Molekulare Untersuchungen zu den X-chromosomal vererbten Erkrankungen Retinitis pigmentosa und Hypophosphatämie:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2000
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|---|---|
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INHALTSVERZEICHNIS
A
EINLEITUNG
.
1
1.
A
UFGABENSTELLUNG
.
1
2.
D
AS
H
UMANGENOMPROJEKT
.
2
3.
S
TRATEGIEN
FUER
DIE
I
DENTIFIZIERUNG
VON
K
RANKHEITSGENEN
.
3
4.
H
YPOPHOSPHATAEMIEN
.
5
4.1
KLINISCHE
UND
GENETISCHE
HETEROGENITAET
.
5
4.2
KOPPLUNGSANALYSEN
UND
YAC-CONTIG
IN
DER
XLH-KANDIDATENREGION
.
6
4.3
IDENTIFIZIERUNG
VON
DELETIONEN
UND
ISOLIERUNG
EINES KANDIDATENGENS
FUER
DIE
XLH
.
7
4.4
MAUSMODELLE
DER
X-GEKOPPELTEN
HYPOPHOSPHATAEMIE
.
8
5.
D
IE
S
PERMIN
S
YNTHASE
.
10
5.1
BIOSYNTHESE
UND
FUNKTION
DER
POLYAMINE
.
10
5.2
GEN-STRUKTUR
.
11
6.
R
ETINOPATHIEN
.
12
6.1
AUFBAU
EINER
STAEBCHENZELLE
DER
RETINA
.
13
6.2
DIE
PHOTOTRANSDUKTIONSKASKADE
.
14
6.3
KLINISCHE
UND
GENETISCHE
HETEROGENITAET
.
15
6.4
DIE
CGMP-PHOSPHODIESTERASEN
DER
PHOTOREZEPTORZELLEN
.
17
B
MATERIAL
UND
METHODEN
.
19
1.
M
ATERIAL
.
19
1.1
DNA-RESSOURCEN
.
19
1.1.1
PATIENTEN
.
19
1.1.2
MAEUSE
.
20
1.1.3
COSMID-,
PI-,
PAC
UND
BAC-KLONE
.
20
1.1.4
PLASMIDE
.
21
1.2
ENZYME,
CHEMIKALIEN
UND
ANDERE
MATERIALIEN
.
21
1.2.1
ENZYME
UND
CHEMIKALIEN
.
21
1.2.2
KITS
.
23
1.2.3
CDNA-BIBLIOTHEKEN
UND
CDNAS
.
23
1.2.4
OLIGONUKLEOTIDE
.
23
2.
M
ETHODEN
.
24
2.1
DNA
UND
RNA-PRAEPARATION
.
24
2.1.1
EXTRAKTION
HOCHMOLEKULARER
DNA
AUS
VOLLBLUT
.
24
2.1.2
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
SCHWANZBIOPSAT
VON
MAEUSEN
.
24
2.1.3
ISOLIERUNG
VON
COSMID-,
PI,
PAC
UND
BAC-DNA
.
25
2.1.4
ISOLIERUNG
VON
RNA
AUS
GEWEBE
.
26
2.2
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
27
2.3
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
.
28
2.3.1
STANDARD-PCR
.
28
2.3.2
RT-PCR
UND
RT-YYNESTED
"
-PCR
.
28
2.3.3
RACE-PCR
.
29
2.3.4
VEKTOR-AZU-PCR
.
29
2.3.5
MULTIPLEX-PCR
.
30
2.4
ELEKTROPHORESEN
.
30
2.4.1
HORIZONTALE
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
VON
DNA
.
30
2.4.2
DENATURIERENDE
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
VON
RNA
MIT
FORMALDEHYD
.
31
INHALTSVERZEICHNIS
2.4.3
SSCP-ANALYSE
.
31
2.4.4
SEQUENZANALYSE
.
32
2.5
TRANSFER
VON
DNA
UND
RNA
AUF
EINE
NYLONMEMBRAN
.
33
2.5.1
SOUTHERN
UND
ZOO-BLOT
.
33
2.5.2
NORTHERN-BLOT
.
33
2.6
HYBRIDISIERUNG
.
34
2.6.1
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
.
34
2.6.2
HYBRIDISIERUNG
MIT
MARKIERTEN
DNA-SONDEN
.
35
2.7
KLONIERUNG
VON
DNA
.
