A
NALYSE
DER
THALAMOCORTICALEN
P
ROJEKTIONEN
105
3.6.8
D
EFEKTE
DES
C
EREBEUUMS
107
3.6.9
P
OSTNATALE
E
NTWICKLUNG
B
J
/FL?W-A5-DEFIZIENTER
M
AEUSE
108
3.7
E
XPRESSION
DER
E
PHRIN
-A-L
IGANDEN
IN
EVI
-M
UTANTEN
110
3.8
U
NTERSUCHUNGEN
ZUR
P
ROMOTORREGION
DES
E
PHRLV
-A5-G
ENS
113
3.8.1
C
OMPUTERGESTUETZTE
A
NALYSE
DER
P
ROMOTORREGION
113
3.8.2
K
LONIERUNG
DES
&WMV-A5-REPORTERKONSTRUKTES
115
3.8.3
E
XPRESSION
DES
R
EPORTERS
IN
TRANSGENEN
E
MBRYONEN
116
4
DISKUSSION
_
112
4.1
O
RGANISATION
DES
PHAEBV
-A5-G
ENS
119
4.2
E
XPRESSION
VON
E
PHRIN
-A5
120
4.2.1
E
MBRYONALE
E
XPRESSION
VON
E
PHRIN
-A5
122
4.2.2
FFLWA5-EXPRESSION
IN
H
YPOTHAIAMUS
UND
H
YPOPHYSE
123
4.2.3
FFLWA5-EXPRESSION
IN
CORTICALEN
S
TRUKTUREN
124
4.2.4
E
PHRIN
-A5-E
XPRESSIONIMOLFAKTORISCHEN
S
YSTEM
125
4.3
M
UTAGENISIERUNG
DES
E
PHMV
-A5-G
ENS
126
4.4
P
HAENOTYPISCHE
V
ERAENDERUNGEN
DER
E
PHW
-AJ^^-M
UTANTEN
128
4.4.1
D
EFEKTE
DES
N
EURALROHRS
128
4.4.2
W
EITERE
U
RSACHEN
EMBRYONALER
L
ETALITAET
130
4.4.3
A
NALYSE
DER
Z
ELLIDENTITAET
UEBER
MOLEKULARE
M
ARKER
131
4.4.4
A
NALYSE
DER
EMBRYONALEN
I
NNERVIERUNG
132
4.4.5
A
NALYSE
DER
RETINOCOLUCULAREN
P
ROJEKTIONEN
134
4.4.6
D
IE
F
UNKTION
VON
E
PHRIN
-A5
IN
DEN
THALAMOCORTICALEN
P
ROJEKTIONEN
138
4.4.7
A
NALYSE
DER
V
ERAENDERUNGEN
DES
C
EREBELLUMS
138
4.5
R
EGULATION
DES
E
PHRIN
-A5-G
ENS
4.5.1
A
NALYSE
DES
PWW
-A5-P
ROMOTORS
4.5.2
E
XPRESSION
VON
E
PHRIN
-A-L
IGANDEN
IN
V
/-M
UTANTEN
4.6
A
USBUCK
139
139
141
143
5
ZUSAMMENFASSUNG
144
6
LITERATURVERZEICHNIS
146
7
ANHANG
161
7.1
E
RMITTELTE
GENOMISCHE
S
EQUENZEN
7.1.1
E
RMITTELTE
YY
MV
-A5-P
ROMOTORSEQUENZ
7.1.2
E
RMITTELTE
S
EQUENZ
UM
E
XON
II
7.1.3
E
RMITTELTE
S
EQUENZ
UM
DIE
E
XONS
III/IV
7.1.4
E
RMITTELTE
S
EQUENZ
UM
E
XON
V
7.2
E
IN
-
UND
D
REIBUCHSTABEN
-C
ODE
FUER
A
MINOSAEUREN
161
161
163
164
164
164
8
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