Der monoklonale Antikörper AG7 und das Spermatozoenantigen SAA-1: Gewebsspezifität und kontrazeptives Potential
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1999
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
.
1
I.
EINLEITUNG
.
2
1.
GRUNDLAGEN
.
2
2.
DIE
PHYSIOLOGIE
DER
FERTILISATION
.
4
A)
SPERMATOGENESE
.
4
B)
EPIDIDYMIS
(NEBENHODEN)
.
4
C)
KAPAZITATION
.
5
D)
CUMULUS
OOPHORUS
.
5
E)
AKROSOMENREAKTION
.
6
F)
FUSION
DER
PLASMAMEMBRAN
VON
SPERMATOZOON
UND
EIZELLE
.
7
3.
DER
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
AG7
DEFINIERT
DAS
SPERMATOZOENANTIGEN
SAA-1
.
8
4.
ZIELSETZUNG
UND
FRAGESTELLUNG
.
9
II.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
11
1.
MATERIAL
.
11
A.
FUER
IMMUNHISTOCHEMIE
.
11
1.
PBS
.
11
2.
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
AG7
.
11
3.
FITC-ANTIKOERPER
.
11
4.
MOPC-ANTIKOERPER
.
11
5.
VECTASTAIN
ABC
ELITE
KIT
.
11
6.
PEROXIDASE
SUBSTRATLOESUNG
.
11
7.
ZIEGENSERUM
.
12
8.
TRIS-PUFFER
.
12
9.
PROTEINASE
.
12
10.
TRYPSIN
.
12
11.
OBJEKTTRAEGER
.
13
12.
PHOTODOKUMENTATION
.
13
B.
FUER
ZELLKULTUR
.
13
L.AG7-KULTUR
.
13
2.
MOPC-KULTUR
.
13
3.
KULTURMEDIUM
.
14
4.
EINFRIERMEDIUM
.
14
5.
RADIOIMMUNASSAY
.
14
A)
PBS**
.
14
B)
BLOCKIERSERUM
.
14
C)
RADIOAKTIV
MARKIERTER
ANTIKOERPER
.
14
D)
MIKROTITERPLATTEN.
15
E)
WASCHSERUM
.
15
F)
FIXIERLOESUNG
.
15
C.
FUER
ANTIKOERPERREINIGUNG
.
15
1.
PBS*
.
15
2.
GLYCIN-LOESUNG
.
15
3.
AMMONIUMBICARBONAT-LOESUNG
.
15
4.
DIALYSIERMEMBRAN
.
16
5.
PROTEIN-G-SEPHAROSE-KUGELN
.
16
D.
FUER
PASSIVE
IMMUNISIERUNG
.
16
1.
HAM'S
F10
.
16
2.
PMSG/HCG
.
16
2.
METHODEN
.
17
A.
FUER
IMMUNHISTOCHEMIE
.
17
1.
PRINZIP
DER
IMMUNHISTOCHEMIE
.
17
2.
GEWEBEGEWINNUNG
.
18
3.
EINBETTUNG
UND
FIXIERUNG
VON
GEWEBE
.
18
A)
KRYOKONSERVIERUNG
.
18
B)
FORMALINFRXIERUNG
.
18
4.
REINIGUNG
UND
FIXIERUNG
VON
SPERMATOZOEN
.
19
5.
IMMUNPEROXIDASE-FAERBUNG
.
20
6.
IMMUNFLUORESZENZ-FAERBUNG
.
21
7.
AUSWERTUNG
.
21
B.
FUER
ZELLKULTUR
.
22
1.
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
.
22
2.
BESTIMMUNG
VON
VITALITAET
UND
ZELLZAHL
.
22
3.
GRENZVERDUENNUNGSANALYSE
.
22
4.
RADIOIMMUNASSAY
.
23
A)
BESCHICKEN
DER
RUNDBODENPLATTEN
.
23
B)
DURCHFUEHRUNG
DES
RADIOIMMUNASSAY
.
23
C.
FUER
ANTIKOERPERREINIGUNG
.
24
1.
PROTEINAUSFAELLUNG
.
24
2.
IMMUNAFFINITAETSSAEULE
.
24
3.
PROTEINMENGENBESTIMMUNG
.
26
4.
GEFRIERTROCKNUNG
.
26
D.
FUER
PASSIVE
IMMUNISIERUNG
.
27
1.
HYPERSTIMULATION
/
PASSIVE
IMMUNISIERUNG
DER
MAEUSE
.
27
2.
PRAEPARATION
DER
EILEITER
.
27
3.
EIZELLGEWINNUNG
.
28
4.
AUSWERTUNG
.
28
III.
ERGEBNISSE
.
29
1.
VORVERSUCHE
IMMUNHISTOCHEMIE
.
29
1.
DEFINIEREN
DER
KONZENTRATION
DES
1.
ANTIKOERPERS
.
29
2.
PRAEINKUBATION
DER
PARAFFIN-EINGEBETTETEN
GEWEBE
.
30
A)
MASKIERUNG
/
DENATURIERUNG
DES
ANTIGENS
.
30
B)
PROTEINASE
K
/
TRYPSIN
.
32
2.
IMMUNHISTOCHEMISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
MENSCHLICHEN
GEWEBE
.
33
3.
EXPRESSION
VON
SAA-1
WAEHREND DER
SPERMATOGENESE
.
36
4.
PASSIVE
IMMUNISIERUNG
.
37
1.
NACHWEIS
DER
FERTILITAET
MAENNLICHER
MAEUSE
.
37
2.
REPRODUZIERBARKEIT
DER
NACHGEWIESENEN
FERTILITAET
.
38
3.
REDUKTION
DER
FERTILISATIONSRATE
MIT
AG7
.
39
IV.
DISKUSSION
.
41
1.
EXPRESSION
VON
SAA-1
WAEHREND DER
SPERMATOGENESE
.
41
2.
GEWEBSSPEZIFITAET
DES
AG7-EPITOPS
DES
SPERMATOZOENANTIGENS
SAA-1
.
42
1.
FIXIERUNG
/
EINBETTUNG
.
43
2.
CHARAKTERISIERUNG
DER
GEWEBSSPEZIFITAET
ANDERER
ANTIKOERPER
GEGEN
SPERMATOZOENANTIGENE
.
44
3.
PASSIVE
IMMUNISIERUNG
.
46
1.
FERTILITAETSHEMMENDE
EFFEKTE
.
46
2.
ANTIKOERPERVERTEILUNG
IM
ORGANISMUS
NACH
INTRAPERITONEALER
APPLIKATION
.
52
4.
IMMUNKONTRAZEPTION
.
54
1.
VORAUSSETZUNGEN
.
54
2.
BEISPIELE
FUER
AKTIVE
IMMUNISIERUNG
.
56
5.
SPERMATOZOENANTIGENE
ALS
KONTRAZEPTIVE
VAKZINE
.
57
1.
VORAUSSETZUNGEN
.
57
2.
BEISPIELE
FUER
EINE
AKTIVE
IMMUNISIERUNG
MIT
SPERMATOZOENANTIGENEN
AM
TIERMODELL
.
59
V.
ZUSAMMENFASSUNG
UND
SCHLUSSFOLGERUNGEN
.
61
VI.
LITERATURVERZEICHNIS
.
62
VII.
LEBENSLAUF.
.
71 |
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