Untersuchungen zur Biosynthese von aktiviertem Inositolphosphat:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
[s.l.]
[s.n.]
1999
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: Düsseldorf, Univ., Diss., 1999 |
| Beschreibung: | 78 S. graph. Darst. : 21 cm |
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
ALLGEMEINES
UEBER
DIABETES
MELLITUS,
INSULIN,
SECOND
MESSENGER
UND
CPIP
.
1
1.2.
ZIEL
DER
ARBEIT
.
6
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
7
(2.A.:
BIOCHEMISCHER
TEIL)
.
7
2.1
.A.
MATERIALIEN
.
7
2.1.1.A.
CHEMIKALIEN
.
7
2.1.2.A.
GERAETE
UND
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
8
(2.B.:
CHEMISCHER
TEIL)
.
9
2.1.B.
MATERIALIEN
.
9
2.1.1.B.
CHEMIKALIEN
.
9
2.1.2.B.
GERAETE
UND
ANALYTIK
.
9
2.1.2.1
.B.
CHROMATOGRAPHIE
.
9
2.1.2.2.B.
SPEKTROSKOPIE
.
10
2.2.
METHODEN
.
10
2.2.1.
VERSUCHSTIERE
.
10
2.2.2.
HERSTELLUNG
DES
NEUEN
INOSITOL-PHOSPHAT-PRECURSORS
UND
DES
NEUEN
INOSITOL-PHOSPHATES
(N-IP)
AUS
RATTENLEBER
.
10
2.2.3.
GELCHROMATOGRAPHISCHE
REINIGUNG
DES
N-IP-PRECURSORS
UND
DES
N-IP
AN
SEPHADEX
G1
5
.
11
2.2.4.
C-PIP
BIOSYNTHESE-TEST
.
11
2.2.5.
CHROMATOGRAPHISCHE
TRENNUNG
VON
3
H-PGE
I
UND
3
H-CPIP
.
12
2.2.6.
AUSWERTUNG
DER
ERHALTENEN
FRAKTIONEN
AUS
DER
ADSORPTIONS-CHROMATOGRAPHIE
.
12
2.2.7.
ISOLIERUNG
VON
RATTEN-LEBERPLASMAMEMBRANEN
(MODIFIZIERTE
METHODE
NACH
WASNER)
.
13
2.2.8.
PROTEINBESTIMMUNG
(NACH
SMITH
ET
AL.,
1985)
.
14
2.2.9.
ZUR
LOKALISIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
N-IP
PRECURSORS
UND
DES
FUER
DIE
AKTIVIERUNG
BENOETIGTEN
ENZYMES
.
14
2.2.10.
DIFFERENTIALZENTRIFUGATION
ZUR
GEWINNUNG
DES
PARTIKULAEREN
ENZYMES
FUER
DIE
AKTIVIERUNG
VON
N-IP-PRECURSOR
.
14
2.2.11.
DARSTELLUNG
DES
AKTIVIERTEN
INOSITOLPHOSPHATES
(N-IP)
.
16
2.2.12.
ZUR
LADUNGSCHARAKTERISIERUNG
DES
G-15
GEREINIGTEN
N-IP
PRECURSORS
.
16
2.2.13.
PRAEPARATION
UND
ISOLIERUNG
VON
FETTZELLEN
.
16
2.2.14.
MESSUNG
DES
DESOXYGLUCOSE-TRANSPORTS
.
17
2.2.14.1.
EINFLUSS
VON
WORTMANNIN
AUF
DEN
GLUCOSE-TRANSPORT
IN
ADIPOZYTEN.
18
2.2.14.2.
STIMULIERUNG
DES
DESOXYGLUCOSE-TRANSPORTS
DURCH
INSULIN
.
18
2.2.14.3.
STIMULIERUNG
DES
DESOXYGLUCOSE-TRANSPORTS
DURCH
CPIP
.
18
2.2.15.
PRAEPARATIVE
TRENNUNG
VON
3
H-PGE
I
UND
3
H-CPIP
BZW.
3
H-PIP
.
18
2.2.16.
GELFILTRATION
AN
SEPHADEX
G15
DES
DURCH
ANIONENAUSTAUSCHER-CHROMATOGRAPHIE
ANGEREICHERTEN
3
H-PIP
.
19
2.2.16.1.
CHARAKTERISIERUNG
DER
SPALTBARKEIT
VON
PIP
IN
GEGENWART
VON
PERJODSAEURE
.
19
2.2.16.2.
BESTIMMUNG
DER
GLUCOSEKONZENTRATION
MITTELS
HEXOKINASE
UND
GLUCOSE-6-PHOSPHAT-DEHYDROGENASE
NACH
SCHMIDT
.
19
2.2.17.
SYNTHESEMETHODEN:
BESCHREIBUNG
DER
VERWENDETEN
REAKTIONSTYPEN
.
20
2.2.17.1.
GRUNDSAETZLICHES
.
20
2.2.17.2.
PHOSPHORYLIERUNG
VON
INOSITOLDERIVATEN
.
20
2.2.17.3.
HYDROGENOLYSE
VON
BENZYLGRUPPEN
.
21
2.2.17.4.
