Mutationsanalyse des Tumorsuppressorgenes CDKN2 bei hepatozellulären Karzinomen:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1999
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Heidelberg, Univ., Diss., 2000 (Nicht für den Austausch) |
| Beschreibung: | 65 Bl. Ill., graph. Darst. : 30 cm |
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 5
1. EINLEITUNG
1.1 EINFUEHRUNG IN DIE MOLEKULARGENETIK VON TUMOREN 7
1.2 DAS TUMORSUPPRESSORGEN
CDKN2 9
1.3 DAS HEPATOZELLULAERE KARZINOM
1.3.1 KLINISCHES ERSCHEINUNGSBILD 10
1.3.2 ZYTOGENETISCHE VERAENDERUNGEN IN HCC 11
1.4 METHODEN DER GENOMANALYSE
1.4.1 POLYMERASE-KETTENREAKTION 12
1.4.2
SSCP
(SINGLE STRAND CONFORMATION POLYMORPHISM)-ANALYSE 13
1.4.3 DNS-SEQUENZIERUNG 14
1.5 ZIELSETZUNG 15
2. MATERIAL UND METHODIK
2.1 VERWENDETE MATERIALIEN
2.1.1 CHEMIKALIEN 16
2.1.2 RADIOCHEMIKALIEN 16
2.1.3 KITS 17
2.1.4 ENZYME 17
2.1.5 DNS-MARKER UND DNTPS 17
2.1.6 OLIGONUKLEOTIDE (PRIMER) 17
2.1.7 FILME UND KASSETTEN 18
2.1.8 GEFAESSE UND ROEHRCHEN 18
2.1.9 GERAETE 18
2.1.10 V ERSCHIEDENES 19
2.2 PUFFER UND LOESUNGEN 19
2.3 TUMOR-DNS
2.3.1 ALLGEMEINE ANGABEN 21
2.3.2 KLINISCHE UND HISTOPATHOLOGISCHE ANGABEN 21
2.4 REFERENZ-DNS 22
2.5 PRAEPARATION DER KULTURZELLEN 23
2.6 DNS-EXTRAKTION
2.6.1 DNS-EXTRAKTION AUS TUMORGEWEBE 23
2.6.2 DNS-EXTRAKTION AUS KULTURZELLEN 24
2.7 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 24
2.8 PHOTOMETRISCHE KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUKLEINSAEUREN 24
2.9 POLYMERASE-KETTENREAKTION
2.9.1 STANDARD PCR- ANSATZ 25
2.9.2 STANDARD PCR- LAUF 26
3
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.10 SEMIQUANTITATIVE PCR-ANALYSE 26
2.11 RADIOAKTIVE SSCP- ANALYSE
2.11.1 PCR-ANSATZ FUER DIE SSCP-ANALYSE 27
2.11.2 DENATURIERUNG 27
2.11.3 SSCP-GELELEKTROPHORESE 27
2.12 NICHT-RADIOAKTIVE SSCP
2.12.1 DURCHFUEHRUNG 28
2.12.2 SILBERFAERBUNG 28
2.13 DNS-SEQUENZANALYSE
2.13.1 AUFREINIGUNG DER PCR-PRODUKTE 29
2.13.2 SEQUENZIERUNGSREAKTION 30
2.13.3 DENATURIERUNG 30
2.13.4 AUTOMATISCHE DNS-SEQUENZANALYSE 30
3. ERGEBNISSE
3.1 DNS-EXTRAKTION 32
3.2 PHOTOMETRISCHE KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUKLEINSAEUREN 32
3.3 AMPLIFIKATION VON DNS-FRAGMENTEN MITTELS DER PCR 32
3.4 SEMIQUANTITATIVE PCR-ANALYSE 35
3.5 SSCP-ANALYSE DES GENES
CDKN2 36
3.6 AUFREINIGUNG DER PCR-PRODUKTE 40
3.7 MUTATIONSANALYSE MITTELS DIREKTER DNS-SEQUENZIERUNG 40
4. DISKUSSION
4.1 ALLGEMEINES 43
4.2 DISKUSSION DER ERGEBNISSE UNTER EINBEZIEHUNG DER ANGEWANDTEN
METHODEN
4.2.1 DNS-EXTRAKTION 43
4.2.2 PHOTOMETRISCHE KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUKLEINSAEUREN 44
4.2.3 AMPLIFIKATION VON DNS-FRAGMENTEN MITTELS DER PCR 44
4.2.4 SEMIQUANTITATIVE PCR-ANALYSE 45
4.2.5 SSCP-ANALYSE DES GENES
CDKN2 46
4.2.6 MUTATIONSANALYSE MITTELS DIREKTER DNS-SEQUENZIERUNG 48
4.3 SCHLUSSFOLGERUNG 48
5. ZUSAMMENFASSUNG 50
6. LITERATURVERZEICHNIS 51
7. EIGENE PUBLIKATIONEN 63
8. LEBENSLAUF 64
9. DANKSAGUNG 65
4 |
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