Mechanismen der Toxoplasma-gondii-vermittelten Inhibierung der Apoptose in humanen Wirtszelllinien:
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2000
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INHALT
INHALT
1 EINLEITUNG 1
1.1
TOXOPLASMA GONDII:
LEBENSZYKLUS, EPIDEMIOLOGIE UND MEDIZINISCHE
BEDEUTUNG 1
1.2 INTERAKTION VON
T. GONDII
MIT SEINER WIRTSZELLE 3
1.3. DER ZELLTOD 4
1.4 VERAENDERUNG DER WIRTSZELLAPOPTOSE DURCH INFEKTIONSERREGER 8
1.5 ZIELSETZUNG 10
2 MATERIAL UND METHODEN 12
2.1 MATERIAL ~ 12
2.1.1 GERAETE 12
2.1.2 MEDIEN UND VERBRAUCHSMATERIALIEN FUER DIE ZELLKULTUR 13
2.1.2.1 MEDIEN UND DEREN ZUSAETZE 13
2.1.2.2 ZELLLINIEN 13
2.1.3 CHEMIKALIEN UND REAGENZIEN 14
2.1.4 ANTIKOERPER 16
2.2 METHODEN 18
2.2.1 ZELLKULTUR 18
2.2.1.1 KULTUR UND ISOLIERUNG VON
T. GONDII 18
2.2.1.2 KULTUR DER WIRTSZELLLINIEN 18
2.2.1.3 ISOLIERUNG UND KULTUR VON MURINEN KNOCHENMARKSMAKROPHAGEN (KMM)
20
2.2.1.4 EINFRIEREN UND AUFTAUEN VON ZELLEN 21
2.2.1.5 INDUKTION VON APOPTOSE UND INFEKTION MIT 7". GOND/V 21
2.2.2 HITZEINAKTIVIERUNG UND UV-BESTRAHLUNG VON
T. GONDII 22
2.2.3 HERSTELLUNG VON T.
GONDII-ANTIGENLYSAT 23
2.2.4 DNS-FRAGMENTATIONSTEST 24
2.2.5 IMMUNFLUORESZENZFAERBUNGEN 25
2.2.5.1 APOPTOSE-UND
TOXOPLASMA-NACHWEIS 25
2.2.5.2 CYTOCHROM C-NACHWEIS IN APOPTOTISCHEN UND INFIZIERTEN ZELLEN 27
2.2.6 VITALITAETSFAERBUNG MIT TRYPANBLAU 27
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALT
2.2.7 ELECTROMOBILITY SHIFT ASSAY MIT NFICB-SPEZIFISCHEN
OLIGONUKLEOTIDPROBEN 27
2.2.8 SDS-GELELEKTROPHORESE 31
2.2.9 WESTERN BLOTTING UND IMMUNFAERBUNG 33
2.2.10 NACHWEIS DER SUBZELLULAEREN VERTEILUNG VON CYTOCHROM C IM
IMMUNBLOT 35
2.2.11 INHIBIERUNGSVERSUCHE VON MCL-1 35
2.2.12 STATISTIK 36
3 ERGEBNISSE 37
3.1 EFFEKT VON
T. GONDII
AUF DIE APOPTOSE UNTERSCHIEDLICHER WIRTSZELLLINIEN 37
3.2 APOPTOSEINHIBIERUNG DURCH
T. GONDII
IN HL-60- UND U937-ZELLEN 39
3.2.1 UNTERSUCHUNGEN AUF ZELLPOPULATIONSEBENE 39
3.2.2 UNTERSUCHUNG DER APOPTOSEBEEINFLUSSUNG AUF EINZELZELLEBENE 42
3.3 DER EINFLUSS VON INAKTIVIERTEN
T. GONDII
UND ANTIGEN-EXTRAKTEN AUF DIE
WIRTSZELLAPOPTOSE 45
3.4 MECHANISMEN DER
T.
GONCF/V-INDUZIERTEN INHIBIERUNG DER WIRTSZELL
APOPTOSE 47
3.4.1 NUKLEAERER FAKTOR
KB (NFKB) 47
3.4.2 HITZESCHOCKPROTEIN 60/65 (HSP 60/65) 49
3.4.3 CASPASEN 50
3.4.4 POLY-(ADP-RIBOSE) POLYMERASE (PARP) 53
3.4.5 NOVEL PROTEINKINASE C 8 (NPKQ 8) 54
3.4.6 CYTOCHROM C 55
3.4.7 PROTEINE DER BCL-2-FAMILIE 57
3.4.8 INHIBIERUNGSVERSUCHE VON MCL-1 59
4 DISKUSSION 63
4.1 DIE BEEINFLUSSUNG DER WIRTSZELLAPOPTOSE 63
4.2 VORAUSSETZUNGEN SEITENS DES PARASITEN ZUR INHIBIERUNG DER
WIRTSZELLAPOPTOSE 67
4.3 ZELLBIOLOGISCHE MECHANISMEN DER INHIBIERUNG DER WIRTSZELLAPOPTOSE
DURCH
T. GONDII
68
INHALT
5 ZUSAMMENFASSUNG 79
6 SUMMARY 82
7 LITERATUR 85
8 ANHANG 97 |
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