Morphologische und biochemische Charakterisierung pankreatischer Sternzellen: Identifizierung polypeptidartiger Wachstumsfaktoren als fibrogene Mediatoren dieser Zellen
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| Format: | Buch |
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1999
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I
INHALTSVERZEICHNIS
I. EINLEITUNG
1
I. I. MODELLVORSTELLUNGEN ZUR PATHOGENESE DER CHRONISCHEN PANKREATITIS 1
I. 2. VORKOMMEN UND AUFGABEN DER FETTSPEICHERZELLEN 3
II. PROBLEMSTELLUNG
5
III. MATERIAL UND METHODEN
6
III. 1. MATERIAL 6
III. 1. 1. REAGENZIEN UND LABORAUSSTATTUNG 6
III. 1.2. PUFFER UND LOESUNGEN - 8
III. 1.3. ANTIKOERPER UND FLUORESZENZFARBSTOFFE 12
III. 2. METHODEN 13
III. 2.1. ZELLISOLICRUNG 13
III. 2. 2. IDENTIFIZIERUNG, AUSSAAT UND KULTIVIERUNG PANKREATISCHER
STEMZELLEN 15
III. 2. 3. TRYPSINIERUNG DER ZELLKULTUR 15
III. 2.4. IMMUNZYTOLOGIE 16
III. 2.5. IMMUNHISTOLOGIE 17
III. 2.6. OIL-RED-O-FAERBUNG 18
III. 2. 7. BESTIMMUNG DER RETINOIDE 19
III. 2. 8. ELEKTRONENMIKROSKOPIE UND LICHTMIKROSKOPIE 19
III. 2. 9. IMMUNPEROXIDASEFARBUNG VON INKORPORIERTEM BROMODEOXY-URIDIN
20
III. 2.10. QUANTITATIVE MESSUNG DER BRDU-INKORPORATION MITTELS
ZEITAUFGELOESTER
FLUORESZENZ 21
III. 2. 11. FLUOROMETRISCHE DNA-MESSUNG MIT BISBENZIMID 22
III. 2. 12. MESSUNG DER FIBRONEKTINKONZENTRATION IM ZELLKULTURUEBERSTAND
23
III. 2. 13. RADIOAKTIVE MARKIERUNG DER CDNA-FRAGMENTPROBEN 25
III. 2. 14. ISOLIERUNG DER GESAMT-RNA 25
III. 2. 15. RNA-AGAROSE-EIEKTROPHORESE 26
III. 2. 16. NORTHERN BLOT 26
III. 2. 17. STATISTISCHE VERFAHREN 28
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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II
IV. ERGBNISSE
29
IV. 1. NACHWEIS PANKREATISCHER STEMZELLEN IN NORMALEN UND FIBROTISCHEN
PANKREATA VON MAUS, RATTE UND MENSCH 29
IV. 2. ISOLIERUNG DER PANKREATISCHEN STEMZELLEN 33
IV. 3. MORPHOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER PANKREATISCHEN STEMZELLEN 33
IV. 4. BIOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG DER PANKREATISCHEN STEMZELLEN 39
IV. 5. EFFEKTE VON WACHSTUMSFAKTOREN AUF DIE PROLIFERATION
PANKREATISCHER
STEMZELLEN 44
IV. 5. 1. QUALITATIVER NACHWEIS DER BRDU-INKORPORATION 44
IV. 5. 2. QUANTITATIVE MESSUNG DER BRDU-INKORPORATION 47
IV. 5.3. FLUOROMETRISCHE DNA-BESTIMMUNG 48
IV. 6. EFFEKTE VON WACHSTU MS FAKTOREN AUF DIE EXTRAZELLULAERE
MATRIXSYNTHESE
PANKREATISCHER STEMZELLEN ~ 50
IV. 6. 1. OPTISCHE DARSTELLUNG DER FIBRORIEKTIN- UND KOLLAGENSYNTHESE 50
IV. 6. 2. QUANTITATIVE MESSUNG DER FIBRONEKTINKONZENTRATION IM
ZELLKULTUR-
UEBERSTAND 54
IV. 6. 3. EXPRESSION DER MRNA VON FIBRONEKTIN, TYP I UND III KOLLAGEN
UND LAMININ 57
V. DISKUSSION
58
V. 1. BEDEUTUNG DER PANKREATISCHEN STEMZELLEN FUER DIE PANKREASFIBROSE 58
V. 2. BEDEUTUNG (1ER WACHSTUMSFAKTOREN FUER DIE BINDEGEWCBSSYNTHESE
UND DAS PROLIFERATIONSVERHALTEN PANKREATISCHER STEMZELLEN 63
V. 3. MODEL DER PANKREASFIBROSE 69
VI. ZUSAMMENFASSUNG
72
VII. LITERATUR
74
VIII. VEROEFFENTLICHUNGEN
91
IX. DANKSAGUNG
92 |
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