Interaktion und subzelluläre Lokalisation von Homeodomän-Transkriptionsfaktoren aus Arabidopsis thaliana:
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| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1999
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Autor: Ohnesorge, Stephanie
Jahr: 1999
Inhalt
Inhalt
Inhalt..........................................................................................................................1
Zusammenfassung....................................................................................................3
Summary...................................................................................................................6
1. Einleitung...............................................................................................................8
2. Material und Methoden........................................................................................14
2.1. Material.........................................................................................................14
2.1.1. Chemikalien und Enzyme.......................................................................14
2.1.2. .Kits .......................................................................................................14
2.1.3. Vektoren, Gene und Antiseren................................................................15
2.1.4. Oligonukleotide (Primer).........................................................................18
2.1.5. Bakterien- und Hefestämme...................................................................20
2.2. Methoden......................................................................................................21
2.2.1. Molekularbiologische Standardmethoden...............................................21
2.2.2. Arbeiten mit dem Hefe.Two Hybrid* System..........................................28
2.2.3. Transiente Genexpression in Pflanzenzellen..........................................32
2.2.4. Analyse von Proteinen............................................................................37
2.2.5. Arbeiten mit RNA....................................................................................41
3. Ergebnisse...........................................................................................................43
3.1. Charakterisierung von Interaktionspartnem...................................................43
3.1.1. Vorbereitungen für die ,Two Hybrid Suchansätze..................................44
3.1.2. „Yeast Two Hybrid Screen .....................................................................47
3.1.3. Charakterisierung der BEL1 / KNAT4 Interaktion....................................50
3.2. Subzelluläre Lokalisation von GFP-Fusionsproteinen....................................58
3.2.1. Subzelluläre Verteilung der Kontrollen....................................................59
3.2.2. Subzelluläre Lokaüsation der Homeodomänproteine KNAT4 / BEL1......62
3.2.3. Subzelluläre Lokalisation der Deletionen von KNAT4 und BEL1.............65
4. Diskussion...........................................................................................................70
4.1. Die Interaktion viraler Transportproteine mit pflanzlichen Proteinen..............70
4.2. Interaktionspartner des Transkriptionsfaktors KNAT4....................................71
4.3. Interaktionsbereich von KNAT4.....................................................................72
4.4. Interaktionsdomäne des Homeoctomänproteins BEL1...................................74
Inhalt
2
4.5. Regulierter Kerntransport von KNAT4 und BEL1...........................................75
4.6. Lokalisationsdomänen von KNAT4................................................................7f5
4.7. Lokalisationsdomänen von BEL1..................................................................79
4.8. Interzellulärer Transport von KNAT4 und BEL1.............................................81
4.9. Modell zur Regulation des Kerntransport von KNAT4 und BEL1...................83
5. Appendix..............................................................................................................85
5.1. Charakterisierung einer Tomaten Mosaik Virus (ToMV)-Mutante..................85
5.1.1. Kontrolle der systemischen Infektion des mutierten Virus.......................85
5.1.2. Intrazelluläre Lokalisation........................................................................87
5.1.3. Immunodetektion des Virus in inokulierten Blättern.................................87
5.2. Charakterisierung eines neuen Tymovirus aus Alliaria petiolata....................89
5.2.1. Reinigung des Alliaria-Vmjs....................................................................89
5.2.2. Elektronenmikroskopische Charakterisierung des Virus..........................90
5.2.3. Sequenzanalyse des Virusgenoms.........................................................91
5.2.4. Bestimmung des Wirtskreises.................................................................92
5.2.5. Proteinsequenzvergleich.........................................................................94
6. Anhang................................................................................................................97
6.1. Proteinsequenz von BEL1.............................................................................97
6.2. Proteinsequenz von KNAT4..........................................................................99
6.3. cDNA Sequenz des Alliaria-Vtrus................................................................100
6.4. Konstrukte...................................................................................................102
6.4.1. pUC19 Konstrukte................................................................................102
6.4.2 pGAD424 / pGBT9 Konstrukte..............................................................102
6.4.3. GFP Konstrukte....................................................................................103
6.5. Internet........................................................................................................104
6.5.1. Zugriffsnummern für Sequenzvergleiche...............................................104
6.5.2. Internet-Adressen.................................................................................104
6.6. Abkürzungen...............................................................................................105
7. Literatur..................................................................................................107
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