35
2.7.1
HERSTELLUNG KOMPETENTER
BAKTERIENZELLEN
MIT
DER
CACH-METHODE
.
35
2.7.2
SPALTUNG
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
.
36
2.7.3
LIGATION
.
36
2.7.4
TRANSFORMATION
.
37
2.7.5
PRAEPARATION
REKOMBINANTER
PLASMID-DNA
.
37
2.8
WHOLE
MOUNT
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
(WISH)
VON
MAUSEMBRYONEN
UND
ORGANEN
.
38
2.8.1
SEKTION
UND
FIXIERUNG
.
38
2.8.2
CRNA
ODER
RIBOSONDE
.
38
2.8.3
HYBRIDISIERUNG
.
39
2.8.4
NACHWEIS
DER
MARKIERTEN
CRNA/MRNA-KOMPLEXE
.
40
3.
D
ATENBANKEN
UND
C
OMPUTERPROGRAMME
.
41
3.1
DATENBANKEN
IM
INTERNET
.
41
3.2
SUCHE
NACH
SEQUENZUEBEREINSTIMMUNGEN
UND
PROMOTOREN
.
41
C
ERGEBNISSE
-------------------------------------------------------------------------------------------------
42
1.
POSMONELLE
K
LONIERUNG
AM
B
EISPIEL
DES
PHEX-G
ENS
.
42
1.1
PHYSIKALISCHE
KARTE
DER
KRITISCHEN
REGION
IN
XP22
.
42
1.2
BESTAETIGUNG
DER
SELEKTIERTEN
CDNA-KLONE
ALS
KANDIDATENGEN
.
45
1.3
DAS
PHEX-CDNA
TRANSKRIPT
.
45
1.3.1
VERVOLLSTAENDIGUNG
DES
5'
UND
3
'-BEREICHS
DER
PHEX-CDNA
.
.
46
1.3.2
KLONIERUNG
DER
VOLLSTAENDIGEN
PHEX-CDNA
.
48
1.4
DAS
PHEX-GENPRODUKT
.
48
1.5
BESTAETIGUNG
DES
PHEX-GENS
ALS
KRANKHEITSGEN
BEI
PATIENTEN
MIT
XLH
.
50
1.5.1
MUTATIONSANALYSE
IM
PHEX-GEN
.
50
1.6
CHARAKTERISIERUNG
DER
MAUSMODELLE
HYP
UND
GY
.
54
1.6.1
KLONIERUNG
DES
MAUS
ORTHOLOGS
VON
PHEX
.
55
1.6.2
GENSTRUKTUR
DES
PHEX-GENS
UND
VERGLEICH
MIT
DEM
HUMANEN
ORTHOLOG
.
57
1.6.3
EXPRESSION
DES
MAUS
PHEX-GENS
.
58
1.6.3.1
EXPRESSIONSMUSTER
DES
PHEX-GENS
UEBER
RT-PCR
.
59
1.6.3.2
EXPRESSIONSMUSTER
DES
PHEX-GENS
UEBER
WHOLE
MOUNT
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
.
59
1.6.4
MUTATIONSANALYSE
DES
PHEX-GENS
IN
DER
HYP
UND
GY-MAUS
.
61
2.
P
OSITIONELLES
K
ANDIDATENGENVERFAHREN
AM
B
EISPIEL
DES
SMS-G
ENS
.
63
2.1
UNTERSUCHUNG
DER
GENOMISCHEN
REGION
DISTAL
DES
PHEX-GENS
.
63
2.2
DAS
MAUS
SMS-GEN
.
64
2.2.1
KLONIERUNG
UND
HYBRIDISIERUNG
DER
SMS-CDNA
.
64
2.2.2
GENOMISCHE
ORGANISATION
DES
SMS-GENS
.
64
2.3
BESTAETIGUNG
DES
KANDIDATENGENS
DURCH
MUTATIONSANALYSE
IM
SMS-GEN
.
65
2.3.1
BESTIMMUNG
DES
DISTALEN
DELETIONSBRUCHPUNKTS
IN
DER
MUTANTEN
GY
.
66
2.3.2
WEITERE
GENE
IN
DER
REGION
DISTAL
DES
SMS-GENS
.
68
2.4
EXPRESSION
DES
SMS-GENS
.
69
2.4.1
NACHWEIS
VON
SPERMIN
SYNTHASEAKTIVITAET
MITTELS
HPLC
.