SONSTIGE
ARBEITSMETHODEN
.
21
2.2.18.
SYNTHESEN:
.
21
2.2.18.1.
DARSTELLUNG
VON
RAC-1,4-MYO-LNOSITOLBISPHOSPHAT
.
21
2.2.18.2.
DARSTELLUNG
VON
RAC-LNOSITOL-1,2-CYCLO-4-BISPHOSPHAT
.
22
2.2.18.3.
DARSTELLUNG
VON
RAC-LNOSITOL-1,2-CYCLO-5-BISPHOSPHAT
.
22
2.2.18.4.
DARSTELLUNG
VON
RAC-1,6-MYO-LNOSITOLBISPHOSPHAT
.
23
2.2.18.4.1.
DARSTELLUNG
VON
RAC-2,3-4,5-DI-O-CYCLOHEXYLIDEN-MYO-LNOSITOL
1,6-BIS-(DI-BENZYL)-PHOSPHAT
.
23
2.2.18.4.2.
DARSTELLUNG
VON
RAC-1,6-MYO-LNOSITOL-BISPHOSPHAT
.
24
2.2.19.
DARSTELLUNG
VON
RAC-LNOSITOL-1,2-CYCLO-6-BISPHOSPHAT
.
25
2.2.20.
DARSTELLUNG
VON
D-2,3-MYO-LNOSITOLBISPHOSPHAT
.
26
2.2.20.1.
DARSTELLUNG
VON
D-1,4,5,6-TETRA-O-BENZYL-MYO-LNOSITOL
2,3-BIS
(DIBENZYL)-PHOSPHAT
.
26
2.2.20.2.
DARSTELLUNG
VON
D-2,3-MYO-LNOSITOLBISPHOSPHAT
.
27
2.2.21.
DARSTELLUNG
VON
D-MYO-LNOSITOL-1,2-CYCLO-3-BISPHOSPHAT
.
)
.
27
3.
ERGEBNISSE
.
28
3.1.
DIE
AUSGANGSSITUATION
VON
N-IP
.
28
3.2.
NACHARBEITUNG
DER
N-IP-SYNTHESE
.
28
3.3
AUFSTELLUNG
EINER
BIOSYNTHESE-GLEICHUNG
VON
N-IP
.
29
3.4.
INKUBATIONSZEIT
.
31
3.5
ENZYMABHAENGIGKEIT
.
32
3.6.1.
GTP-ABHAENGIGKEIT
.
33
3.7.
EINSATZ
VERSCHIEDENER
NUKLEOTIDE
.
34
3.8.
EINSATZ
VERSCHIEDENER
KAEUFLICHER
INOSITOLPHOSPHATE
ANSTELLE
VON
N-IP-PRECURSOR
IN
DEN
N-IP-BIOSYNTHESE-TEST
.
35
3.9.
GELFILTRATION
DES
N-IP-PRECURSORS
UEBER
EINE
SEPHADEX
G15-SAEULE
.
36
3.10.
ZUR
LADUNGSCHARAKTERISIERUNG
DES
G-15
GEREINIGTEN
N-IP-PRECURSORS
.
38
3.11.
ZUR
STABILITAET
BZW.
LABILITAET
DES
PRECURSORS
.
39
3.12.
INAKTIVIERUNG
DES
N-IP-PRECURSORS
DURCH
PHOSPHODIESTERASE
.
42
3.13.
FRAGE
NACH
INOSITOLBISPHOSPHAT-ISOMEREN
ALS
MOEGLICHE
N-IP-PRECURSOR-SUBSTRATE
.
44
3.13.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
SPALTBARKEIT
VON
PIP
IN
GEGENWART
VON
PERJODSAEURE
(HSIOE).
45
3.13.2.
HEMMUNGSEFFEKTE
DES
WORTMANNINS
AUF
DEN
GLUCOSETRANSPORT
.
47
3.14.
CHEMISCHE
SYNTHESE
VERSCHIEDENER
INOSITOLPHOSPHATE
.
50
3.14.1.
INOSITOLE
-
NOMENKLATUR
UND
STRUKTUR
.
50
3.14.2.
SYNTHESE
VON
RAC-MYO-LNOSITOL-1,2-CYCLO-4-BISPHOSPHAT
.
52
3.14.3.
SYNTHESE
VON
RAC-MYO-LNOSITOL-1,2-CYCLO-5-BISPHOSPHAT
.
55
3.14.4.
SYNTHESE
VON
RAC-MYO-LNOSITOL-1,2-CYCLO-6-BISPHOSPHAT
.
55
3.14.5.
SYNTHESE
VON
D-MYO-LNOSITOL-1,2-CYCLO-3-BISPHOSPHAT
.
57
3.15.
EINSATZ
DER
CHEMISCH
HERGESTELLTEN
INOSITOLPHOSPHATE
IN
DIE
N-IP
BIOSYNTHESE58
4.
DISKUSSION
.
60
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
64
6.
LITERATUR
.
67
7.
ANHANG
.
77
7.1.
VERZEICHNIS
DER
ABBILDUNGEN
.
'N
7.2.
VERZEICHNIS
DER
TABELLEN
.
78 |
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