69
2.4.2
NORTHERN-BLOT
ANALYSE
DES
SMS-GENS
.
71
INHALTSVERZEICHNIS
2.5
GENOTYP-ZPHAENOTYP-KORRELATION
IN
DER
GY-MAUS
.
72
3.
P
OSITIONSUNABHAENGIGES
K
ANDIDATENGENVERFAHREN
AM
B
EISPIEL
DES
PDED-G
ENS
.
72
3.1
KLONIERUNG
DES
HUMANEN
UND
DES
MAUS
PDED/PDED-GENS
.
73
3.1.1
ZN
SILICO
SUCHE
NACH
HUMANEN
UND
MAUS
PDED-/PDED-ESTS
IN
DATENBANKEN
.
73
3.1.2
MOLEKULARE
KLONIERUNG
DER
PDED
UND
PDED-CDNAS
.
73
3.1.3
EXPRESSION
DER
PDED-MRNA
.
76
3.2
EVOLUTIONAERE
KONSERVIERUNG
DES
PDED-GENS
.
77
3.2.1
SEQUENZHOMOLOGIEN
.
77
3.2.2
INTER-SPEZIES-HYBRIDISIERUNG
GENOMISCHER
ZOO-BLOTS
.
78
3.3
GENOMISCHE
STRUKTUR
DES
PDED-GENS
.
79
3.3.1
KARTIERUNG
DER
PAC-KLONE
UND
DER
PDED-CDNA
.
79
3.3.2
GENOMISCHE
ORGANISATION
DES
HUMANEN
PDED-GENS
.
80
3.4
KARTIERUNG
DES
PDED-GENS
UND
MUTATIONSANALYSE
.
81
D
DISKUSSION
.
.
.
82
1.
PHEX/P
HEX
-
EIN
G
EN
,
DAS
K
NOCHEN
YY
HAERTET
"
?
.
82
1.1
EXPRESSIONSMUSTER
DER
PHEX/PHEX-CDNA
.
82
1.2
DAS
PHEX-GENPRODUKT
.
84
1.3
MUTATIONEN
IM
HUMANEN
UND
IM
MAUS
PHEX-/PHEX-GEN
.
85
1.3.1
MUTATIONSANALYSE
BEI
PATIENTEN
MIT
XLH
UND
SPORADISCHER
HYPOPHOSPHATAEMIE
.
85
1.3.2
GENOTYP-ZPHAENOTYP-KOIRELATION
.
88
1.3.3
MUTATIONSANALYSE
IN
DEN
MAUSMODELLEN
HYP
UND
GY
.
89
1.4
WIRKUNGSMECHANISMUS
VON
MUTATIONEN
IM
PHEX/PHEX-GEN
.
89
1.5
HYPOTHETISCHE
FUNKTION
VON
PHEX/PHEX
.
90
2.
D
AS
S
MS
-G
EN
UND
SEINE
R
OLLE
IN
DER
GR
M
AUS
.
92
2.1
PSEUDOGENE
DES
SMS-/SMS-GENS
.
92
2.2
DIE
GY-MAUS
ALS
KNOCKOUT
MAUS
FUER
DAS
SMS-GEN
.
92
3.
D
AS
G
EN
DER
8-UE
DER
PDE6
ALS
K
ANDIDATENGEN
BEI
R
ETINOPATHIEN
.
94
3.1
DAS
PDED-GEN
EIN
HAUSHALTSGEN
.
94
3.2
VOLLSTAENDIGKEIT
DES
PDED-GENS
.
96
3.3
EVOLUTIONSBIOLOGISCHE
KONSERVIERUNG
DER
PDED
UND
HOMOLOGIE
ZU
HRG4
.
97
3.4
DIE
GENOMISCHE
STRUKTUR
DER
HUMANEN
PDED
IM
VERGLEICH
ZU
C27H5.1
.
99
3.5
PDED
EIN
KANDIDATENGEN
FUER
RETINOPATHIEN?
.
99
E
ZUSAMMENFASSUNG
.
101
F
LITERATURVERZEICHNIS
.103
A
BBILDUNGSVERZEICHNIS
.
117
T
ABELLENVERZEICHNIS
.
119
A
NHANG
.
120
D
ANKSAGUNG
.
123
L
EBENSLAUF
.
125
P
UBLIKATIONSLISTE
.
126
INHALTSVERZEICHNIS |
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